[논문]비만세포에서 백질려 추출물의 항염증효과에 대한 연구

노효선; 박용기; 배효상

doi:10.6116/kjh.2017.32.2.107.

비만세포에서 백질려 추출물의 항염증효과에 대한 연구
Effects of Tribuli Fructus extract on inflammatory responses in IgE-stimulated RBL-2H3 mast cells 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.32 no.2, 2017년, pp.107 - 114

노효선 (동국대학교 한의과대학 본초학교실) , 박용기 (동국대학교 한의과대학 본초학교실) , 배효상 (동국대학교 한의과대학 사상체질과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Tribulus terrestris $Linn{\acute{e}}$ (Tribuli Fructus; TF) has been used to treat hypochondrium, agalactia, nebula, itching and vitiligo in traditional Korean medicine. In this study, we investigated the effects of TF 30% ethanol extract on inflammatory responses in IgE-stimulated RBL-2H3 mast cells. Methods : TF extract was prepared by 30% ethanol. RBL-2H3 cells, a rat mast cell line, were treated with TF extract at different concentrations for 1 hr and then stimulated with DNP-IgE/HSA for indicated times. Cell viability was measured by WST-1 assay. The expression of inflammatory cytokines (IL-4, IL-13 and $IFN-{\gamma}$) mRNA was determined by reverse transcriptase-PCR, and the phosphorylation of ERK1/2, p38 and JNK MAP kinases (MAPKs) was determined by Western blot. The nuclear expression of $NF-{\kappa}B$ p65 in the cells was detected by Western blot and immunocytochemistry, respectively. Results : The treatment of TF extract at 0.1 and $0.2mg/m{\ell}$ significantly decreased the expression of IL-4 and IL-13 mRNA in IgE-stimulated RBL-2H3 mast cells, while significantly increased the expression of $IFN-{\gamma}$ mRNA. TF extract treatment was also inhibited the phosphorylation of ERK1/2, p38 and JNK MAPKs in IgE-stimulated RBL-2H3 mast cells in a dose-dependent manner. In addition, TF extract significantly blocked the translocation of $NF-{\kappa}B$ p65 into the nuclear of cells after IgE stimulation. Conclusions : These results indicate that TF extract inhibits inflammatory response in IgE-stimulated mast cells through blocking MAPKs/$NF-{\kappa}B$ pathway. This suggests that TF extract has an anti-inflammatory activity in mast cell activation.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

본 연구에서 사용한 RBL-2H3 세포는 흰쥐의 중성구에서 유래한 비만세포이며 세포 표면에 IgE 수용체가 있어 IgE 자극에 의한 사이토카인의 발현, 히스타민의 방출, 염증물질 분비 등 사람의 비만세포와 유사한 특징을 나타내기 때문에 알레르기 질환에서의 항염증, 항알러지 소재 개발연구에 많이 사용하고 있다³²⁾ . 본 연구에서는 DNP-IgE/HSA complex 자극을 통해 활성화 된 비만세포에서 합성, 분비되는 염증성 사이토카인(IL-4, IL-13, IFN-γ )과 염증신호전달 분자인 MAPKs 단백질의 인산화 및 염증신호전달 전사인자인 NF-κB 경로에 대한 백질려추출물의 조절 작용을 검증함으로써 백질려추출 물의 알레르기성 염증반응 조절을 통한 아토피 피부염 치료소 재로서의 가능성을 평가하였다.
본 연구에서는 아토피 피부염에 대한 백질려의 효능을 평가하기 위해 아토피 피부염 발병의 핵심 면역세포인 비만세포 에서 염증반응 유발에 대한 억제 효과 및 약리기전을 확인하였다.
이런 점에서 최근 스테로이드제와 비슷한 효능을 나타내지만 부작용이 없는 한약소재 및 천연성분을 활용한 제제 개발 연구가 이루어지고 있다. 본 연구에서도 아토피 피부염 제제개발 한약소재 발굴을 위해 알레르기성 염증반응 유발의 핵심 면역세포인 비만세포에서의 백질려추출물의 항염증 효과를 조사하였다.

제안 방법

RBL-2H3 비만세포에서 발현되는 사이토카인들(IL-4, IL-13, IFN-γ )의 유전자에 대한 백질려 추출물의 조절 효과를 확인하기 위해 RT-PCR을 수행하였다. 즉, RBL-2H3 세포 (8×10⁴ cells/㎖)를 60 ㎜ culture dish에서 하룻밤 배양한 다음 anti-IgE antibody(0.
RBL-2H3 비만세포에서 백질려추출물의 염증성 사이토카인 발현에 대한 억제 효과를 평가하기 위해 DNP/IgE-HSA로 자극한 RBL-2H3 세포에서 IL-4, IL-13, IFN-γ 유전자의 발현 변화를 RT-PCR 방법으로 측정하였다.
RBL-2H3 비만세포에서 염증신호 전사인자인 NF-κB의 핵내로의 이동과 백질려추출물의 억제효과를 확인하기 위해 면역세포화학염색(ICC)을 수행하였다. 즉, RBL-2H3 세포 (1×10⁵ cells/㎖)를 4 well slide chamber에 분주하여 하룻밤 배양한 다음 anti-IgE antibody를 처리하여 24시간 배양 하였다.
본 연구에서는 IgE 자극으로 활성화된 RBL-2H3 비만세 포에서의 백질려 30% 에탄올추출물의 알레르기성 염증반응 억제 효과를 확인하여 다음과 같은 결론을 얻었다.

대상 데이터

본 실험에 사용된 백질려(Tribuli Fructus; TF)는 옴니허브(경북, 한국)로부터 표준약재를 구입하여 추출물 제조에 사용하였다. 백질려 추출물 제조를 위해 백질려 100g을 30% 에탄올을 이용하여 95℃에서 3시간 추출하였으며, 추출액을 3겹 거어즈 및 와트만 거름종이(Whatman No.
흰쥐(rat)의 비만세포주(basophilic leukemia cell line)인 RBL-2H3 세포를 ATCC사(CRL-2256: Manassas, VA, USA) 로부터 구입하여 사용하였으며, 15% fetal bovine serum (FBS)과 1% penicillin/streptomycin이 함유된 Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM)을 배양액으로 하여 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다.

데이터처리

모든 실험 결과는 3회 반복 실험에 대한 평균과 표준편차 (mean±SD)로 나타내었으며, 통계학적 유의성 검증은 GraphPad Prism 5.0 분석프로그램(ver. 5.01, GraphPad Software Inc.)을 이용하여 정상군과 IgE 대조군 혹은 IgE 대조군과 약물 처리군 간 일원변량분석(One way ANOVA)을 실시하였으며, 모든 결과는 p값이 0.05 이하인 경우 유의성이 있는 것으로 판정하였다.

이론/모형

RBL-2H3 비만세포에서 백질려추출물의 독성정도를 평가하기 위해 WST-1 assay를 수행하였다.
RBL-2H3 비만세포에서 백질려추출물의 염증신호기전에 대한 억제 효과를 평가하기 위해 DNP/IgE-HSA로 자극한 RBL-2H3 세포의 핵에서의 NF-κB 발현을 Western blot 및 세포염색 방법을 통해 조사하였다.
RBL-2H3 비만세포에서 백질려추출물의 염증신호분자 발현에 대한 억제 효과를 평가하기 위해 DNP/IgE-HSA로 자 극한 RBL-2H3 세포에서 MAPKs 단백질의 인산화 정도를 Western blot 방법으로 측정하였다. 그 결과, ERK1/2, p38, JNK MAPK 분자들은 모두 DNP-IgE/HSA 자극에 의해 인산화가 증가되었으며, 이는 백질려추출물 0.
RBL-2H3 비만세포에서 염증신호전달경로에 대한 백질려 추출물의 차단효과를 조사하기 위해 MAPKs와 NF-κB 단백질 발현에 대한 Western blot을 수행하였다. 즉, RBL-2H3 세포(7.
RBL-2H3 세포에서 백질려 추출물의 독성 농도를 평가하기 위해 WST-1 assay를 수행하였다. 즉, RBL-2H3 세포 (2×10⁴ cells/well)를 96-well culture plate에 분주하여 3 7℃, 5% CO₂ 조건으로 하루 동안 배양한 후 백질려 추출물을 0.

성능/효과

1. 백질려 추출물(0.1, 0.2 ㎎/㎖)은 DNP/IgE-HSA 자극 RBL-2H3 세포에서 Th2 사이토카인인 IL-4와 IL-13의 유전자 발현을 억제하였으며, Th1 사이토카인인 IFN-γ 유전자의 발현을 증가시켰다.
2. 백질려 추출물(0.1, 0.2 ㎎/㎖)은 DNP/IgE-HSA 자극 RBL-2H3 세포에서 ERK, p38, JNK MAPK의 인산화를 억제하였으며, 특히 0.2 ㎎/㎖ 처리 시 ERK의 유의적인 억제 효과를 나타내었다.
3. 백질려 추출물(0.1, 0.2 ㎎/㎖)은 DNP/IgE-HSA 자극 RBL-2H3 세포에서 NF-κB의 핵으로의 이동과 발현 증가를 억제하였다.
2 ㎎/㎖ 농도로 처리하였을 때 감소하였다. IFN-γ의 유전자 발현은 DNP-IgE/HSA 자극에 의해 유의적으로 감소되었으며, 백질려 추출물 0.2 ㎎/㎖ 처리에 의해 유의적으로 증가 되었다. 한편, 대조약물인 DSCG 처리군에서는 이들 사이토카인의 발현에 영향을 주지 않았으며, hydrosortisol(HC) 처리군에서는 백질려추출물 0.
RBL-2H3 비만세포에서 백질려추출물의 염증신호분자 발현에 대한 억제 효과를 평가하기 위해 DNP/IgE-HSA로 자 극한 RBL-2H3 세포에서 MAPKs 단백질의 인산화 정도를 Western blot 방법으로 측정하였다. 그 결과, ERK1/2, p38, JNK MAPK 분자들은 모두 DNP-IgE/HSA 자극에 의해 인산화가 증가되었으며, 이는 백질려추출물 0.1, 0.2 ㎎/㎖ 처리에 의해 감소하였다. 특히 백질려추출물 0.
그 결과, IL-4와 IL-13의 유전자 발현은 모두 DNP-IgE/HSA 자극에 의해 증가되었으며, 백질려추출물을 0.1, 0.2 ㎎/㎖ 농도로 처리하였을 때 감소하였다. IFN-γ의 유전자 발현은 DNP-IgE/HSA 자극에 의해 유의적으로 감소되었으며, 백질려 추출물 0.
그 결과, 세포만 배양한 경우의 세포생존율(cell viability)을 100%로 하였을 때 백질려 추출물 0.1, 0.2, 0.5, 1 ㎎/㎖ 처리 농도에서 각각 102.1±2.11%, 93.5±3.42%, 67.51±3.05% 및 53.90±3.03%로 측정되었다. 따라서 이후 실험에서는 독성이 없는 농도 범위(0.
따라서 백질려추출물은 비만세포에서 IgE 자극에 의한 MAPKs/NF-κB 염증신호전달 경로 활성화를 차단함으로써 염증성 사이토카인 합성 억제를 통해 항염증 효능을 나타내는 것으로 나타났으며, 이는 백질려추출물이 아토피 피부염 개선에 효과적일 수 있음을 의미한다.
따라서 백질려추출물은 아토피 피부염에서 피부조직 내 IgE 자극을 통한 비만세포 활성화에 따른 알레르기성 염증물 질의 생성을 MAPKs/NF-κB 염증신호전달경로의 근본적 제어를 통해 피부 염증을 개선시킬 수 있음을 의미한다.
또한 면역세포화학염색에서도 Western blot 결과에서와 마찬가지로 DNP-IgE/HSA 자극 후 핵 내 NF-κB의 발현 증가가 관찰되었고, 이는 백질려추출물 처리에 의해 억제되는 것을 확인하였다(그림 5).
또한 IL-13은 IL-4 수용체에 결합하는 사이토카인으로 IL-4와 함께 IgE 변환을 유도하는 중요한 인자이다³⁴⁾ . 본 연구에서 백질려추출물은 DNP/IgE-HSA 자극으로 활성화 된 비만세포로부터 합성, 분비되는 IL-4와 IL-13을 억제 하였으며, 이는 백질려추출물이 아토피 피부염에서 염증세포 침윤에 따른 피부염증 발생을 억제시키고 Th2 알레르기 반응에 따른 면역 불균형을 조절할 수 있음을 의미한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	아토피 피부염 치료제로 쓰이고 있는 스테로이드제, 항염증제 등의 부작용은 무엇인가?	아토피 피부염의 치료는 피부보습용 외용제, 경구용 항히스타민제, H2 길항제및 항우울제, 국소용 스테로이드 연고, 항염증제 등과 타이모 펜틴과 같은 면역조절제 또는 광선 치료 등이 다양하게 사용 되고 있으며11) , 이중 국소 스테로이드제가 가장 보편적인 약제로 활용되고 있다12) . 그러나 이들 약제가 피부 위축, 모세 혈관확장증, 스테로이드성 여드름, 자색반, 팽창선, 다모증, 자반, 녹내장, steroid addiction syndrome 등 다양한 부작용을 유발함이 알려지면서13) 아토피 피부염의 새로운 치료요 법이나 약제 개발의 필요성이 높아지고 있으며, 대체의학이나 민간요법 등에 대한 관심도 증가하고 있는 실정이다.
	아토피 피부염이란 무엇인가?	아토피 피부염(Atopic dermatitis: AD)은 아토피의 첫 증상으로 대부분 5세 이전 유아의 90% 정도가 발병한다고 알려져 있으며 피부 홍반, 삼출, 가피, 인설(鱗屑) 등이 만성적으로 되풀이 되는 증상을 보이며 특히 소양증이 심한 습진이 나타나는 것을 특징으로 하는 만성 피부염증질환이다1-4) . 아토피 피부염은 아토피 질환의 과거력이나 가족력이 있는 경우 흔히 나타나며5) , 전 세계적으로 1% 정도였던 과거 발병률이 최근 들어 10~20% 정도로 증가하고 있다6) .
	아토피 피부염의 발병 원인은 무엇인가?	아토피 피부염은 아토피 질환의 과거력이나 가족력이 있는 경우 흔히 나타나며5) , 전 세계적으로 1% 정도였던 과거 발병률이 최근 들어 10~20% 정도로 증가하고 있다6) . 현재까지 아토피 피부염의 발병 원인은 구체적으로 밝혀진 바는 없으며 복합적 요인에 의해 발병하는 다인자성 질환으로 인식되고 있고, 유전적 요인 또는 알레르겐(allergen)이나 자극물질, 감염, 기후, 스트레스 등의 환경적 요인, 2형 보조 T세포(Th2) 면역반응 이상, 피부보호막 이상 등 다양한 원인으로 아토피 피부염 증상이 발현되는 것으로 알려져 있다7,8) . 아토피 피부염의 발병 기전으로는 비만세포 활성화와 이에 따른 탈과립으로 인한 혈중 히스타민의 유리, 1,2형 보조 T세포(helper T cell)로부터 분비되는 사이토카인(Th1, Th2) 간의 불균형 및 과도한 IgE 생산 등이 핵심기전으로 알려져 있다9,10) .

참고문헌 (42)

Jane W. IMMUNOBIOLOGY-6/E : The Immune System In Health And Disease. Seoul : LifeScience. 2005 : 361, 551-94.
Eajakawa S. Skin diseases of children. Seoul : Korea Medical Book Publishig Company. 2005 : 20-30.
Rhim JW, Moon KS, Kong DY, Pyun BY. An Investigation into the Actual Condition of Outbreak and Treatment in Atopic Dermatitis. Allergy Asthma Respir Dis. 2005 ; 15(1) : 44-52.
Hong CY. Pediatrics. Seoul : Daehan Printing & Publishing Co. 2005 : 1207-11.
Rha YH, Choi SH. Editorial : Risk Factors Associated with Development of Atopic Dermatitis. Pediatr Allergy Respir Dis. 2009 ; 19(2) : 91-4.
Park YM. Advances In the Pathophysiology of Atopic Dermatitis. Pediatr Allergy Respir Dis. 2006 ; 16(3) : 189-96.
Boguniewicz M, Leung DYM. Atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol. 2006 ; 117(Suppl) : 475-80.

상세보기
Buske-Kirschbaum A, Gierens A, Hollig H, Hellhammer DH. Stress-induced immunomodulation is altered in patients with atopic dermatitis. J Neuroimmunol. 2002 ; 129 : 161-7.

상세보기
Cooper KD. Atopy dermatitis-Recent trends in pathogenesis and therapy. J Invest dermatol. 1994 ; 102 : 128-65.

상세보기
Mosman TR, Cherwinski HM, Bond MW, Giedlin MA, Coffman RL. Two types of murine helper T cell clones. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins. J Immunol. 1986 ; 136 : 2348-57.
Lee HR. Atopic Dermatitis. Korean J Pediatr 2000; 43 :1161-1167.
Cambazard F. The use of topical corticosteroids in atopic dermatitis in children. Ann Dermatol Venereol. 2005 ; 132(1) : 64-7.
Hajar T, Leshem YA, Hanifin JM, Nedorost ST, Lio PA, Paller AS, Block J, Simpson EL. A systematic review of topical corticosteroid withdrawal ("steroid addiction") in patients with atopic dermatitis and other dermatoses. J Am Acad Dermatol. 2014 ; 72(3) : 541-9.
Hong WS. Huangdi Neijing Suwen. Seoul : Research Institute of Oriental Medicine Publishing. 1985 : 72-80, 246-8.
Park SN. Effect of Sopungsan in BALB/c Mouse Model of Atopic Dermatitis. Doctoral Dissertation. Kyunghee University. 2004.
Cha KB, Kim YS, Seol IC. Literatual study on Atopic dermatitis. J Oriental Med Daejeon Univ. 2005 ; 14(2) : 113-26.
The National College of Oriental Medicine Herbology Classroom. Herbology. Seoul : Youngrimsa. 2016 : 557-8.
Yoo YJ, Lee HS. Effects of Fructus Tribuli on the Blood Pressure in Spontaneously Hypertensive Rats. J Trad Korean Med. 1999 ; 9(1) : 192-9.
Hong S. Effect of Fructus Tribuli extract on blood pressure and artery. Kor J Orient Int Med. 1997 ; 18(2) : 151-9.
Kang SY, Han JH, Kim KY. Effect of Fructus Tribuli extract on regional cerebral blood flow and pial arterial diameter. Kor J Herbol. 1998 ; 8(1) : 187-200.
Lee DH, Yu HH, Jung SY, Moon HD, Kim SM, Jeon BH, You YO. Anticariogenic Properties of the Ethanol Extract of Tribuli fructus against Streptococcus mutans. Kor J Oriental Physiology & Pathology. 2007 ; 21(5) : 1148-53.
Chou CY. Kim YB. The Effects of Tribulus terrestris on Model of Allergic Rhinitis. Kor J Oriental Medical Ophthalmol Otolaryngol Dermatol. 2011 ; 24(2) : 28-34.
Zhang JD, Cao YB, Zheng XU. In Vitro and in Vivo Antifungal Activities of the Eight Steroid Saponins from Tribulus terrestris L. with Potent Activity against Fluconazole-Resistant Fungal. Biol Pharm Bull. 2005 ; 28(12) : 2211-5.

상세보기
Wei NI, Zhou G, HU LL, Tian DL, Jiang XX, OUYANG CH. Experimental study on the anti-inflammatory, anti-anoxia and anti-fatigue effects of extract from Tribulus terrestris L. Lishiznen Med Mater Med Res. 2007 ; 18(11) : 2778-9.
Xiao PG. Modern Chinese materia medica. Beijing : China Social Sciences Press. 2001.
Kim SA, Kang YH. Changes in Ceramide in Stratum Corneum and Anti-inflamatory Effects of Sopungdojeok-tang on Atopic Dermatitis. Korean J Orient Int Med. 2006 ; 27(1) : 72-83.
Yang HJ, Park KW, Kim HS, Cho SM, Park KM. Effect of Anti-atopic Allergic Reaction in Response to Oriental Herb Extracts. Kor J Food Sci Technol. 2010 ; 42(1) : 109-14.
Park YL, Park J. Pathogenesis of Atopic Dermatitis. Kor J of Investigative Dermatology. 2007 ; 14(3) : 67-72.
Metcalfe DD, Baram D, Mekori YA. Mast cells. Physiol Rev. 1997 ; 77(4) : 1033-79.

상세보기
Poole JA, Rosenwasser LJ. The role of immunoglobulin E and immune inflammation: implications in allergic rhinitis. Curr Allergy Asthma Rep. 2005 ; 5(3) : 252-8.

상세보기
Ahn KM. Role of Mast Cells in Allergic Inflammation and Innate Immunity. Korean J Pediatr. 2004 ; 47(11) : 1137-41.

상세보기
Egle P, Neil F. The RBL-2H3 cell line: its provenance and suitability as a model for the mast cell. Inflamm Res. 2009 ; 58(11) : 737-45.

상세보기
Chrousos GP. Stress, chronic inflammation, and emotional and physical well-being : Concurrent effects and chronic sequelae. J Allergy Clin Immunol. 2000 ; 106(5) : 275-91.

상세보기
Shirakawa I, Deichmann KA, Izuhara I, Mao I, Adra CN, Hopkin JM. Atopy and asthma: genetic variants of IL-4 and IL-13 signalling. Immunol Today. 2000 ; 21(2) ; 60-4.

상세보기
Kim NU. Inhibitory mechanism of curcumin on activation of mast cells for anti-allergic activity. Master Dissertation. Konkuk University. 2007.
Gilfillan AM, Tkaczyk C. Integrated signaling pathways for mast cell activation. Nat Rev Immunol. 2006 ; 6 : 218-30.

상세보기
Cobb MH, Goldsmith EJ. Dimerization in MAP-kinase signaling. Trends Biochem. Sci. 2000 ; 25 : 7-9.

상세보기
Theoharidies TC, Kalogeromitros D. The critical role of mast cells in allergy and inflammation. Ann N Y Acad Sci. 2006 ; 1088 : 78-99.

상세보기
Gary LJ, Razvan L. Mitogen-Activated Protein Kinase Pathways Mediated by ERK, JNK, and p38 Protein Kinases. Science. 2002 ; 298(5600) : 1911-2.

상세보기
Andrea H, Thomas K, Josef P, Konrad S. Physiology and pathophysiology of phingolipid metabolism and signaling. Biochem Biophys Acta. 2000 ; 1485 : 63-99.
Kim SA, Kang YH. Changes in Ceramide in Stratum Corneum and Anti-inflamatory Effects of Sopungdojeok-tang on Atopic Dermatitis. Kor J Orient Int Med. 2006 ; 27(1) : 72-83.
Baeuerle PA, Baltimore D. NF-kappa B: ten years after. Cell. 1996 ; 87 : 13-20.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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