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제안 방법
- 미생물을 찾기 위한 일환으로 Lactobacillus sp.균을 분리하였고 probiotics로서의 특성을 조사하였다.
- 으로 측정하였다. 내담즙산능은 bile salt를 0, 0.1, 0.3, 0.5, 1.0%(w/v)를 첨가하여 MRS broth에 균주(2.0x109 CFU/ml)< 접종하고 37'C애서 6시간 동안 방치한 후, MRS agar plate에 도말하여 생존율(%)을 확인하였다. 열 안정성은 생장배지에서 배양한 다음 실온, 30-C, 60-C, 80C, 100*C에서 10분간 정치 후 잔존 미생물수를 조사하였다.
- 대장균을 MRS배지에 약 5.0X107 CFU/mlo] 되도록 접종하고, 또 하나의 MRS 배지에는 대장균과 분리한 Lactobacillus rhamnosus를 약 5.0x107 CFU/ml 되도록 혼합 접종하였다. 접종된 배지를 37℃ 배양기에서 정치 배양하면서 3시간 또는 6시간 간격으로 배양액을 채취한 후, Nutrient agar에 도말하여 나타난 대장균수를 측정하였으며, MRS 배지에 단독으로 접종한 대장균수와 비교하여 분리 균에 의한 대장균의 생육억제 정도를 비교하였다.
- 0x109 CFU/ml)< 접종하고 37'C애서 6시간 동안 방치한 후, MRS agar plate에 도말하여 생존율(%)을 확인하였다. 열 안정성은 생장배지에서 배양한 다음 실온, 30-C, 60-C, 80C, 100*C에서 10분간 정치 후 잔존 미생물수를 조사하였다.
- 0x107 CFU/ml 되도록 혼합 접종하였다. 접종된 배지를 37℃ 배양기에서 정치 배양하면서 3시간 또는 6시간 간격으로 배양액을 채취한 후, Nutrient agar에 도말하여 나타난 대장균수를 측정하였으며, MRS 배지에 단독으로 접종한 대장균수와 비교하여 분리 균에 의한 대장균의 생육억제 정도를 비교하였다.
- 를 API Kit와 16s rRNA sequencing 방법을 사용하여 동정하였다(3). 총생균수는 평판배지에 0.1ml씩 도말한 후, 콜로니 형성 단위(colony forming unit)를 측정하여 계산하였다.
대상 데이터
- Kefir는 러시아 시장에서 구입한 것을 사용하였고, Lactobacillus acidophilus와 대장균은 한국 유전자은행(KCTC)에서 구입하였다. Lactobacillus sp는 MRS broth(Difco, USA), 대장균은 Nutrient BrothCDifco, USA)를 사용하였다.
- 구입하였다. Lactobacillus sp는 MRS broth(Difco, USA), 대장균은 Nutrient BrothCDifco, USA)를 사용하였다.
이론/모형
- Xylanase, amylase, cellulase 는 3, 5-dinitrosalicylic acid(DNS) 방법(4)으로 흡광도 540nm에서 spectrophotometer를 사용하여 측정하였다. Phytase 활성은 Shimizu의 방법⑸에 따라 측정하였다. 효소활성은 비활성(u mole/min/mg protein)으로 나타내었고, 단백질 농도는 Bradford 방법으로 측정하였다.
- 의 균체를 glass homogenizer로 파쇄한 다음 15,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 상등액을 효소시료로 이용하였다. Xylanase, amylase, cellulase 는 3, 5-dinitrosalicylic acid(DNS) 방법(4)으로 흡광도 540nm에서 spectrophotometer를 사용하여 측정하였다. Phytase 활성은 Shimizu의 방법⑸에 따라 측정하였다.
- 분리균주 중 특성이 가장 우수한 Lactobacillus sp.를 API Kit와 16s rRNA sequencing 방법을 사용하여 동정하였다(3). 총생균수는 평판배지에 0.
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내산성 및 내담즙능 및 열안정성 분석
분리균주의 pH 내성은 Kobayashi등의 방법(6)으로 측정하였다. 내담즙산능은 bile salt를 0, 0.
- Phytase 활성은 Shimizu의 방법⑸에 따라 측정하였다. 효소활성은 비활성(u mole/min/mg protein)으로 나타내었고, 단백질 농도는 Bradford 방법으로 측정하였다.
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