초록 ▼

가) 일본에서 균주 분양 일본으로부터 Thermus aquaticus YT-1, I. flavus AT-62, Thermus, thermophilus HB-27, Thermus thermophilus HB-8, Thermus caldophilus GK-24등 다섯 종류의 균주들을 분양받았다.나) 세포배양 Thermus aquaticus YT-1 균주를 사면배지로부터 접종하여 70℃, 24 시간 진탕배양하여 세포(8g/l)를 수확하였다. 사용된 배양기는 고온에서 견딜 수 있는 특수제작한 제품을 사용하였다.다) Enzyme extrac

가) 일본에서 균주 분양 일본으로부터 Thermus aquaticus YT-1, I. flavus AT-62, Thermus, thermophilus HB-27, Thermus thermophilus HB-8, Thermus caldophilus GK-24등 다섯 종류의 균주들을 분양받았다.나) 세포배양 Thermus aquaticus YT-1 균주를 사면배지로부터 접종하여 70℃, 24 시간 진탕배양하여 세포(8g/l)를 수확하였다. 사용된 배양기는 고온에서 견딜 수 있는 특수제작한 제품을 사용하였다.다) Enzyme extract 제조 수확한 세포를 완충용액에 녹여서 ultrasonication, ammonium sulfate precipitation 방법으로 enzyme extract를 제조하였다.라) 효소정제 및 여러효소의 활성도 측정 Ion exchange chromatography와 affinity chromatography, 전기영동 방법으로 효소를 분리정제하였으며 정제된 효소의 Taq DNA polymerase, endonuclease, exonucleasse, alkaline phosphatase assay를 측정하였다.마) 기존의 DNA polymerase 와의 상호비교 본 실험에서 분리정제한 효소와 CETUS 로부터 구입한 Ampli Taq Recombinant Taq DNA polymerase를 이용하여 PCR을 수행하여 생성된 산물을 비교분석하였다.

Abstract ▼

A thermostable Taq DNA polymerase has been purified from the extreme thermophile Thermus aquaticus YT-1 through chromatographic methods. The mobility of the purified enzyme was corresponding to that of a polypeptide of 60-63 KDa on sodium dodecyl sulfate gel electrophoresis. The purified DNA polymer

A thermostable Taq DNA polymerase has been purified from the extreme thermophile Thermus aquaticus YT-1 through chromatographic methods. The mobility of the purified enzyme was corresponding to that of a polypeptide of 60-63 KDa on sodium dodecyl sulfate gel electrophoresis. The purified DNA polymerase has neither exonuclease (5'→3'), 3'→5') nor endonuclease activities. The comparison of gene amplification by the purified Taq polymerase along with the anthentic sample showed that the enzme is functionally equivalent to the Ampli Taq enzyme provided by Perkin-Elmer Cetus.

목차 Contents

• 제1장 서 론...15
• 제2장 실험재료 및 실험방법...17
• 1. 균주...17
• 2. 배지 및 배양...17
• (1) 전 배양 배지...17
• (2) 본 배양 배지...17
• 3. Crude extract 제조...19
• 4. 단백질 정량...19
• 5. 여러가지 효소의 활성도 측정...19
• (1) DNA polymerase 활성도 측정...19
• (2) Endonuclease assay...20
• (3) Exonuclease assay...21
• (4) Alkaline phosphate assay...21
• (5) PCR test...22
• 6. Polyacrylamide gel electrophoresis...23
• 7. DNA polymerase 의 정제과정...23
• (1) Phospho-cellulose ion exchange chromatography...23
• (2) DEAE-sepharose-CL-6B ion exchange chromatography...24
• (3) DEAE-Sephacel ion exchange chromatography...24
• 8. Chemicals and reagents...25
• 제3장 결과 및 고찰...26
• 제4장 결 론...33
• 참 고 문 헌...34