초록 ▼

1. 연구배경
항우울제 치료 시 겪게 되는 가장 큰 어려움은 약물에 반응하지 않는 환자들이 30-40％에 이르고, 약물반응까지 4-6주의 시간이 소요되는 것임. 이러한 시간 지체 현상은 세로토닌 수송단백질에 작용하는 항우울제가 수송단백질에 흡수된 후, 시냅스 낭에서 신경전달물질이 증가되어 시냅스 후 수용체와 결합 후, 2,3차 전달자의 활성화, 핵 내로의 신호 trranslocation 및 전사요소의 활성화를 포함한 일련의 신호전달체제와 밀접한 관계가 있음을 시사함. 과거 동물실험 결과들은 항우울제를 처치한 후에 신호전달체제의

1. 연구배경
항우울제 치료 시 겪게 되는 가장 큰 어려움은 약물에 반응하지 않는 환자들이 30-40％에 이르고, 약물반응까지 4-6주의 시간이 소요되는 것임. 이러한 시간 지체 현상은 세로토닌 수송단백질에 작용하는 항우울제가 수송단백질에 흡수된 후, 시냅스 낭에서 신경전달물질이 증가되어 시냅스 후 수용체와 결합 후, 2,3차 전달자의 활성화, 핵 내로의 신호 trranslocation 및 전사요소의 활성화를 포함한 일련의 신호전달체제와 밀접한 관계가 있음을 시사함. 과거 동물실험 결과들은 항우울제를 처치한 후에 신호전달체제의 전사요소 CREB(cAMP response element binding protein)이 증가된다고 보고함. CREB은 대뇌 신경세포에 존재할 뿐만 아니라 말초 T 림프구에도 존재하며, cytokine과 neurotropin과 같은 세포내 물질들의 기능을 조정함. 또한 CREB은 주요 우울증의 생물학적 표지자로서 언급되어지고 있는 HPA(hypothalamo-pituitary-adrenal)축 신호전달체제의 마지막 부분이고, CREB의 전사활성은 다양한 생물학적변화에 따른 세포의 반응성을 반영함.
2. 연구 목적
신경전달물질계 시냅스 후 신호전달체제에 대한 항우울제의 영향을 평가하기 위하여
(1) 우울증 환자와 정상인간의 CREB 유전자의 발현량과 기능의 차이 평가하고,
(2) 장기간 SSRI 계 항우울제 fluoxetine 의 투여가 우울증 환자의 CREB 유전자의 발현과 기능에 미치는 영향을 평가하고자 하였음.
3. 연구수행 방법
(1) 정상인군과 우울증 환자의 fluoxetine 치료 전과 6주 후, 정맥혈 50ml에서 T 림프구의 핵추출물 순수분리
(2) CREB 단백질의 발현량과 인산화 - immunoblot으로 측정
(3) CREB 단백질의 기능성(CRE-DNA binding activity)- EMSA (electrophoretic mobility shift assay)의 측정
4. 연구수행 결과
(1) 우울증 환자와 정상인 군을 대상으로 CREB 단백질 발현정도, CREB 인산화와 CRE-DNA 결합 정도를 측정함. CREB 단백질 발현정도, CREB 인산화와 CRE-DNA 결합력은 환자군과 정상인 두 간에서 통계적으로 유의한 차이가 관찰되지 않았음.
(2) 하지만 약물에 대한 치료 반응 평가가 종결된 총 31명의 우울증 환자군을 대상으로 분석하였을 때, 항우울제인 fluoxetine을 투여한지 6주 후에는 기초치(0주)에 비해서 치료 반응군과 무반응군 간에서 CREB 단백질 발현량과 인산화 변화량에 유의한 차이를 보였음(p=0.024 and p=0.021 by t-test)
(3) Fluoxetine 투여 6주 후 CREB 발현량의 변화는 CREB 인산화의 변화와 양적 상관관계를 보였고(r=0.770, p=0.000) CREB 인산화의 변화는 CRE-DNA binding 변화와 양적 상관성이 관찰됨 (r=0,753, p=0.000).

Abstract ▼

Backgrounds : Clinicians managing depressed patients face two challenges. First, up to 40％ of patients do not response to an initial course of antidepressant drug treatment. Second, 4-6 weeks are needed to conclude that an antidepressant agent is ineffective. Such time lag represents signal transduc

Backgrounds : Clinicians managing depressed patients face two challenges. First, up to 40％ of patients do not response to an initial course of antidepressant drug treatment. Second, 4-6 weeks are needed to conclude that an antidepressant agent is ineffective. Such time lag represents signal transduction that antidepressants bind to serotonin transporters, and neurotransmitters increase in synaptic cleft which bind to receptors in post-synapse, activating 2nd, 3rd messengers, also translocating into nuclei and then activating transcription factor, CREB.
Objects: To investigate the effect of antidepressants on the signal transduction in post-synapse, researchers studied the following:
(1) The differences of expression and function in transcription factor, CREB of peripheral lymphocytes of between depressed patients and normal control volunteers
(2) The effect of chronic SSRI antidepressant treatment to the expression and function of transcription factor, CREB in peripheral lymphocytes of depressed patients.
Methods:
(1) Collecting the 50ml of peripheral blood in normal volunteers and depressed patients.
(2) T lymhocyte purification using Ficoll-Histopaque density gradients and MACS column.
(3) The purification of nuclei
(4) Determining the expression, phosphorylation and function of CREB, using immunoblot and EMSA
Results:
(1) No differences of the expression, phosphorylation and function of CREB between normal volunteers and depressed patients.
(2) The change of CREB and pCREB immunoactivity from 0 to 6 weeks after fluoxetine administration increased in response group compared to non-response group.(CREB: p=0.024 by t-test, pCREB: p=0.021 by t-test, respectively)
(3) The significant correlation between the change of CREB and pCREB immunoreactivity (r=0.770, p=0.000 by Spearman′s rho), and between the change of pCREB immunoreactivity and DNA-CRE binding (r=0.753, p=0.000 by Spearman′s rho) from 0 wk to 6wk after fluoxetine administration.

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...8
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...8
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...12
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...15
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과...21
• 5. 연구개발결과의 파급효과...26
• 6. 첨부서류...27