초록 ▼

조혈모세포 이식 후 주요한 합병증인 이식편대 숙주질환 (graft-versus-host disease, GVHD)은 환자와 공여자 사이의 동종 면역반응에 의해서 발생하며 항백혈병 효과와도 밀접한 연관성을 갖고 있다. 본 연구는 조혈모세포 이식 후 동종 면역반응의 기전을 규명하고 이를 치료에 응용하기 위해서 시행되었다. HLA 일치 동종 조혈모세포 이식을 받은 환자들에서 GVHD 발생과 부조직적합 항원의 한 종류인 adhesion molecule인 CD31 표면항원 유전자의 다양성 (polymorphism)과의 관련성을 밝혀냈다. C

조혈모세포 이식 후 주요한 합병증인 이식편대 숙주질환 (graft-versus-host disease, GVHD)은 환자와 공여자 사이의 동종 면역반응에 의해서 발생하며 항백혈병 효과와도 밀접한 연관성을 갖고 있다. 본 연구는 조혈모세포 이식 후 동종 면역반응의 기전을 규명하고 이를 치료에 응용하기 위해서 시행되었다. HLA 일치 동종 조혈모세포 이식을 받은 환자들에서 GVHD 발생과 부조직적합 항원의 한 종류인 adhesion molecule인 CD31 표면항원 유전자의 다양성 (polymorphism)과의 관련성을 밝혀냈다. CD31 genotype에 따라서 homozygote(Leu or Val)인 경우 유의하게 GVHD 발생율이 높았다. 한편 CD62 또는 LECAM-1 등에서는 의의 있는 결과를 보여주지 않았다. 동종 림프구의 항백혈병 효과를 규명하기 위해서 실험실 내에서 세포독성림프구 (cytotoxic T cells, CTL)를 만들어 보았다. 백혈병 유래의 수상돌기 세포를 만들어서 항원제시세포의 역할을 할 수 있음을 밝혀냈으며 이를 이용한 실험을 통해서 증가된 림프구 증식능을 확인하였다. 이식편대 백혈병 효과의 발생과 각각의 표적세포에 대한 세포 살해능의 검사결과의 강도에 따른 상관성을 분석한 결과, K562 세포주에 대한 반응 강도가 클수록 재발률이 낮은 경향을 보였다. K562 세포주, 백혈병 표적세포 및 환자 PHA blast 세포에 대한 반응에서 한 가지라도 양성반응을 보이는 경우에는 이식 후 백혈병의 재발이 낮았다. 동종 면역반응이 이식편대 백혈병효과로 작용할 것으로 생각되므로 본 실험이 이식 전에 수행된다면 이식 후 재발위험도가 높은 환자들을 미리 예측할 수 있는 예측인자가 될 수 있을 것이다. 자살유전자를 조혈모세포이식에 적용하기 위한 에비연구로서 herpessimplex virus-thymidine kinase (HSV-TK) 유전자의 클로닝 및 재조합을 통하여 retroviral vector를 확립하였고 세포주에 전이하여 발현됨을 확인하였다. 배양된 림프구에 고역가 retrovirus를 이용한 HSV-TK 유전자 전이를 시행할 수 있었고 PCR 방법에 의해서 HSV-TK 유전자 전이효율을 확인할 수 있었다. HSV-TK 유전자가 전이된 림프구를 분리하여 유전자전이 림프구의 시험관 내 활성을 측정하였고 HSV-TK 유전자 발현 종양 세포주 확립하였으며 기존의 방사선 치료효과와 비교하기 위하여 방사선 조사 및 세포 생존률을 조사하였다. 본 연구를 통해 공여자의 림프구에 완벽하게 HSV-TK 유전자를 전이하게 된다면 동종 조혈모세포이식 후 공여자의 림프구에 의해 환자에게 발생할 수 있는 치명적인 GVHD를 조절할 수 있을 것이다. 그리고 이식 후 면역억제 상태에서 빈발하는 cytomegalovirus 등 각종 감염증의 예방 및 치료에 도움을 줄 것이다. 이식 후 재발된 상태의 환자에서 입양면역치료를 시행하는데 공여자의 림프구를 안전하게 주입할 수 있을 것이며, 이러한 방법은 T림프구 제거 골수이식의 단점을 보완할 수 있을 뿐 아니라 HLA가 일치하는 공여자가 없거나 고령인 환자에도 동종 골수이식의 시행을 가능하게 하여 동종 조혈모세포이식의 대상환자의 더욱 범위를 확대시킬 수 있을 것으로 사료된다. 또한 본 연구에서는 국내 최대 골수이식 시술 기관에서 약 1년간 약 100예 이상의 동종 조혈모세포이식 환자를 대상으로 전향적으로 각 장기의 기능을 평가하였다. 소화기, 호흡기, 내분비, 그리고 면역기능에 대한 지표들을 검사하여 지금까지 후향적, 산발적으로 보고되어온 종래의 연구들과 비교하여 의의있는 결과를 나타내었다. 특히 내분비계에 대한 연구가 깊이 이루어져 동종 이식 후 발생한 비갑상선질환 증후군의 발생이 이식 후 예후에도 영향을 미칠 수 있음을 알아내었고이식 후 골대사 변화를 규명하였다.

Abstract ▼

Graft-versus-host disease(GVHD) remains the most common and important allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(HSCT). Severe GVHD, especially grade III to IV, increased mortality, and once established, often responds poorly to therapy. However GVHD is frequently associated with the anti-le

Graft-versus-host disease(GVHD) remains the most common and important allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(HSCT). Severe GVHD, especially grade III to IV, increased mortality, and once established, often responds poorly to therapy. However GVHD is frequently associated with the anti-leukemic effect which reflects induction of allogeneic reaction between recipient and donor and could lead to eradicating leukemic cells surviving after conditioning. An immune-mediated graft-versus-leukemic(GVL) reaction is an important feature of allogeneic HSCT. In our study, immune reaction of GVHD or GVL reaction was examined and a prospective follow-up of 103 patients undergoing allogeneic HSCT was preformed during about 1 year.
We showed association of recipient CD31 genotype, an adhesion molecule, and with the occurrence of acute GVHD in HLA-matched sibling or unrelated HSCT. Homozygote(Leu or Val) type of recipient CD31 was significantly correlated with GVHD incidence. Also, the CD31 genotype difference between recipients and donors had an influence of GVHD development. We tried to define the characteristics of anti-leukemic cytotoxic T cells(CTL) and to evaluate the clinical implications of the cellular immunity in leukemic patients. Leukemic cell-derived dendritic cells(DCs) were made and could be used as antigen presenting cells. CTL have been generated using the DCs. The efficacy of generating CTL against leukemic target cells were AML, CML-CP/CML-BC, and CML-AP in order. Low leukemia relapse rate was shown to be correlated with the intense cytotoxicity for K562 cell lines. Besides positive cytotoxic effects for K562 cell lines, autologous leukemic cells or patients' PHA blasts as target cell was associated with lower relapse rate after HSCT. When we combine the cytotoxicity effects for all three target cell types, the possibilityof relapse may be significantly predictable. A viral enzyme, herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK), which converts gancyclovir from an inactive prodrug to a cytotoxic agent by phosphorylation, are being actively investigated for use in genetherapy. The HSV-TK gene was cloned into retroviral vector and established the clones producing retroviruses carrying the HSV-TK gene. We confirmed that the HSV-TK gene could transduce lymphocytes. The carcinoma cell lines were transduced with high-titer recombinational effect of sucide gene therapy and radiotherapy. Severe GVHD may be controlled when the transduction of suicide gene is performed with effect. The addition of HSV-TK gene therapy to standard radiation therapy may improve theeffectiveness of treatment for cancers.
In this study more than 100 patients undergoing allogeneic HSCT were evaluated for function of major organs such as lung, liver,stomach, intestine and endocrine system. We examined the association between bone metabolism and HSCT. In patientsreceiving HSCT was known to dysfunction in many organs, but we found that the dysfunctions could return to normal.

목차 Contents

• I. 연구개발결과 요약문...5
• (한글)...5
• (영문)...6
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...7
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...7
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...8
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...12
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...14
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...19
• 6. 첨부서류...20
• III. 제1세부연구개발과제 연구결과...111
• 1. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...113
• 2. 제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...114
• 3. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...117
• 4. 제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...122
• 5. 제1세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...123
• 6. 제1세부연구개발과제의 활용계획...124
• 7. 참고문헌...125
• III. 제2세부연구개발제 연구결과...127
• 1. 제2세부연구개발제의 최종 연구개발 목표...129
• 2. 제2세부연구개발제의 연구대상 및 방법...129
• 3. 제2세부연구개발제의 최종 연구개발결과...130
• 4. 제2세부연구개발제의 연구결과 고찰 및 결론...130
• 5. 제2세부연구개발제의 연구성과 및 목표달성도...132
• 6. 제2세부연구개발제의 활용계획...133
• 7. 참고문헌...133
• III. 제3세부연구개발제 연구결과...135
• 1. 제3세부연구개발제의 최종 연구개발 목표...137
• 2. 제3세부연구개발제의 연구대상 및 방법...138
• 3. 제3세부연구개발제의 최종 연구개발결과...140
• 4. 제3세부연구개발제의 연구결과 고찰 및 결론...144
• 5. 제3세부연구개발제의 연구성과 및 목표달성도...145
• 6. 제3세부연구개발제의 활용계획...146
• 7. 참고문헌...147
• III. 제4세부연구개발제 연구결과...149
• 1. 제4세부연구개발제의 최종 연구개발 목표...151
• 2. 제4세부연구개발제의 연구대상 및 방법...151
• 3. 제4세부연구개발제의 최종 연구개발결과...151
• 4. 제4세부연구개발제의 연구결과 고찰 및 결론...156
• 5. 제4세부연구개발제의 연구성과 및 목표달성도...157
• 6. 제4세부연구개발제의 활용계획...159
• 7. 참고문헌...160