[논문]야교등의 항산화 및 간보호효과

전창권; 정지윤; 박정아; 지선영; 김상찬

doi:10.14374/hfs.2017.25.2.155

야교등의 항산화 및 간보호효과
Effect of Polygoni Multiflori Ramulus extract against arachidonic acid and iron-induced oxidative stress in HepG2 cell and CCl4-induced liver injury in mice 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.25 no.2, 2017년, pp.155 - 166

전창권 (대구한의대학교 한의과대학) , 정지윤 (대구한의대학교 한의과대학) , 박정아 (대구한의대학교 한의과대학) , 지선영 (대구한의대학교 한의과대학) , 김상찬 (대구한의대학교 한의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Polygoni Multiflori Ramulus has been widely used as a traditional medicinal herb for the treatment of insomnia, limb pain and itch. The extract of Polygoni Multiflori Ramulus (PMRE) is known to have a modulatory effect of many inflammatory responses. This study was performed to investigate the hepatoprotective effect of PMRE against arachidonic acid (AA) + iron-induced oxidative stress on HepG2 cell and carbon tetrachloride ($CCl_4$)-induced liver injury on mice. Methods : The effects of PMRE on cell viability was assessed by MTT assay. And flow cytometric analysis was performed to estimate the effects on mitochondrial function. To investigate its underlying mechanism, apoptosis-related proteins were analysed by using immunoblot analysis. In addition, ICR mouse were administrated (po) with the PMRE (30, 100 mg/kg) for 3 days and then, injected (ip) with $CCl_4$ (0.5 ml/kg body weight) to induce acute liver damage. The level of pro-caspase-3 was measured. Results : Treatment of PMRE increased relative cell viability, prevented a cleavage of poly (ADP ribose) polymerase and pro-caspase-3, and also reduced mitochondrial membrane permeability against AA + iron-induced oxidative stress. In addition, PMRE treatment decreased liver injury induced by $CCl_4$, as evidenced by increases in pro-caspase-3 level. Conclusions : These results demonstrate that PMRE has an ability to anti-oxidant and hepatoprotective effect against AA + iron-induced oxidative stress and $CCl_4$-induced liver injury.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

연구에서는 AA와 iron에 의해 유도된 산화적 스트레스를 HepG2 in vitro모델과 CCl₄에 의해 유도된 급성 간 손상 in vivo 모델에서 PMRE의 항산화 및 간 보호 효과를 평가하였다. In vitro 모델에서는 MTT assay를 통하여 세포 보호 효과, immunoblot analysis로 세포자멸사 단백질 발현 및 유세포 분석을 통한 미토콘드리아 보호 효과를 확인하였다.

제안 방법

5 ml/kg로 복강 투여하여 간독성을 유발하였다. CCl₄로 간독성을 유발하기 전 3일 동안 (매일 1회) PMRE를 30, 100mg/kg으로 투여하였다.
이후 10 μM 의 DCFH-DA을 처치하고 37℃에서 1시간 배양하여 2′7′-dichlorofluorescein의 형광강도를 측정하였다. DCFH의 형광강도는 excitation 485nm와 emission 530nm로 automatic microplate reader (Tecan)를 사용하여 측정하였다.
GSH 함량을 측정하기 위하여, 6-well plate에 각 well 당 HepG2 cell을 5×105개로 분주하고, PMRE, AA 및 iron을 순차적으로 처치하였다.
HepG2 cell에서 PMRE의 세포보호 효과를 평가하기 위하여, 배양 후 FBS가 제거된 배지에서 24시간 배양한 후, PMRE를 농도별로 처치하고 1시간 후, 10 μM의 AA를 12시간 처치하고, 이어서 5μM의 iron을 1시간 처치하였다.
에 의해 유도된 급성 간 손상 in vivo 모델에서 PMRE의 항산화 및 간 보호 효과를 평가하였다. In vitro 모델에서는 MTT assay를 통하여 세포 보호 효과, immunoblot analysis로 세포자멸사 단백질 발현 및 유세포 분석을 통한 미토콘드리아 보호 효과를 확인하였다. 이와 더불어 In vivo 모델에서도 PMRE의 처치가 세포자멸사 단백질 발현을 억제하는 것으로 확인되었다.
In vitro 모델인 HepG2 cell에서 산화적 스트레스에 의한 PMRE의 효능을 확인하고, in vivo 모델인 CCl₄에 의해 유도된 간손상 마우스에서 PMRE의 효능을 검증하였다. 대표적인 간독성 유발물질인 CCl₄는 cytochrome p450에 의하여 CCl₃^۰을 형성하고, CCl₃^۰는 지방대사에 손상을 유도하여 steatosis를 초래하고, DNA 손상을 유도하며⁴³⁾, 또한 CCl₃^۰는 CCl₃ OO^۰을 형성하여 지질의 과산화를 유발한다.
AA+iron에 의한 산화적 스트레스로 유도되는 apoptosis는 MMP의 증가와 관련되어 있다. PMRE가 AA+iron에 의한 미토콘드리아 기능 이상을 억제할 수 있는지 알아보기 위해 Rh123 염색을 통해 flow cytometric analysis를 수행하였다. RN1 fraction은 Rh123의 염색양이 적은 분획으로 미토콘드리아의 막 전위가 파괴된 정도로 AA+iron만을 처치한 실험군의 경우 전체 세포 중 RN1 fraction의 비율이 48.
AA + iron에 의한 산화적 스트레스는 과도한 세포 내 활성산소종의 생성을 통해 미토콘드리아의 기능 장애를 유발하여 세포사멸을 유도하는 것으로 알려져 있다. PMRE의 세포보호 효과에 AA + iron에 의한 유도된 산화적 스트레스의 억제가 매개되는지 확인하기 위하여 DCFH-DA로 염색하여 fluorescence를 microplate reader로 평가하였다.
단백질이 전이된 NC membrane에 procaspase-3 antibody와 2차 항체로 각각 반응시킨 후 ECL® chemiluminescence detection kit (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK)로 pro-caspase-3 의 발현을 관찰하였다.
단백질이 전이된 NC membrane에 비특이적인 결합을 제거하기 위하여 blocking buffer (5% non-fat milk와 0.1% Tween 20을 함유한 phosphate buffer saline) 로 1시간 blocking한 후, 각각의 1차 항체를 결합시키고, 2차 항체를 결합시켜 ECL ® chemiluminescence detection kit (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK)로 각 protein의 band를 발색하였다.
따라서, 본 연구에서는 PMRE의 간 보호 효능을 AA와 iron의 병용 처치를 통해 산화적 스트레스를 유도한 HepG2 cell 독성 모델과 CCl₄의 투여에 의해 간독성이 유도된 간 손상 동물모델을 통하여 평가하였다.
그러나 아직까지 AA와 iron의 처치에 의해 유도된 산화적 스트레스에 대한 夜交藤의 항산화 효과 및 간세포 보호 작용에 대해서는 연구된 바가 없었다. 따라서, 본 연구에서는 夜交藤 추출물 (PMRE; Polygoni Multiflori Ramulus water Extract)의 간 보호 효능을 AA + iron의 처치를 통해 산화적 스트레스를 유발한 HepG2 cell 독성 모델과, 사염화탄소(carbon tetrachloride, CCl₄)의 처치를 통해 간독성을 유발한 동물모델을 활용하여 항산화 및 간보호효능을 평가하였다.
03의 세포 생존율을 나타내어, AA + iron 처리군에 비교하여 유의한 증가를 나타내었다. 또한 AA + iron이 유도하는 세포 독성에는 세포자멸사가 개재된다는 이전의 연구결과들^34,35)에 따라, 세포자멸사와 관련된 단백질의 변화를 평가하였다. AA + iron은 pro-caspase-3와 PARP의 발현을 control 대비 0.
또한, 산화적 스트레스는 과도한 ROS의 생성뿐만 아니라, 체내 항산화 기능의 저하에서도 초래될 수 있으므로, 체내 항산화 물질 중의 하나인 GSH의 함량을 평가하였다. 세포 내 GSH의 고갈은 체내의 항산화 기능의 저하를 초래하여 세포 독성을 유도하는 것으로 알려져 있으며^38-40), 이미 이전의 연구^41,42)에서도 AA + iron은 세포 내 GSH의 고갈을 통한 산화적 스트레스를 유도함이 보고되었다.
1% Tween 20을 함유한 phosphate buffer saline) 로 1시간 blocking한 후, 각각의 1차 항체를 결합시키고, 2차 항체를 결합시켜 ECL ® chemiluminescence detection kit (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK)로 각 protein의 band를 발색하였다. 발색 후 각 단백질의 발현량은 Image analyzing system (Imager 600, Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK)으로 density를 측정 및 비교하였다.
본 연구에서는 HepG2 cell을 48-well plate에 각 well 당 3×105개로 분주하여 배양하고, PMRE, AA, iron을 처치하였다.
동물실험은 대구한의대학교 동물실험윤리위원회 (DHU IACUC)의 규정에 따라 동물실험윤리위원회의 승인 (DHU2016-098)을 획득한 후 시행하였다. 본 연구에서는 급성 간독성을 유발하기 위하여 CCl₄ 를 0.5 ml/kg로 복강 투여하여 간독성을 유발하였다. CCl₄로 간독성을 유발하기 전 3일 동안 (매일 1회) PMRE를 30, 100mg/kg으로 투여하였다.
In vivo study를 위한 실험동물은 6주령 ICR mouse (male, 23-30g)를 새론바이오㈜ (경기, 한국)로부터 구입하여 1주간 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 사육실 환경은 온도 20-23℃, 습도 50%, 12시간 간격의 명암주기를 유지하고, 사료 (Nestle Purina Petcare Korea, Seoul, Korea)와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였다. 동물실험은 대구한의대학교 동물실험윤리위원회 (DHU IACUC)의 규정에 따라 동물실험윤리위원회의 승인 (DHU2016-098)을 획득한 후 시행하였다.
처치가 완료된 세포에 well당 500㎕의 metaphosphoric acid를 처치하여 용해하고, 원심분리(3,000 ×g, 4℃, 10 min)하여 단백질을 포함하는 상층액을 얻었다. 상층 액을 GSH detection kit(Oxis International, Portland, USA)를 사용하여 405nm에서 automatic microplate reader(Tecan)를 이용하여 측정하였다.
세포자멸사 (apoptosis)에 관련된 단백질의 발현을 평가하기 위하여, 6-well plate에 각 well당 HepG2 cell을 5×105개로 분주하고, PMRE 및 AA 및 iron을 처치하였다.
1A). 이와 같은 결과로 PMRE가 세포 독성을 나타내지 않는 농도를 사용하여 이후 실험을 실시하였다. 이후 PMRE가 AA + iron로 산화적 스트레스를 가하였을 때 세포 생존율에 미치는 영향을 MTT assay로 평가한 결과, AA + iron만을 처치한 실험군의 경우, 대조군(100%)과 비교하였을 때 평균 27.
이후 10 μM 의 DCFH-DA을 처치하고 37℃에서 1시간 배양하여 2′7′-dichlorofluorescein의 형광강도를 측정하였다.
5 ml씩 분주하여 배양한 후, FBS를 제거한 배지로 24시간 더 배양하였다. 이후 PMRE를 최종농도 3, 10, 30, 100㎍/ml로 처치하고 1시간 후, AA (12시간), iron (1시간)을 처치하여 세포생존율을 측정하였다. 처치가 완료된 세포의 각 well에 MTT (0.
이후 trypsin을 처치하여 cell을 회수하고, 회수된 세포를 1% FBS를 함유하는 phosphate buffer saline으로 세척한 후, 이를 Partec GmbH FACS Calibur flow cytometer (Münster, Germany)로 분석하였다.
이후, 선행 연구결과를 통해 AA + iron으로 유도된 산화적 스트레스가 apoptosis를 일으킨다는 보고¹²⁾를 바탕으로 본 연구에서는 apoptosis와 관련된 지표 단백질들을 immunoblot analysis를 통해 그 발현을 관찰하였다. 그 결과 AA + iron 처리군에서는 pro-caspase-3, PARP의 발현 정도가 감소한 것을 관찰할 수 있었으며, PMRE를 처리할 경우, pro-caspase-3 와 PARP의 발현이 회복되는 것을 확인하였다.
채취한 간 조직 0.1 g에 total lysis buffer를 1ml 넣고 균질화한 후 20분 동안 원심분리(15,000 ×g, 4℃)하여 상층액을 얻고, 이 상층액을 bicinchoninic acid assay로 정량하였다.

대상 데이터

2′7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)와 ferric nitrilotriacetate acid (Fe-NTA), 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)와 anti-β-actin 및 다른 시약들은 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
Fetal bovine serum (FBS)와 Dulbecco's modified Eagle's medium은 Life Technologies (Gaithersburg, MD, USA)와 BioWhittaker사(Walkersville, MD, USA)로부터 구입하였으며, streptomycin과 penicillin은 Gibco/BRL(Eggenstein, Germany)로부터 구입하였다. AA와 rhodamine 123 (Rh123)은 Calbiochem(Santacruz, CA, USA)로부터 구입하였다. Glutathione (GSH) determination kit는 Oxis International (South Tampa, FL, USA)에서 구입하였다.
Fetal bovine serum (FBS)와 Dulbecco's modified Eagle's medium은 Life Technologies (Gaithersburg, MD, USA)와 BioWhittaker사(Walkersville, MD, USA)로부터 구입하였으며, streptomycin과 penicillin은 Gibco/BRL(Eggenstein, Germany)로부터 구입하였다.
Human hepatocyte-derived cell line인 HepG2 cell은 American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, MD, USA)로부터 구입하였으며, 10% FBS와 50mg/ml streptomycin, 50 U/ml penicillin을 포함한 Dulbecco's modified Eagle's medium 배지를 사용하여 5%의 CO2 및 37℃가 유지되는 배양기 (Sanyo, Japan)에서 배양하였다.
In vivo study를 위한 실험동물은 6주령 ICR mouse (male, 23-30g)를 새론바이오㈜ (경기, 한국)로부터 구입하여 1주간 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 사육실 환경은 온도 20-23℃, 습도 50%, 12시간 간격의 명암주기를 유지하고, 사료 (Nestle Purina Petcare Korea, Seoul, Korea)와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였다.
MMP는 membrane-permeable cationic fluorescent의 염색약인 Rh123을 이용하여 측정하였다. PMRE, AA, iron을 순차적으로 처치 및 배양한 HepG2 cell에 0.
Glutathione (GSH) determination kit는 Oxis International (South Tampa, FL, USA)에서 구입하였다. Pro-caspase-3, HRP-conjugated anti-rabbit IgG, HRP-conjugated anti-mouse IgG 항체는 Cell Signaling Technology (Beverely, MA, USA)로부터 구입하였으며, poly (ADP ribose) polymerase (PARP) 항체는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다. 2′7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)와 ferric nitrilotriacetate acid (Fe-NTA), 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)와 anti-β-actin 및 다른 시약들은 Sigma (St.
夜交藤은 대원약업사 (Daegu, Korea)에서 구입하였으며, 200g을 2L의 물로 3시간 전탕하였다. 전탕액을 거즈로 1차 여과한 후, 0.

데이터처리

실험 결과는 mean ± S.D.로 나타내었으며, 처치군 간의 유의성은 one way analysis of variance (ANOVA)로 검정한 후 Tukey test로 사후 검정하였다.

이론/모형

MTT assay로 세포 생존율을 측정하였다. 세포생존율 측정을 위해 24-well plate의 각 well당 HepG2 cell을 3×10⁵개로 0.
PMRE의 항산화능을 평가하기 위하여 DCFH-DA를 이용하였다. DCFH-DA는 cell-permeable non-fluorescent probe로 intracellular esterases 및 H₂O₂에 의하여 2′7′-dichlorofluorescein으로 변환되며, 이것의 형광강도를 평가하여 H₂O₂의 생성량을 상대적으로 평가할 수 있다.
The effect of PMRE on cell viability was assessed using MTT assay. (A) HepG2 cells were incubated in 3, 10, 30, 100 ㎍/ml of PMRE alone for 24 h.

성능/효과

AA + iron은 pro-caspase-3와 PARP의 발현을 control 대비 0.69 ± 0.04, 0.57 ± 0.14 배로 유의하게 감소시켰으며, PMRE 10과 30㎍/ml은 pro-caspase-3와 PARP 모두에서 AA + iron 처리군에 비교하여 유의한 증가를 나타내었다.
AA + iron을 처리한 경우 전체 세포 중 H2O2 생성이 대조군과 비교해 4.9 ± 0.37배로 유의하게 증가하였고, PMRE를 전처리한 경우에는 H2O2의 생성이 대조군과 비교하여 유의하게 감소하였다 (Fig. 4A).
CCl₄로 유도된 급성 간 손상 모델에서 적출한 간 조직으로부터 immunoblot analysis를 통해 세포자멸사 관련 단백질의 발현을 확인해 본 결과, HepG2 cell 모델과 유사하게 CCl₄를 처리한 군에서 pro-caspase-3 의 발현 정도가 감소한 것을 관찰할 수 있었으며, PMRE를 처치군에서 그 감소가 완화된 양상을 확인하였다. 이외에 PMRE를 단독으로 처치하였을 때는 pro-caspase-3의 발현 변화는 관찰되지 않았다 (Fig.
HepG2 cell에서 PMRE의 처치가 세포생존율에 미치는 영향을 평가하기 위해 PMRE를 3, 10, 30, 100㎍/㎖의 농도로 처치한 결과, 대조군과 비교하였을 때 낮은 농도에서는 통계적으로 유의한 차이가 없으나 100㎍/㎖ 농도에서는 통계적으로 유의하게 감소하였다 (Fig. 1A). 이와 같은 결과로 PMRE가 세포 독성을 나타내지 않는 농도를 사용하여 이후 실험을 실시하였다.
PMRE가 AA+iron에 의한 미토콘드리아 기능 이상을 억제할 수 있는지 알아보기 위해 Rh123 염색을 통해 flow cytometric analysis를 수행하였다. RN1 fraction은 Rh123의 염색양이 적은 분획으로 미토콘드리아의 막 전위가 파괴된 정도로 AA+iron만을 처치한 실험군의 경우 전체 세포 중 RN1 fraction의 비율이 48.40%로 대조군(8.35%)과 비교해 큰 차이를 보였으며, 반면 PMRE와 AA+iron을 함께 처리한 실험군 (33.84%)의 경우, 유의성 있게 감소시켰다 (Fig. 3). 이와 같은 결과로 볼 때, PMRE가 AA+iron로 인한 미토콘드리아 기능 이상을 억제한다는 사실을 알 수 있다.
지질의 과산화는 세포막 및 미토콘드리아, DNA 등을 손상시켜 간세포의 손상을 유발하는 것으로^43-45)간 질환의 연구에 빈용되고 있는 동물모델이다. 간 조직으로부터 immunoblot analysis를 통해 세포자멸사 관련 단백질의 발현을 확인해 본 결과, HepG2 cell 모델과 유사하게 세포자멸사 관련 단백질의 변화를 억제함을 확인하였다.
를 바탕으로 본 연구에서는 apoptosis와 관련된 지표 단백질들을 immunoblot analysis를 통해 그 발현을 관찰하였다. 그 결과 AA + iron 처리군에서는 pro-caspase-3, PARP의 발현 정도가 감소한 것을 관찰할 수 있었으며, PMRE를 처리할 경우, pro-caspase-3 와 PARP의 발현이 회복되는 것을 확인하였다. PMRE의 단독 처치는 pro-caspase-3와 PARP에 대한 발현 변화는 관찰되지 않았다 (Fig.
따라서, PMRE는 in vitro 및 in vivo 모델에서 산화적 스트레스에 의한 간 조직의 손상을 억제하였으며, 이러한 간 보호 효과는 활성산소종 생성억제와 항산화 효과를 통한 효율적인 간 보호 효과가 있음을 확인하였다.
또한 세포내 산화적 스트레스의 억제에 연관된 환원형 GSH의 함량을 측정한 결과, AA + iron을 처리한 경우 GSH 함량이 0.52 ± 0.04배 감소하였고, PMRE를 전처리한 경우, 1.26 ± 0.02배로 유의하게 회복되는 것을 확인하였다 (Fig. 4B).
본 연구에서 AA + iron 통해 유도한 세포 독성에 대한 PMRE의 보호 효능을 관찰한 결과, 이전의 연구7,25,26)에서와 유사하게 AA와 iron의 병용 처치는 control 대비 27.82 ± 2.69 %로 유의한 세포 독성을 나타내었고, PMRE는 10, 30, 100 ㎍/ml의 농도에서 각각 79.49 ± 8.92, 116.76 ± 17.54, 109.82 ± 15.03의 세포 생존율을 나타내어, AA + iron 처리군에 비교하여 유의한 증가를 나타내었다.
본 연구에서도 AA + iron은 0.52 ± 0.04 배로 control 대비 유의한 감소를 나타내었고, PMRE 10과 30㎍/ml은 각각 0.88 ± 0.05, 1.26 ± 0.02 배로 유의한 증가를 나타내 어, PMRE가 GSH의 고갈을 유의적으로 억제함을 확인하였다.
본 연구에서도 control군은 8.35 ± 0.86%의 RN1 fraction을 나타내었으나, AA + iron군에서는 48.40 ± 5.25%로 유의하게 증가되었고, 이러한 RN1 fraction의 증가는 PMRE 10과 30㎍/ml에 의하여 각각 38.57 ± 0.79, 33.84 ± 1.87%로 유의하게 감소되었다.
69 %의 세포 생존율을 나타내어 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 이로 보아 AA + iron로 유도된 산화 스트레스는 세포 독성을 유도하는 것을 확인할 수 있었으며, PMRE를 전 처치한 실험군에서는 PMRE 가 농도 의존적으로 세포 생존율을 증가시키는 것을 확인할 수 있었다 (Fig. 1B).
3). 이와 같은 결과로 볼 때, PMRE가 AA+iron로 인한 미토콘드리아 기능 이상을 억제한다는 사실을 알 수 있다.
4B). 이와 같은 결과로 볼 때, PMRE는 AA + iron로 인한 산화적 스트레스의 억제를 통해 세포보호 효능을 나타내는 것으로 생각된다.
In vitro 모델에서는 MTT assay를 통하여 세포 보호 효과, immunoblot analysis로 세포자멸사 단백질 발현 및 유세포 분석을 통한 미토콘드리아 보호 효과를 확인하였다. 이와 더불어 In vivo 모델에서도 PMRE의 처치가 세포자멸사 단백질 발현을 억제하는 것으로 확인되었다. 이러한 결과는 夜交藤의 처치가 in vitro와 in vivo 모델에서 항산화 효능 및 세포보호 효능, 간 보호 효과가 있음을 입증한 것으로 항산화 효과와 더불어 간을 보호하는 유효한 약물 후보로 夜交藤을 급만성 치료에 활용할 수 있을 것으로 생각된다.
이와 더불어, PMRE 10, 30㎍/㎖은 AA + iron에 의한 활성산소의 증가 (4.90 ± 0.37배)를 각각 2.16 ± 0.39, 0.93 ± 0.03 배로 유의하게 감소시켰다.
이후 PMRE가 AA + iron로 산화적 스트레스를 가하였을 때 세포 생존율에 미치는 영향을 MTT assay로 평가한 결과, AA + iron만을 처치한 실험군의 경우, 대조군(100%)과 비교하였을 때 평균 27.82 ± 2.69 %의 세포 생존율을 나타내어 통계적으로 유의한 차이가 있었다.

후속연구

이와 더불어 In vivo 모델에서도 PMRE의 처치가 세포자멸사 단백질 발현을 억제하는 것으로 확인되었다. 이러한 결과는 夜交藤의 처치가 in vitro와 in vivo 모델에서 항산화 효능 및 세포보호 효능, 간 보호 효과가 있음을 입증한 것으로 항산화 효과와 더불어 간을 보호하는 유효한 약물 후보로 夜交藤을 급만성 치료에 활용할 수 있을 것으로 생각된다. 향후 夜交藤의 세포보호 효과에 대한 정확한 분자생물학적 작용기전을 규명하기 위해서는 후속 연구가 뒷받침되어야 할 것으로 사료된다.
이러한 결과는 夜交藤의 처치가 in vitro와 in vivo 모델에서 항산화 효능 및 세포보호 효능, 간 보호 효과가 있음을 입증한 것으로 항산화 효과와 더불어 간을 보호하는 유효한 약물 후보로 夜交藤을 급만성 치료에 활용할 수 있을 것으로 생각된다. 향후 夜交藤의 세포보호 효과에 대한 정확한 분자생물학적 작용기전을 규명하기 위해서는 후속 연구가 뒷받침되어야 할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	간이란?	간은 간실질세포, 쿠퍼 (Kupffer) 세포 및 간 성상 세포 (hepatic stellate cell)를 포함하는 다양한 세포로 구성되며1), 산화적 스트레스 (oxidative stress)를 억제하여 해독에 관여하는 중요한 기관이다2,3). 산화적 스트레스는 손상 및 세포사멸을 포함한 세포 기능 장애에서 흔히 발생하는 기전으로 손상 및 염증의 유도를 통한 조직손상은 활성산소종 (reactive oxygen species, ROS) 생산과 세포의 항산화 활동 사이의 불균형과 관련되어 있다4,5).
	과도한 활성산소종 생산이 이루어졌을 때 어떻게 되는가?	산화적 스트레스는 손상 및 세포사멸을 포함한 세포 기능 장애에서 흔히 발생하는 기전으로 손상 및 염증의 유도를 통한 조직손상은 활성산소종 (reactive oxygen species, ROS) 생산과 세포의 항산화 활동 사이의 불균형과 관련되어 있다4,5). 과도한 ROS 생산은 막유동성 및 단백질 구조 변형을 통해 인지질막을 변형시키며 이를 통해 세포사멸을 유도한다6). 따라서 산화적 스트레스의 과도한 증가는 급만성 간 질환을 포함한 다양한 질환을 야기하는 주요 원인으로 보고되어 왔다7,8).
	산화적 스트레스가 발생하는 원인은?	간은 간실질세포, 쿠퍼 (Kupffer) 세포 및 간 성상 세포 (hepatic stellate cell)를 포함하는 다양한 세포로 구성되며1), 산화적 스트레스 (oxidative stress)를 억제하여 해독에 관여하는 중요한 기관이다2,3). 산화적 스트레스는 손상 및 세포사멸을 포함한 세포 기능 장애에서 흔히 발생하는 기전으로 손상 및 염증의 유도를 통한 조직손상은 활성산소종 (reactive oxygen species, ROS) 생산과 세포의 항산화 활동 사이의 불균형과 관련되어 있다4,5). 과도한 ROS 생산은 막유동성 및 단백질 구조 변형을 통해 인지질막을 변형시키며 이를 통해 세포사멸을 유도한다6).

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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