선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구는 국내 류마토이드 관련 실험연구에 대해 STRASA와 ARRIVE guidelines을 이용하여 실험논문의 보고 상황에 대해 평가한 최초의 논문으로 실험연구 논문들의 보고수준을 향상하는 것의 필요성을 제시하고, 부족했던 부분에 대해 언급함으로써 추후 양질의 연구들을 진행하는 데에 도움이 될 것으로 사료된다. 또한 여러 분석을 통해 류마토이드 관절염의 병리기전에 중요한 역할을 하는 inflammatory cytokine의 발현의 억제와 anti-inflammatory cytokine의 발현 증가로 한약의 염증에 관여하는 메커니즘에 대해 제시할 수 있었고, 류마토이드 실험 논문에서 주로 사용되는 평가지표들과 그 결과에 대해 알 수 있었다. 또한 다빈도 처방의 부재로 공통점과 각 처방의 안전성에 대한 지표를 찾기 어려웠다.
- ARRIVE guideline은 title, abstract, introduction, methods, results, discussion 구성을 세분화하여 20가지의 권고사항을 제시한다. 본 연구에서는 각각의 권고사항에 해당하는 내용을 논문에서 언급한 경우를 준수했다고 보고, 보고 정도에 대해 %로 기술하였다.
- 또한 2008년까지의 실험 논문에 대한 리뷰17)가 보고되었으나, 그 이후 류마토이드 관절염의 한약치료에 대한 실험논문이 많이 발표되었으며 이에 대한 체계적인 고찰이 이뤄지지 않은 상태이다. 이에 저자는 류마토이드 관절염을 유발한 동물모델에 한약을 이용한 국내 실험논문을 고찰하여, 류마토이드 관절염의 억제에 미치는 한약치료의 메커니즘을 확인하고, 실험논문의 질적 수준을 평가하고 이후의 실험 및 임상 연구의 기초 자료를 확보하고자 하였다.
- 파골 세포는 조골 세포에서 분비하는 receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (RANKL)이 receptor activator of nuclear factor kappa B (RANK)와 결합하여 분화되고 IL-6의 영향으로 생성되고, RANKL의 발현의 억제는 BMD의 증가와 함께 뼈의 교체율을 감소시키기 때문에, 해외에서는 RANKL발현을 조절하는 TNF-α와 IL-6 억제제의 사용이 BMD에 미치는 영향에 대한 연구로 억제제의 작용과 치료기전을 설명하였다71).
제안 방법
- RQ는 실험에 사용되는 sample들의 mRNA의 변화 혹은 차이를 상대적인 값으로 나타낸 것을 의미한다20). 3편의 논문에서 micro-CT를 통해 모델의 관절 상태를 비교 관찰하였고, 골밀도와 관절염증의 정도를 측정하였다. 조직학적으로는 Hematoxylin & Eosin 염색과 MassonTrichrome 염색을 통하여 분리된 관절 조직 내의 염증을 나타내는 여러 지표들을 분석하여 염증 정도를 비교하였다.
- In vitro 실험에서는 RAW 264.7 cell, THP-1, hPBMCs, SW1353 cell을 사용하여, 염증반응과 관련 있는 물질의 조절에 대한 한약의 유의성을 평가하였고, 평가지표는 Table IV에 제시하였다.
- 본 연구의 대상은 in vivo 실험이지만 in vitro 실험도 함께 시행한 논문도 있어 이를 포함하여 분석하였다. In vivo 실험의 유의성을 평가하는 방법으로 크게 형태학적 분석(Macroscopic analysis), 혈액학적 분석(Hematological analysis), 병리조직학적 분석(Histological analysis), 유전학적 분석(Genetic analysis), 골학적 분석(Osteological analysis)로 분류하였고, in vitro 실험의 평가 지표는 각 세포에서의 염증관련 cytokine 및 유전자의 발현정도를 사용하였다.
- Prisma Flowchart18)에 의해서 1차적으로 검색된 논문의 제목과 초록을 읽고 선정/배제하였고, 2차적으로 원문을 읽고 최종적으로 논문을 선정/배제하였다. 자료추출의 선정기준과 배제기준은 다음과 같다.
- 실험 모델은 mouse 또는 rat이 사용되었고, 관절염 유도물질(Collagen, Collagen Freud’s Adjuvant, Lipopolysaccharide)에 의해 류마토이드 관절염이 유발되었다. 관절염의 유발여부, 대조약물의 투여 여부, 투여된 한약의 농도에 따라 정상군(Normal, N), 대조군(Control, C), 양성 대조군(Methotrexate, MTX; Indomethacin, Indo; Dexamethasone, Dexa), 실험군(Herbal Medicine, HM)으로 설정되었고, 실험이 이뤄지는 기간 동안 한약의 경구투여를 통해 류마토이드 관절염에 대한 한약의 유의성을 도출하고자 하였다(Table III).
- 검색어는 류마티스, 류머티스, 류마토이드, Rheumatoid Arthritis로 2008년에서 2017년 사이에 발행된 학위 논문과 학술지 내의 논문을 대상으로 하였으며 검색 조건은 제목과 키워드로 하였다. 데이터베이스에서 검색된 학술지 논문의 발행처를 바탕으로 대한본초학회지, 대한한의학방제학회지, 동의생리병리학회지, 대한경락경혈학회지, 한방재활의학과학회지, 척추신경추나의학회지, 대한침구의학회지, 대한한의학회지, 대한한방소아과학회지, 대한한방부인과학회지를 동일한 방식으로 수기 검색하였고 검색 조건을 선택할 수 없을 경우에는 제목으로만 검색하였다.
- 형태학적인 분석을 통해 실험동물의 관절에서 발견되는 부종 및 체중의 감소에 대한 한약 투여군의 치료 기전을 확인할 수 있었고, 혈액학적으로 여러 cytokine의 농도의 변화로 류마토이드 관절염의 염증반응에 대한 한약제제의 작용을 확인할 수 있었다. 또한 병리조직학적 분석을 통해 류마토이드 관절염에서 나타나는 관절내의 특징적인 소견에 대하여 그리고 골학적인 분석을 통해 동물의 골 파괴 및 관절 염증의 정도에 대하여 유의미한 결과를 확인하였다. 한약제제 투여의 효과 외에도 STRASA와 ARRIVE guidelines을 이용해 국내에서 발표된 한약제제를 이용한 류마토이드 관절염 동물모델에 관한 논문을 분석하여 국내 실험 논문들을 확인한 결과 각각 63%와 51%의 보고수준을 나타냈다.
- 가 발표한 리뷰를 통해 류마토이드 관절염 치료에 대한 다양한 연구 경향을 확인할 수 있었지만 치료법이 약침, 전침, 침, 방제, 단미제 등의 다양한 중재를 포괄하고 있었다. 또한, 한약의 작용기전에 대한 언급이 부족하며 각 연구에서 사용한 지표들에 대한 고찰이 부족하여 본 연구에서는 한약제제로 한정하여 류마토이드 관절염의 여러 평가지표에 대한 작용과 함께 동물실험의 보고 수준 또한 분석하였다. 35편의 논문을 6가지의 분석 방법을 통해 분석한 결과 류마토이드 관절염의 증상 및 염증 소견에 대한 한약제제의 치료 기전을 확인할 수 있었다.
- 실험에 사용된 처방의 중복 여부와 구성약물, 사용된 약물의 빈도수를 조사하였고, 구성 약물의 양은 1첩을 기준으로 기재하였다. 처방 명을 한자로 찾을 수 없는 경우 한글로 표기하였고, 약물의 빈도수는 5회 이상 사용된 본 초를 표로 나타내었고, 본초학 교과서19)의 본초 분류를 참고하여 효능이 어디에 속하는지 살펴보았다.
- 조직학적으로는 Hematoxylin & Eosin 염색과 MassonTrichrome 염색을 통하여 분리된 관절 조직 내의 염증을 나타내는 여러 지표들을 분석하여 염증 정도를 비교하였다.
- 실험에 사용된 처방의 중복 여부와 구성약물, 사용된 약물의 빈도수를 조사하였고, 구성 약물의 양은 1첩을 기준으로 기재하였다. 처방 명을 한자로 찾을 수 없는 경우 한글로 표기하였고, 약물의 빈도수는 5회 이상 사용된 본 초를 표로 나타내었고, 본초학 교과서19)의 본초 분류를 참고하여 효능이 어디에 속하는지 살펴보았다.
- STRASA guidelines은 침 동물실험연구자들에게 표준안을 제시하여, 침 동물실험연구의 신뢰도와 재현성을 높이고 정보의 축적을 위해 마련된 것으로 동물 침 실험 시에 고려되어야 할 항목들과 항목별 점검 사항을 제시한다. 현재 한약치료의 연구에 대한 guideline은 찾을 수 없었고, 본 연구 대상의 논문들은 침을 중재로 하지 않았지만, 동물을 실험모델로 한 논문들을 대상으로 하였기에 STRASA guidelines의 항목 중 하나인 experimental animal의 점검사항에 근거하여 논문을 분석하였다. 동물 모델에 대한 점검사항은 크게 animal model (pain or non-pain), details of animals, environment of experiment로 분류된다.
- 혈액학적 분석에는 실험 모델에서 조직을 적출하거나 채혈하여 얻은 면역세포의 총 세포 수와 발현 정도, 면역 관련 cytokine 및 항체의 생성량 혹은 혈중 농도의 값이 유의성을 나타내는 지표들을 제시하였다. 유전학적 분석에서는 각 부위의 cytokine 등의 유전자 발현을 분석한 결과를 Relative Quantitative (RQ)값과 평균값으로 분류하였다.
대상 데이터
- 2편의 논문에서 동일한 처방(加味防己黃芪湯)57,61)을 사용하였다(Table I). 약물로는 甘草가 23회, 蒼朮이 16회, 當歸가 15회, 白朮이 14회 등의 순서로 많이 사용되었고 補益藥, 解表藥, 祛風濕藥등의 순서로 다용되었다(Table II).
- 8개의 데이터베이스에 대한 전산검색 및 10개의 한의학 학술지에 대한 수기검색에서 류마티스, 류머티스, 류마토이드, Rheumatoid Arthritis로 검색된 논문은 902편이었고, 중복된 논문을 제외한 후 195편이 남았다. 195편의 논문의 제목과 초록을 통해 선정/배제한 결과 158개의 논문이 탈락되었다.
- 논문의 검색을 위해 한국전통지식포탈, 디비피아(DBpia), 한국학술지용인색인(KCI), 국회도서관, 학술연구정보서비스(RISS), 국가과학기술정보센터(NDSL), 한국학술정보(KISS), 전통의학정보포털(OASIS)의 데이터베이스 8개를 이용하였다. 검색어는 류마티스, 류머티스, 류마토이드, Rheumatoid Arthritis로 2008년에서 2017년 사이에 발행된 학위 논문과 학술지 내의 논문을 대상으로 하였으며 검색 조건은 제목과 키워드로 하였다. 데이터베이스에서 검색된 학술지 논문의 발행처를 바탕으로 대한본초학회지, 대한한의학방제학회지, 동의생리병리학회지, 대한경락경혈학회지, 한방재활의학과학회지, 척추신경추나의학회지, 대한침구의학회지, 대한한의학회지, 대한한방소아과학회지, 대한한방부인과학회지를 동일한 방식으로 수기 검색하였고 검색 조건을 선택할 수 없을 경우에는 제목으로만 검색하였다.
- 195편의 논문의 제목과 초록을 통해 선정/배제한 결과 158개의 논문이 탈락되었다. 남은 37편의 논문의 원문을 확인한 결과 2편이 탈락되고 최종적으로 35편의 논문이 선정되었다(Fig. 1).
- 논문의 검색을 위해 한국전통지식포탈, 디비피아(DBpia), 한국학술지용인색인(KCI), 국회도서관, 학술연구정보서비스(RISS), 국가과학기술정보센터(NDSL), 한국학술정보(KISS), 전통의학정보포털(OASIS)의 데이터베이스 8개를 이용하였다. 검색어는 류마티스, 류머티스, 류마토이드, Rheumatoid Arthritis로 2008년에서 2017년 사이에 발행된 학위 논문과 학술지 내의 논문을 대상으로 하였으며 검색 조건은 제목과 키워드로 하였다.
- 본 연구의 대상은 in vivo 실험이지만 in vitro 실험도 함께 시행한 논문도 있어 이를 포함하여 분석하였다. In vivo 실험의 유의성을 평가하는 방법으로 크게 형태학적 분석(Macroscopic analysis), 혈액학적 분석(Hematological analysis), 병리조직학적 분석(Histological analysis), 유전학적 분석(Genetic analysis), 골학적 분석(Osteological analysis)로 분류하였고, in vitro 실험의 평가 지표는 각 세포에서의 염증관련 cytokine 및 유전자의 발현정도를 사용하였다.
- 실험 모델은 mouse 또는 rat이 사용되었고, 관절염 유도물질(Collagen, Collagen Freud’s Adjuvant, Lipopolysaccharide)에 의해 류마토이드 관절염이 유발되었다.
데이터처리
- 혈액학적 분석에는 실험 모델에서 조직을 적출하거나 채혈하여 얻은 면역세포의 총 세포 수와 발현 정도, 면역 관련 cytokine 및 항체의 생성량 혹은 혈중 농도의 값이 유의성을 나타내는 지표들을 제시하였다. 유전학적 분석에서는 각 부위의 cytokine 등의 유전자 발현을 분석한 결과를 Relative Quantitative (RQ)값과 평균값으로 분류하였다. RQ는 실험에 사용되는 sample들의 mRNA의 변화 혹은 차이를 상대적인 값으로 나타낸 것을 의미한다20).
성능/효과
- 또한, 한약의 작용기전에 대한 언급이 부족하며 각 연구에서 사용한 지표들에 대한 고찰이 부족하여 본 연구에서는 한약제제로 한정하여 류마토이드 관절염의 여러 평가지표에 대한 작용과 함께 동물실험의 보고 수준 또한 분석하였다. 35편의 논문을 6가지의 분석 방법을 통해 분석한 결과 류마토이드 관절염의 증상 및 염증 소견에 대한 한약제제의 치료 기전을 확인할 수 있었다. 형태학적인 분석을 통해 실험동물의 관절에서 발견되는 부종 및 체중의 감소에 대한 한약 투여군의 치료 기전을 확인할 수 있었고, 혈액학적으로 여러 cytokine의 농도의 변화로 류마토이드 관절염의 염증반응에 대한 한약제제의 작용을 확인할 수 있었다.
- Sim 등57)과 Sim61)에서 중족지 관절과 근위지 관절의 변형이 상대적으로 적었고, Lee59)에서 뼈가 파괴되는 정도가 농도 의존적으로 호전되는 양상을 보였다. 3편 모두 골밀도는 대조군(Control, C)에 비하여 호전되었고, 관절의 염증 정도는 감소하였다. 조직학적으로 나타나는 유의성에 대해서 Table VIII에 제시하였다.
- Details of animals에는 동물의 종, 성별, 무게, 나이가 해당하고, environment of experiment에는 구체적인 동물 사육환경에 대한 내용으로 온도, 습도, 환기, 조명, 소음, 동물 처치에 대한 기술여부와 구체적인 guideline 포함여부, 음료와 먹이에 대한 접근의 용이성 제시 여부, habituation 기술 여부가 해당된다. STRASA에서는 각 항목의 기술 여부에 대하여 0점에서 1점까지의 점수를 주지만, 본 연구에서는 준수 정도에 대해 %로 기술하였고, 값이 소수점일 경우 반올림하였다. Animal model (pain or non-pain)에 대한 해당사항은 없으므로 제외하였다.
- 결과 35개의 논문에서 STRASA guidelines 항목에 대하여 분석 한 결과 details of animals에 대한 보고율은 70%, environment of experiment에 대한 보고율은 49%였다. Guideline에 대해 보고한 논문 모두 Guide for the care and use of laboratory animals62)에 준하여 실험동물을 취급하였고, Feeding에 대한 보고율은 63%였다(Table IX).
- 본 연구에서는 35개의 논문을 통해 관절염의 동물모델에서 다양한 한약제제의 실험적 기전과 효과 규명이 이루어진 것을 확인할 수 있었다. 동물모델 실험 연구에서 방법에 대한 정확하고 상세한 설명을 게시하는 것은 윤리적인 필수 요건이다.
- 본 연구에서도 류마토이드 관절염에 사용하는 한약 제제의 다양한 cytokine의 농도 조절과 함께 CRP58), neutrophil count57,61)가 감소하는 결과를 확인할 수 있었고, 다빈도로 사용된 蒼朮, 當歸, 白朮, 威靈仙도 NO, TNF-α의 생성과 iNOS 및 COX-2의 발현의 억제65,66), 대식세포에서 NO, iNOS, TNF-α, COX-2, PGE2 등 염증 매개 물질의 생성 억제67,68), IL-4의 분비 촉진69), 염증성 단백질의 발현 변화70)등의 작용으로 항염증 효과가 발표되었다.
- 또한 병리조직학적 분석을 통해 류마토이드 관절염에서 나타나는 관절내의 특징적인 소견에 대하여 그리고 골학적인 분석을 통해 동물의 골 파괴 및 관절 염증의 정도에 대하여 유의미한 결과를 확인하였다. 한약제제 투여의 효과 외에도 STRASA와 ARRIVE guidelines을 이용해 국내에서 발표된 한약제제를 이용한 류마토이드 관절염 동물모델에 관한 논문을 분석하여 국내 실험 논문들을 확인한 결과 각각 63%와 51%의 보고수준을 나타냈다.
- 35편의 논문을 6가지의 분석 방법을 통해 분석한 결과 류마토이드 관절염의 증상 및 염증 소견에 대한 한약제제의 치료 기전을 확인할 수 있었다. 형태학적인 분석을 통해 실험동물의 관절에서 발견되는 부종 및 체중의 감소에 대한 한약 투여군의 치료 기전을 확인할 수 있었고, 혈액학적으로 여러 cytokine의 농도의 변화로 류마토이드 관절염의 염증반응에 대한 한약제제의 작용을 확인할 수 있었다. 또한 병리조직학적 분석을 통해 류마토이드 관절염에서 나타나는 관절내의 특징적인 소견에 대하여 그리고 골학적인 분석을 통해 동물의 골 파괴 및 관절 염증의 정도에 대하여 유의미한 결과를 확인하였다.
후속연구
- 추후 한약제제 개발이 목표라면, 실험 연구 단계에서부터 GMP 인증을 받은 기관에서 기준 및 시험 방법이 확립된 한약제제를 이용하여 전임상 연구를 실시하는 것을 고려하는 것이 제제개발 과정을 단축시킬 수 있다. 따라서 향후 동물 실험 연구에서는 어떤 시설, 회사에서 생산된 한약제제를 이용했는지 혹은 자체적으로 전탕 및 감압농축한 제제를 사용했는지 보고해야 할 필요성이 있다. 또한 동물 모델에 콜라겐 등으로 유발되는 관절염이 사람의 류마토이드 관절염과 유사한 임상 소견, 발병 기전, 병리소견을 보이지만, 질병의 진행양상이 지속적으로 악화되는 소견을 보이는 등 사람의 류마토이드 관절염과의 일부 양상의 차이가 있다82).
- 국가별로 한약의 처방 경향에는 차이가 존재한다. 따라서, 향후 보다 광범위한 한방처방의 관절염 개선 효과의 입증을 위해 중국과 일본 등의 임상에서 사용되는 처방을 대상으로, 국가별 연구 현황에 대한 추가적인 연구가 필요하다.
- 동물모델 실험 연구에서 방법에 대한 정확하고 상세한 설명을 게시하는 것은 윤리적인 필수 요건이다. 또한, 연구의 질을 향상시키고 임상 연구에 활용할 수 있도록 보고의 질을 향상시키는 것이 필요할 것으로 사료된다. 본 연구는 관절염의 한약제제 개발을 위한 기초단계로서 수행되었으며, 향후 보다 광범위한 한방처방의 관절염 개선 효과의 입증을 위해 중국과 일본 등의 임상에서 사용되는 처방을 추가적으로 연구하고, 빈용 처방들을 기반으로 하여 동일한 처방의 다양한 효과에 대한 리뷰가 이뤄져야 할 것으로 생각된다.
- 이는 한약재의 지표물질을 설정하기 어려운 부분과도 관련이 있을 것으로 보인다. 또한, 추후 한약제제의 개발에 있어 허가 단계에서 자료로 인정받을 수 있으려면 제약회사 내에서 생산된 제제를 이용해야 하는데 그에 대한 정보를 모든 논문에서 확인할 수 없었다. 추후 한약제제 개발이 목표라면, 실험 연구 단계에서부터 GMP 인증을 받은 기관에서 기준 및 시험 방법이 확립된 한약제제를 이용하여 전임상 연구를 실시하는 것을 고려하는 것이 제제개발 과정을 단축시킬 수 있다.
- 또한, 연구의 질을 향상시키고 임상 연구에 활용할 수 있도록 보고의 질을 향상시키는 것이 필요할 것으로 사료된다. 본 연구는 관절염의 한약제제 개발을 위한 기초단계로서 수행되었으며, 향후 보다 광범위한 한방처방의 관절염 개선 효과의 입증을 위해 중국과 일본 등의 임상에서 사용되는 처방을 추가적으로 연구하고, 빈용 처방들을 기반으로 하여 동일한 처방의 다양한 효과에 대한 리뷰가 이뤄져야 할 것으로 생각된다.
- 본 연구는 국내 류마토이드 관련 실험연구에 대해 STRASA와 ARRIVE guidelines을 이용하여 실험논문의 보고 상황에 대해 평가한 최초의 논문으로 실험연구 논문들의 보고수준을 향상하는 것의 필요성을 제시하고, 부족했던 부분에 대해 언급함으로써 추후 양질의 연구들을 진행하는 데에 도움이 될 것으로 사료된다. 또한 여러 분석을 통해 류마토이드 관절염의 병리기전에 중요한 역할을 하는 inflammatory cytokine의 발현의 억제와 anti-inflammatory cytokine의 발현 증가로 한약의 염증에 관여하는 메커니즘에 대해 제시할 수 있었고, 류마토이드 실험 논문에서 주로 사용되는 평가지표들과 그 결과에 대해 알 수 있었다.
- 또한 다빈도 처방의 부재로 공통점과 각 처방의 안전성에 대한 지표를 찾기 어려웠다. 본 연구의 또 다른 한계점은 국내의 실험논문만을 대상으로 했다는 점이다. 국가별로 한약의 처방 경향에는 차이가 존재한다.
- 또한, 추후 한약제제의 개발에 있어 허가 단계에서 자료로 인정받을 수 있으려면 제약회사 내에서 생산된 제제를 이용해야 하는데 그에 대한 정보를 모든 논문에서 확인할 수 없었다. 추후 한약제제 개발이 목표라면, 실험 연구 단계에서부터 GMP 인증을 받은 기관에서 기준 및 시험 방법이 확립된 한약제제를 이용하여 전임상 연구를 실시하는 것을 고려하는 것이 제제개발 과정을 단축시킬 수 있다. 따라서 향후 동물 실험 연구에서는 어떤 시설, 회사에서 생산된 한약제제를 이용했는지 혹은 자체적으로 전탕 및 감압농축한 제제를 사용했는지 보고해야 할 필요성이 있다.
- 동물을 이용하는 실험 연구의 의의는 인간에게 확대 적용 시킬 수 있다는 데 있고 그 결과에 대한 정확한 해석 및 분석을 위해 보다 명확한 기준이 필요하다. 현재 발표된 여러 표준안의 활용으로 침 임상 연구 보고의 질적 향상에 유의한 기여를 한 것으로 평가81)되고 있으므로 동물실험연구에도 표준안을 활용한다면, 향후 보다 높은 신뢰도와 재현성으로 정보가 축적되어 임상 발전에 기여할 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.