[논문]현토단(玄兎丹)의 RAW 264.7 대식 세포에서의 항염증 효과에 관한 연구

김마룡; 강옥화; 공룡; 서윤수; 주전; 김상아; 김은수; 신민아; 이영섭; 권동렬

doi:10.6116/kjh.2017.32.2.77.

현토단(玄兎丹)의 RAW 264.7 대식 세포에서의 항염증 효과에 관한 연구
The study of anti-inflammatory effect of Hyeonto-dan extract in RAW 264.7 macrophage 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.32 no.2, 2017년, pp.77 - 85

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : This study aimed to investigate the unknown mechanisms behind the anti- inflammatory activity of Hyeonto-dan(HT) 70% ethanol extract on LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Methods : Cells were treated with Hyeonto-dan 1 h prior to addition of 200 ng/mL of LPS. Cell viability was measured by the MTS assay. Nitric oxide levels were determined by the Griess assay. $PGE_2$ were measured using EIA kit. Pro-inflammatory cytokine production was measured by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of COX-2, iNOS, and MAPKs was investigated by Western blot, qRT-PCR. $NF-{\kappa}B$/p65 localization and interaction of the TLR-4 receptor with LPS was examined by immunofluorescence assays. Results : Hyeonto-dan had no cytotoxicity at the measured concentration. Hyeonto-dan inhibited NO production and pro-inflammatory cytokines such as IL-6, $TNF-{\alpha}$, and PGE2 as well as the protein and mRNA expression of iNOS and COX-2. Moreover, Hyeonto-dan inhibited the interaction between LPS and TLR-4 in murine macrophages. It suppressed phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK 1/2), c-jun N-terminal kinase (JNK 1/2) and p38. Finally, it inhibited translocation of $NF-{\kappa}B$ in response to competitive LPS. Conclusions : Based on the results of this study, Hyeonto-dan inhibited the binding of TLR-4 receptor to LPS and inhibited the phosphorylation of extracellular signaling pathway MAPKs. These inhibitory effects are thought that the amount of $NF-{\kappa}B$ delivered to the nucleus was decreased and the inflammatory reaction was prevented by decreasing the production of LPS-induced $PGE_2$, NO, IL-6 and $TNF-{\alpha}$.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

玄兎丹에 대한 연구 논문이 거의 없기에 저자는 LPS로 유발시킨 RAW 264.7 cell 염증 모델에서 현토단의 항염증 효과를 구명하고자 실험을 진행하였고, 유의한 결과를 얻었기에 보고 하는 바이다.

제안 방법

현토단의 염증반응 억제 효과를 알아보기 위해 LPS를 처리한 RAW 264.7 세포에서 NO, PGE₂의 생성, iNOS, COX-2의 발현, 염증성 사이토카인인 IL-6와 TNF-α의 분비, 신호전달 기전을 알아보기 위해 세포내 신호전달 단백질인 MAPK의 활성 및 TLR-4 활성 정도를 측정하여 다음과 같은 결론을 얻었다.

대상 데이터

설치류 대식 세포주는 한국세포주 은행으로부터 분양받았다. RAW 264.7세포는 100 U/㎖의 페니실린과 100 ㎎/㎖의 스트렙토마이신을 첨가하고 10% FBS을 첨가한 RPMI 1640 배지에서 37℃의 온도, 5% CO₂의 습한 대기 조건으로 배양하였다.
설치류 대식 세포주는 한국세포주 은행으로부터 분양받았다. ;RAW 264.7세포는 100 U/㎖의 페니실린과 100 ㎎/㎖의 스트렙토마이신을 첨가하고 10% FBS을 첨가한 RPMI 1640 배지에서 37℃의 온도, 5% CO₂의 습한 대기 조건으로 배양하였다.

데이터처리

통계분석은 Scheffe’s test법을 따라 ANOVA를 실행하였다. 모든 실험은 3회 이상 반복적으로 이루어졌으며, 실험결과는 각 항목에 따라 SPSS statistics 22 software (SPSS Inc. Chicago, IL, USA)를 사용하여 평균치 ± 표준편차 (SD)를 구하여 신뢰 수준 P < 0.05에서 통계적 유의성을 평가하였다.

성능/효과

이러한 결과로 미루어 보아 현토단은 대식세포에 작용하여 LPS와 경쟁적으로 작용함으로서 TLR4-NF-κB 기전을 저해하여 MAPKs의 인산화 활성을 떨어트려 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하고 NO와 PGE₂,IL-6,TNF-α의 생성을 억제함으로서 항염증 효과를 나타내었다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	염증은 무엇인가?	염증은 생체의 세포나 조직이 어떠한 원인에 의하여 손상을 받으면 면역세포가 이를 인지하여 다양한 염증매개물질을 분비함으로써 몸을 보호해주는 보호기전이다1,2). 염증반응에 관여하는 주요 세포는 macrophage로 알려져 있으며, macrophage는 여러 자극이나 면역세포들이 분비하는 cytokines, hydrogen peroxide, viruses, antigen 등에 의해 활성화되어 proinflammatory cytokines, nitric oxide (NO)와 prostaglandin E2 (PGE2)를 생성함으로써 통증, 열, 부종 등의 염증 반응을 유발한다2).
	염증반응 유발시 nuclear factor-κB는 IKK와 어떤 상호작요을 통해 cytokines의 분비를 조절하는가?	염증반응을 유발하는 cytokines, iNOS, COX-2의 발현은 전사인자인 nuclear factor-κB (NF-κB)에 의해 조절이 된다고 보고되고 있다3). NF-κB의 활성은 inhibitor of κB (IκB) 와의 결합에 의해 조절되는데 활성화되지 않은 상태에서는 cytosol에서 NF-κB가 IκB 와 결합하여 불활성된 형태로 존재한다4). 그러나 macrophage가 LPS와 같은 자극원에 의해 자극을 받게 되면, IκB kinase (IKK)는 IκB의 serine 32와 serine 36을 인산화 시키고, 인산화된 IκB는 NF-κB와 분리되어 proteasome에 의해 분해된다5,6). IκB와 분리된 NF-κB는 핵내로 이동하여 TNF-α, IL-6, IL-1β, COX-2, iNOS의 promoter region에 결합함으로써 다양한 cytokines의 분비를 조절한다7). 특히, 만성염증 질환에서는 지속적으로 NF-κB가 활성화되어 염증매개물질이 꾸준히 발현되는 것으로 나타나6), NF-κB의 활성을 억제함으로서 만성염증질환을 치유하고자 하는 연구가 지속적으로 이루어지고 있다3).
	염증반응에 관여하는 주요 세포는 무엇인가?	염증은 생체의 세포나 조직이 어떠한 원인에 의하여 손상을 받으면 면역세포가 이를 인지하여 다양한 염증매개물질을 분비함으로써 몸을 보호해주는 보호기전이다1,2). 염증반응에 관여하는 주요 세포는 macrophage로 알려져 있으며, macrophage는 여러 자극이나 면역세포들이 분비하는 cytokines, hydrogen peroxide, viruses, antigen 등에 의해 활성화되어 proinflammatory cytokines, nitric oxide (NO)와 prostaglandin E2 (PGE2)를 생성함으로써 통증, 열, 부종 등의 염증 반응을 유발한다2).

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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