본 연구는 2018년 10월에서 2019년 9월까지 부산지역 유통 판매되고 있는 872건의 다양한 식품을 대상으로 B. cereus 오염도를 분석하였다. 총 872건 중 78건(8.9%)에서 B. cereus 검출되었으며 식품별 B. cereus 검출률은 김치·절임·조림·젓갈류에서 23.9%, 조미식품 19.4%, 바로 섭취가능한 농산물 10.5%, 조리식품 7.3%, 즉석섭취식품 5.6%, 신선편의식품 5.0%, 즉석조리식품 0.0% 순으로 분포하였으며 통계적으로 유의한 차이가 있었다. B. cereus 오염 수준은 불검출에서 최대 20,000 CFU/g로 평균 48 CFU/g였으며, 식품별 B.cereus 오염도에는 차이가 없었다. 78건의 검체에서 분리된 113주의 B. cereus의 독소 유전자 확인 시험을 수행하였다. 식품에서 분리된 113주를 대상으로 B. cereus 독소유전자 확인 결과 최소 1종류에서 최대 5종류의 독소 유전자가 검출되었으며 총 18개 profile로 분류되었다. 장독소 5종(Cytk-nheA-entFM-bceT-hblC)을 모두 보유한 경우가 34주(30.1%)로 가장 많았다.
본 연구는 2018년 10월에서 2019년 9월까지 부산지역 유통 판매되고 있는 872건의 다양한 식품을 대상으로 B. cereus 오염도를 분석하였다. 총 872건 중 78건(8.9%)에서 B. cereus 검출되었으며 식품별 B. cereus 검출률은 김치·절임·조림·젓갈류에서 23.9%, 조미식품 19.4%, 바로 섭취가능한 농산물 10.5%, 조리식품 7.3%, 즉석섭취식품 5.6%, 신선편의식품 5.0%, 즉석조리식품 0.0% 순으로 분포하였으며 통계적으로 유의한 차이가 있었다. B. cereus 오염 수준은 불검출에서 최대 20,000 CFU/g로 평균 48 CFU/g였으며, 식품별 B.cereus 오염도에는 차이가 없었다. 78건의 검체에서 분리된 113주의 B. cereus의 독소 유전자 확인 시험을 수행하였다. 식품에서 분리된 113주를 대상으로 B. cereus 독소유전자 확인 결과 최소 1종류에서 최대 5종류의 독소 유전자가 검출되었으며 총 18개 profile로 분류되었다. 장독소 5종(Cytk-nheA-entFM-bceT-hblC)을 모두 보유한 경우가 34주(30.1%)로 가장 많았다.
The purpose of this study was to provide basic data necessary for the prevention of food poisoning and safe food management. We examined 872 food samples for B. cereus in accordance with the MFDS Food Code and investigated characteristics of their harboring toxin genes. We detected and isolated 113 ...
The purpose of this study was to provide basic data necessary for the prevention of food poisoning and safe food management. We examined 872 food samples for B. cereus in accordance with the MFDS Food Code and investigated characteristics of their harboring toxin genes. We detected and isolated 113 strains of B. cereus from 78 food samples (8.9%), and the average detection level was 48 CFU/g. B. cereus isolates carried at least 1 toxin gene among the emetic toxins and 5 enterotoxin genes. The toxin gene profiles of B. cereus were classified into 18 different types of isolates showing genetic diversity. Among the strains, 34 (30.1%) had all 5 enterotoxin genes (Cytk-nheA-entFM-bceT-hblC), accounting for the highest percentage. The entFM and nheA genes were major enterotoxin genes, while the emetic toxin gene, CER, was the least detected in B. cereus isolated from food samples.
The purpose of this study was to provide basic data necessary for the prevention of food poisoning and safe food management. We examined 872 food samples for B. cereus in accordance with the MFDS Food Code and investigated characteristics of their harboring toxin genes. We detected and isolated 113 strains of B. cereus from 78 food samples (8.9%), and the average detection level was 48 CFU/g. B. cereus isolates carried at least 1 toxin gene among the emetic toxins and 5 enterotoxin genes. The toxin gene profiles of B. cereus were classified into 18 different types of isolates showing genetic diversity. Among the strains, 34 (30.1%) had all 5 enterotoxin genes (Cytk-nheA-entFM-bceT-hblC), accounting for the highest percentage. The entFM and nheA genes were major enterotoxin genes, while the emetic toxin gene, CER, was the least detected in B. cereus isolated from food samples.
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문제 정의
따라서 본 연구에서는 부산지역 백화점, 대형마트, 편의점에서 판매하는 즉석섭취·편의식품, 조미식품, 절임·조림류 등 가공식품과 식품접객업소에서 판매하는 조리식품에서 식중독 원인이 되는 B. cereus의 오염도와 독소 유전자 분포현황을 파악하여 B. cereus에 의한 식중독 발생을 예방하고자 하였다.
제안 방법
계수한 평판에서 전형적인 집락을 선별하여 Blood agar plate (BAP, Hanil Komed,Seongnam, Korea)에 접종하고 30℃에서 24시간 배양하여 βhemolysis를 확인하였으며, tryptic soy agar (TSA, BD, FranklinLakes, NJ, USA) 배지에 계대한 후 37℃에서 24시간 배양하여 VITEK 2 Compact (BioMerieux, Marcy l'Etoile, France)의 BCL card를 이용하여 생화학동정을 실시하였다.
cereus strain을 멸균증류수 100 µL에 부유시켜 100℃에서 30분간 끓이고 4℃에서 14,000 rpm, 5분간 원심분리한 후 상층액을 template DNA로 사용하였다. 먼저 B. cereus와 B. thuringiensis를 구분하기 위해 곤충독소단백질 유전자(cry1) 검출 확인을 Bacillus cereus Detection (Bc/Bt distinguish) PCR Kit (Jinsungunitech, Seoul, Korea)를 사용하여 Polymerase Chain Reaction (PCR, Life Technology Holdings, Singapore)실시하였다. 분리된 B.
Nom, France)로 균질화한 후 시험용액으로 사용하였다. 시험용액을 단계별 희석하여 Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar (MYP, Oxoid, Basingstoke, England에 총 접종액이 1 mL가 되도록 도말하여 30℃에서 24시간 배양한 후 집락 주변에 lecitinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수하였다. 계수한 평판에서 전형적인 집락을 선별하여 Blood agar plate (BAP, Hanil Komed,Seongnam, Korea)에 접종하고 30℃에서 24시간 배양하여 βhemolysis를 확인하였으며, tryptic soy agar (TSA, BD, FranklinLakes, NJ, USA) 배지에 계대한 후 37℃에서 24시간 배양하여 VITEK 2 Compact (BioMerieux, Marcy l'Etoile, France)의 BCL card를 이용하여 생화학동정을 실시하였다.
설사형 식중독과 관련된 enterotoxin은 HBL (heamoltic enterotoxin ; hblA, hblC, hblD), NHE (non-heamoltic enterotoxin : nheA, nheB, nheC), CytotoxinK (CytK), enterotoxin FM (entFM), Bacillus cereus toxin T (bceT)가 있으며, 구토형 식중독은 CER(Cereulide)에 의해 발생한다27). 식품에서 분리된 B. cereus 113주를 대상으로 구토 독소 (CER)와 장독소 5종 (CytK, nheA, entFM, bceT, hblC)를 포함한 총 6종의 독소유전자를 분석하였다. 식품별로는 조리식품 33건에서 44주(38.
계수한 평판에서 전형적인 집락을 선별하여 Blood agar plate (BAP, Hanil Komed,Seongnam, Korea)에 접종하고 30℃에서 24시간 배양하여 βhemolysis를 확인하였으며, tryptic soy agar (TSA, BD, FranklinLakes, NJ, USA) 배지에 계대한 후 37℃에서 24시간 배양하여 VITEK 2 Compact (BioMerieux, Marcy l'Etoile, France)의 BCL card를 이용하여 생화학동정을 실시하였다. 추가로 B. cereus와 Bacillus thuringiensis를 구분하기 위해 0.5% basic fuchsin을 이용하여 곤충독소단백질(Insectidal crystal protain) 생성 유무를 현미경으로 확인하였다.
대상 데이터
2018년 10월에서 2019년 9월까지 부산지역 백화점, 대형마트에서 유통 판매되고 있는 즉석섭취식품, 신선편의식품, 즉석조리식품, 김치·절임·조림·젓갈류, 조미식품 등 가공식품 229건, 집단급식소를 포함한 식품접객업소의 조리식품 452건 및 바로 섭취 가능한 농산물 191건 등 총 872건을 연구 대상으로 하였다(Table 1).
cereus 오염도에는 차이가 없었다. 78건의 검체에서 분리된 113주의 B. cereus의 독소 유전자 확인 시험을 수행하였다. 식품에서 분리된 113주를 대상으로 B.
본 연구 결과 기준이 있는 식품에 대해서는 모두 적합하나 기준이 설정되지 않은 농산물 중 모듬쌈채소는 20,000 CFU/g이 검출되어 식품위생법의 즉석섭취· 신선편의식품으로 관리될 경우 기준이 초과대상이다.
본 연구는 2018년 10월에서 2019년 9월까지 부산지역 유통 판매되고 있는 872건의 다양한 식품을 대상으로 B.cereus 오염도를 분석하였다. 총 872건 중 78건(8.
시험에 사용된 검체는 저온(5±3℃)을 유지하여 1시간 이내에 실험실로 운반하여 실험하였다.
데이터처리
본 연구에 분석 결과는 Microsoft Office Excel 2010의 통계 프로그램을 사용하여 Chi-square test 및 ANOVA 분석을 실시하였고, P 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판단하였다.
이론/모형
일반시험법 4. 미생물 시험법 4.18 바실러스 세레우스 시험법에 따라 검체 25 g을 무균적으로 취하여 멸균 생리식염수 225 mL를 가하여 stomacker (BagMixer 400VW, Interscience, St. Nom, France)로 균질화한 후 시험용액으로 사용하였다. 시험용액을 단계별 희석하여 Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar (MYP, Oxoid, Basingstoke, England에 총 접종액이 1 mL가 되도록 도말하여 30℃에서 24시간 배양한 후 집락 주변에 lecitinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수하였다.
분리된 B. cereus의 독소유전자는 질병관리본부의 수인성·식품매개질환 실험실 진단 실무 지침20)에 따라 B. cereus가 생산하는 장독소 5종(hblC, bceT, entFM, nheA, CytK)과 구토독소(CER)에 대해 PowerCheckTM Bacillus cereus 6-toxin Detection Kit (Kogenebiotech, Seoul, Korea)를 사용하여 제조 사에서 제시한 방법으로 PCR을 실시하였다.
성능/효과
0% 순으로 분포하였으며 통계적으로 유의한 차이가 있었다. B. cereus 오염 수준은 불검출에서 최대 20,000 CFU/g로 평균 48 CFU/g였으며, 식품별 B.cereus 오염도에는 차이가 없었다. 78건의 검체에서 분리된 113주의 B.
B. cereus의 구토독소인 CER 유전자를 보유한 profile은 3, 15로 2종류가 있으며 모두 장독소를 1개 이상 보유하였다. Profile 13은 조리식품 2주, 바로 섭취 가능한 농산물 2주 총 4주(3.
cereus가 생산하는 장독소 5종(hblC, bceT, entFM, nheA, CytK)과 구토독소(CER)에 대해 PowerCheckTM Bacillus cereus 6-toxin Detection Kit (Kogenebiotech, Seoul, Korea)를 사용하여 제조 사에서 제시한 방법으로 PCR을 실시하였다. PCR 결과는 1.8% agarose gel로 전기 영동하여 확인하였다.
5%, Hwang 등25)의 서울지역 반찬류에서는 검출되지 않았다는 보고와 비교하면 본 연구의 김치·절임·조림·젓갈류에서는 다소 높게 검출되었다. 따라서 식품에서의 B. cereus 검출률은 식품 분류별, 검체 수, 시기, 지역별로 차이를 보였다.
바로 섭취 가능한 농산물의 B. cereus가 평균 113 CFU/g으로 가장 높았으며, 다음으로 즉석섭취식품이 93 CFU/g, 김치·절임·조림·젓갈류 38 CFU/g, 조미식품 28 CFU/g, 조리식품 17 CFU/g순으로 검출되었으며 식품별 B. cereus 오염도에는 차이가 없었다(P=0.917).
cereus는 저위해성 식중독균으로 현재 식품 공전21)에는 일부 식품에서만 정량 기준이 설정되어있고, 독소유전자에 대한 기준이 없는 실정이다. 본 연구를 통해 부산지역에서 유통되는 식품 중 B. cereus의 오염 수준은 비교적 안전한 수준이지만 분리된 B. cereus가 다양한 독소 유전자를 보유하였음을 알 수 있었다.
3%를 보였다. 본 연구에서는 이전 연구에 비해 B. cereus 검출률이 낮은 경향을 보였다. 그러나 Choi 등24)의 울산지역 반찬류에 대한 B.
9%)가 확인되었다. 분리균주별 1개에서 최대 5개까지의 독소 유전자를 보유하였으며, 독소 유전자 존재 유무에 따라 총 18개의 profile로 분류되어 독소유전자의 다양성을 나타내었다(Table 4). 장독소 5종(Cytk-nheAentFM-bceT-hblC)을 모두 보유한 균주가 34주(30.
식품별 검출률을 살펴보면 반찬으로 섭취되고 있는 김치·절임·조림·젓갈류에서 23.9%로 가장 높게 나타났으며, 다음으로 조미식품 19.4%, 바로 섭취 가능한 농산물 10.5%, 조리식품 7.3%, 즉석섭취 식품 5.6%, 신선편의식품 5.0% 순이며, 즉석조리식품에서는 검출되지 않았다.
cereus의 독소 유전자 확인 시험을 수행하였다. 식품에서 분리된 113주를 대상으로 B. cereus 독소유전자 확인 결과 최소 1종류에서 최대 5종류의 독소 유전자가 검출되었으며 총 18개 profile로 분류되었다. 장독소 5종(Cytk-nheA-entFM-bceT-hblC)을 모두 보유한 경우가 34주(30.
분리균주별 1개에서 최대 5개까지의 독소 유전자를 보유하였으며, 독소 유전자 존재 유무에 따라 총 18개의 profile로 분류되어 독소유전자의 다양성을 나타내었다(Table 4). 장독소 5종(Cytk-nheAentFM-bceT-hblC)을 모두 보유한 균주가 34주(30.1%)로 가장 많았으며, 다음으로 nheA-entFM 15주(13.2%), nheAentFM-bceT-hblC 13주(11.5%)으로 순이었다. 식품별 분리균주의 독소 유전자 profile에 대한 유의한 차이는 없었다(P = 0.
전체적으로 B. cereus 검출률이 식품에 따라 유의한 차이가 있음을 확인하였다(P < 0.05).
총 872건 중 78건(8.9%)에서 B. cereus 검출되었으며 식품별 B. cereus 검출률은 김치· 절임·조림·젓갈류에서 23.9%, 조미식품 19.4%, 바로 섭취 가능한 농산물 10.5%, 조리식품 7.3%, 즉석섭취식품 5.6%, 신선편의식품 5.0%, 즉석조리식품 0.0% 순으로 분포하였으며 통계적으로 유의한 차이가 있었다.
총 872건의 검체 중 78건에서 B. cereus가 검출되어 8.9%의 검출률을 보였다(Table 2). 식품별 검출률을 살펴보면 반찬으로 섭취되고 있는 김치·절임·조림·젓갈류에서 23.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
B. cereus란?
B. cereus는 토양 및 야채, 곡류, 우유 등 식품 원료에서 흔히 발견되는 그람양성균으로 대부분의 식품 가공처리 과정에서도 생존 가능한 포자 형성균이다8). B.
B. cereus가 인체에 미치는 영향은?
B. cereus는 인체에 설사형 및 구토형의 두 유형의 식중독을 일으킨다9,10). 설사형 식중독은 B.
B. cereus에 의한 식중독이 면역력 저하자에게 나타날때의 특징은?
cereus에 의한 식중독은 다른 식중독균에 비해 증세가 경미하기 때문에 신고, 보고 건수가 적다는 것을 감안하면 사실상 이보다 더 많은 식중독의 원인이 되었을 것으로 예상된다. 또한 B. cereus는 균수가 105 CFU/g 이상 되어야 발병하지만 어린이, 노약자 등 면역력이 저하된 고위험군에서는 이보다 훨씬 낮은 농도에서도 발병한다고 보고되었다14). 그러나 B.
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