초록 ▼

- 수산가공 부산물인 참치 내장으로부터 고활성의 단백질 가수분해효소 개발
- 가자미와 민태 필렛잔사 및 민태 껍질을 참치 내장에서 추출한 효소로 분해
- 가수분해물 중에 존재하는 항산화, 항고혈압 및 항암 등의 생리활성을 탐색
- 막효소반응기를 이용하여 생리기능성을 가지는 분자량만을 대량으로 생산
- 가자미와 민태 필렛잔사 및 민태껍질을 참치 내장으로 가수분해시킨 분해물 중의 항산화, 항고혈압 및 항암 활성 등의 생리기능성을 가지는 펩타이드를 이용한 천연조미료를 개발하기에 앞서 그 기초자료로서 각 생리기능성 펩

- 수산가공 부산물인 참치 내장으로부터 고활성의 단백질 가수분해효소 개발
- 가자미와 민태 필렛잔사 및 민태 껍질을 참치 내장에서 추출한 효소로 분해
- 가수분해물 중에 존재하는 항산화, 항고혈압 및 항암 등의 생리활성을 탐색
- 막효소반응기를 이용하여 생리기능성을 가지는 분자량만을 대량으로 생산
- 가자미와 민태 필렛잔사 및 민태껍질을 참치 내장으로 가수분해시킨 분해물 중의 항산화, 항고혈압 및 항암 활성 등의 생리기능성을 가지는 펩타이드를 이용한 천연조미료를 개발하기에 앞서 그 기초자료로서 각 생리기능성 펩타이드를 분리정제 및 구조 규명
- 1차년도에서 개발한 기능성 펩타이드가 혼합되어 있는 천연 기능성 조미료를 제조할 때 첨가할 향미조미액을 홍합 발효액으로부터 개발
- 생리기능성 펩타이드와 향미성분이 함유된 천연 기능성 복합 조미료의 관능검사 및 생체내 안전성을 검토

목차 Contents

• 제 1 장 수산가공폐기물(가자미 frame 및 민태껍질)로부터 가수분해물의 제조 및 기능성 소재로서의 이용...29
• 제 1 절 서 론...29
• 제 2 절 재료 및 방법...37
• 1. 재료...37
• 2. 참치 내장으로부터 조효소의 추출 및 활성측정...38
• 2.1. 참치내장으로부터 조효소의 추출...38
• 2.2. 참치 내장에서 추출한 조효소의 활성 측정...40
• 2.2.1. 천연기질에 대한 활성 측정...40
• 2.2.2. 합성기질에 대한 활성 측정...41
• 2.2.2.1. Azocoll에 대한 활성 측정...41
• 2.2.2.2. Trypsin에 대한 합성기질의 활성 측정...41
• 2.2.2.3. α-Chymotrypsin에 대한 합성기질의 활성 측정...42
• 3. 가자미 frame 단백질에 대한 최적 가수분해조건 검토...43
• 3.1. 일반성분 분석...43
• 3.2. 가수분해도 측정...43
• 3.3. pH 효과...43
• 3.4. 온도에 대한 효과...44
• 3.5. 기질농도에 대한 효과...44
• 3.6. 기질 대 효소비에 대한 효과...44
• 3.7. 반응시간에 대한 효과...44
• 3.8. 가자미 frame단백질 가수분해물의 분자량별 분획...44
• 4. 민태 껍질로부터 젤라틴의 추출...45
• 5. 민태 껍질 젤라틴의 가수분해 및 분자량별 분리...45
• 5.1. 젤라틴의 최적 가수분해효소의 선별...45
• 5.2. 가수분해도 측정...45
• 5.3. pH 효과...46
• 5.4. 온도에 대한 효과...46
• 5.5. 기질농도에 대한 효과...46
• 5.6. 기질 대 효소비에 대한 효과...46
• 5.7. 반응시간에 대한 효과...46
• 5.8. 민태 껍질 젤라틴 가수분해물의 분자량별 분획...47
• 6. 가수분해물에 대한 항산화활성 측정...49
• 6.1. Ferric thiocyanate method...49
• 6.2. Radical scavenging activity (RSA) 측정...49
• 6.3. 농도에 따른 항산화력 측정...49
• 6.4. 상승효과 측정...49
• 6.5. 세포배양계에서의 항산화효과...50
• 6.5.1. 세포배양...50
• 6.5.2. 세포정량...50
• 6.5.3. 항산화활성물질의 세포독성 측정...50
• 6.5.4. t-BHP 농도별 세포괴사에 대한 가수분해물의 효과...51
• 6.5.5. t-BHP의 세포괴사에 대한 가수분해물의 농도별 효과...51
• 7. 항고혈압 활성 측정...51
• 7.1. ACE 저해활성을 통한 항고혈압활성 측정...51
• 7.2. In vivo에 의한 혈압강하활성 측정...52
• 8. 생리기능성 물질의 분리, 정제 및 특성...53
• 8.1. 이온교환 크로마토그래피...53
• 8.2. 겔여과 크로마토그래피...53
• 8.3. HPLC를 이용한 생리활성물질의 최종 분리 및 정제...54
• 8.4. 생리활성 펩타이드의 정제도 및 분자량 측정...54
• 8.5. 생리활성 펩타이드의 구성아미노산 분석...54
• 8.6. 생리활성 펩타이드의 아미노산 서열분석을 통한 2차 구조해석...54
• 제 3 절 결과 및 고찰...56
• 1. 가자미 frame 및 민태 껍질의 일반성분 분석...56
• 2. 어류 내장 유래 조효소의 추출 및 특성...57
• 2.1. 천연기질에 대한 조효소의 활성...57
• 2.2. 합성기질에 대한 활성...58
• 3. 가자미 frame 단백질에 대한 최적 가수분해 조건...60
• 3.1. 효소별 단백질 가수분해도...60
• 3.2. TICE를 이용한 가자미 frame 단백따른 가수분해도 측정...60
• 3.2.2. 온도에 따른 가수분해도 측정...63
• 3.2.3. 기질농도에 따른 가수분해 효과...63
• 3.2.4. 기질 대 효소비에 따른 가수분해 효과...66
• 3.2.5. 가수분해에 대한 반응시간의 효과...66
• 4. 가자미 frame 단백질 가수분해물에 대한 생리활성 스크리닝...69
• 4.1. 효소별 가수분해물의 항산화효과 예비 검토...69
• 4.2. 항고혈압 효과 예비 검토...69
• 5. 가자미 frame 단백질로부터 항산화활성 peptide 탐색...69
• 5.1. 가자미 frame으로부터 항산화활성을 위한 가수분해물 제조...70
• 5.2. 한외여과막 반응기를 이용한 가자미 frame 가수분해물의 분자량별 분리...70
• 5.3. 분자량별 가수분해물의 항산화활성 효과...74
• 5.4. 가자미 단백질 가수분해물의 농도에 대한 항산화성 효과...80
• 5.5. 상승효과...80
• 6. 가자미 frame 가수분해물로부터 고분자 항산화활성 펩타이드의 분리 및 정제...85
• 6.1. 항산화활성 펩타이드의 분리 및 정제...85
• 6.1.1. 이온 크로마토그래피...85
• 6.1.2. 겔 크로마토그래피...85
• 6.1.3. HPLC를 이용한 역상 크로마토그래피...86
• 6.2. 순도확인 및 분자량 측정...91
• 6.3. 항산화 펩타이드의 아미노산 조성 및 2차 구조분석...91
• 6.4. 세포 배양계에서 가자미 frame 가수분해물의 항산화활성 검토...93
• 6.4.1. 배양 정상간세포에 대한 항산화활성 peptide의 세포독성...93
• 6.4.2. t-BHP 농도별 세포괴사에 대한 가수분해물의 항산화작용...93
• 6.4.3. t-BHP로 유도된 배양 간세포에서 lipid peroxidation에 대한 항산화 펩타이드의 효과...94
• 6.4.4. 세포배양계에서의 항산화 펩타이드가 항산화 효소에 미치는 효과...94
• 7. 가자미 frame 단백질로부터 항고혈압 peptide 탐색...103
• 7.1. 가자미 frame으로부터 항고혈압활성 가수분해물 제조...103
• 7.2. 한외여과막 반응기를 이용한 ACE 저해활성 peptide의 분리...103
• 7.3. 가수분해물로부터 ACE 저해 펩타이드의 분리ㆍ정제...107
• 7.3.1. 이온교환 크로마토그래피...107
• 7.3.2. HPLC상에서의 겔 크로마토그래피...107
• 7.3.3. HPLC를 이용한 역상 크로마토그래피...112
• 7.4. MALDI-TOF mass를 이용한 분자량 폭정 및 정제도 확인...116
• 7.5. ACE 저해활성 펩타이드의 아미노산 서열결정...116
• 7.6. ACE 저해활성 펩타이드의 in vivo에서 혈압강하 활성측정...118
• 7.7. 펩타이드의 ACE 저해작용 기작...118
• 8. 민태 껍질로부터 젤라틴(gelatin)의 가수분해물 제조...123
• 8.1.민태 껍질로부터 gelatin 추출...123
• 8.2. 효소에 따른 가수분해도 측정...128
• 9. 민태 껍질 젤라틴 가수분해물에 대한 생리활성 스크리닝...128
• 9.1. 효소별 가수분해물의 항산화활성 검토...128
• 9.2. 항고혈압 활성의 검토...129
• 10. 민태 껍질 젤라틴으로부터 항산화활성 펩타이드 탐색...129
• 10.1. 민태 껍질 젤라틴 가수분해물의 분자량별 분리...129
• 10.2. 분자량별 가수분해물의 항산화활성 효과...129
• 10.3. 상승효과...130
• 11. 민태 껍질 젤라틴 가수분해물로부터 항산화활성 펩타이드의 분리 및 정제...135
• 11.1. 항산화활성 펩타이드의 분리 및 정제...135
• 11.2. 항산화 펩타이드의 아미노산 서열분석...140
• 12. 세포 배양계에서 민태 껍질 젤라틴 가수분해물의 항산화활성 검토...142
• 12.1. 배양 정상간세포에 대한 가수분해물의 세포독성의 항산화작용...142
• 12.3. t-BHP로 유도된 배양 간세포에서 lipid peroxidation에 대한 항산화 펩타이드의 효과...142
• 13. 세포배양계에서의 항산화 펩타이드가 항산화 효소에 미치는 효과...146
• 제 4 절 요 약...151
• 제 2 장 홍합 발효조미액 및 수산가공잔사 가수분해물을 이용한 기능성 천연조미료의 개발...155
• 제 1 절 서 론...155
• 제 2 절 재료 및 방법...157
• 1. 재료...157
• 2. 홍합을 이용한 발효조미액의 제조...158
• 3. 홍합 발효조미액의 성분분석...158
• 3.1. 일반성분 분석...158
• 3.2. 구성아미노산 분석...158
• 3.3. 유리아미노산 분석...158
• 3.4. 핵산관련물질의 분석...159
• 4. 홍합발효조미액 성분의 생리활성 검토...159
• 4.1. 항산화활성 측정...159
• 4.1.1. Ferric thiocyanate method...159
• 4.1.2. Radical scavenging activity (RSA) 측정...160
• 4.2. 항고혈압 활성 측정...160
• 4.2.1. ACE 저해활성을 통한 항고혈압활성 측정...160
• 4.2.2. In vivo에 의한 혈압강하활성 측정...160
• 4.3. 항암활성 측정...161
• 4.3.1. 세포배양...161
• 4.3.2. 세포정량...161
• 4.3.3. 세포증식능 측정에 의한 항암활성 측정...161
• 4.3.4. 항암활성물질의 농도에 따른 세포독성 측정...162
• 5. 홍합 발효조미액 가수분해물로부터 생리활성 펩타이드의 분리 및 정제...162
• 5.1. 이온교환 크로마토그래피...162
• 5.2. 겔여과 크로마토그래피...163
• 5.3. HPLC를 이용한 생리활성물질의 최종 분리 및 정제...163
• 5.4. 생리활성 펩타이드의 정제도 및 분자량 측정...163
• 5.5. 생리활성 펩타이드의 아미노산 서열분석을 통한 2차 구조해석...163
• 6. 천연 기능성 복합 조미료 제조...164
• 7. 관능평가...164
• 제 3 절 결과 및 고찰...165
• 1. 폐류를 이용한 발효조미액의 제조...165
• 1.1. 발효조미액의 제조...165
• 1.2. 발효조미액의 일반성분...165
• 1.3. 발효조미액의 아미노산 분석...165
• 1.4. 발효조미액의 핵산관련물질의 분석...166
• 2. 자가숙성된 홍합 발효조미액으로부터 다양한 생리활성 탐색...171
• 3. 홍합 발효조미액으로부터 항고혈압활성 펩타이드의 분리 및 정제...171
• 3.1 겔 크로마토그래피를 이용한 ACE저해 펩타이드의 분리ㆍ정제...171
• 3.2 이온 크로마토그래피에 의한 ACE저해 펩타이드의 분리ㆍ정제...172
• 3.3 고성능 액체크로마토그래피에 의한 분리...172
• 3.4. ACE 저해활성 펩타이드의 in vivo에서 혈압강하 활성측정...173
• 4. 자가숙성된 홍합 발효조미액으로부터 항암 활성 탐색...181
• 4.1. 홍합 발효조미액으로부터 항암활성 펩타이드의 분리 및 정제...181
• 4.2 배양 정상간세포에 대한 발효조미액의 세포독성...181
• 4.3 홍합 발효조미액의 항암활성...181
• 5. 가자미 frame 및 민태 젤라틴 가수분해물과 홍합 발효조미액을 배합한 천연조미료의 제조...188
• 5.1. 홍합 발효조미액의 관능평가...188
• 5.2. 가자미 frame 및 민태 젤라틴 가수분해물의 관능평가...188
• 6. 기능성 가수분해물과 발효조미액을 이용한 천연조미료의 제조...192
• 제 4 절 요 약...194
• 참고문헌...197
• 최종보고서초록...208