보고서 정보
주관연구기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
연구책임자 |
강석연
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참여연구자 |
김순남
,
오호정
,
이내리
,
김판순
,
김관수
,
김정환
,
조민주
,
김진아
,
남주선
,
김영림
,
이완희
,
신동주
,
김효진
,
서지숙
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2008-12 |
과제시작연도 |
2008 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
과제관리전문기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201000006583 |
과제고유번호 |
1475003882 |
사업명 |
생물생명공학의약품안전관리 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
혈액응고 8인자.역가시험.응고시간 측정법.합성기질 측정법.blood coagulation factor VIII.potency test.clotting assay.chromogenic assay.
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초록
▼
혈액응고인자는 출혈 시 지혈에 필수적인 생체 내 단백질로 1인자부터 13인자까지 존재한다. 혈액응고인자 결핍에 의한 유전성 중증 출혈 질환으로 혈우병이 있는데, 혈액응고 8인자 결핍 시에는 혈우병 A, 혈액응고 9인자 결핍 시에는 혈우병 B가 발생한다. 혈우병 A는 우리나라에서 흔한 유전질환 중 하나이며, 발생 빈도는 남아 5,000명 당 1명이고, 반면 혈우병 B는 30,000명 당 1명꼴로 발생한다. 혈우병을 치료 또는 예방하기 위해서는 각각 부족한 혈액응고인자를 보충해 주어야 한다. 혈우병 A 환자는 혈액응고 8인자의 혈중 농
혈액응고인자는 출혈 시 지혈에 필수적인 생체 내 단백질로 1인자부터 13인자까지 존재한다. 혈액응고인자 결핍에 의한 유전성 중증 출혈 질환으로 혈우병이 있는데, 혈액응고 8인자 결핍 시에는 혈우병 A, 혈액응고 9인자 결핍 시에는 혈우병 B가 발생한다. 혈우병 A는 우리나라에서 흔한 유전질환 중 하나이며, 발생 빈도는 남아 5,000명 당 1명이고, 반면 혈우병 B는 30,000명 당 1명꼴로 발생한다. 혈우병을 치료 또는 예방하기 위해서는 각각 부족한 혈액응고인자를 보충해 주어야 한다. 혈우병 A 환자는 혈액응고 8인자의 혈중 농도에 따라 1%(0.01 unit/mL) 이하일 경우에는 중증, 1~5%(0.01~0.05 unit/mL)는 중등도, 6~30%(0.06~0.30 unit/mL)는 경증으로 분류한다. 혈우병 A 치료제로는 혈액응고 8인자제제를 사용하며, 사람 혈장을 원료로 한 혈장분획제제와 유전자재조합 기술을 이용해 개발된 유전자재조합 혈액제제로 다양한 제품이 개발되어 사용되고 있다.
혈액응고제제는 용법?용량(체중, 증상 등을 고려하여 적정치를 계산)의 특성상 환자의 혈중 혈액응고인자 농도 대비 필요 요구량을 주사하도록 되어 있어, 혈중 농도 측정과 함께 제품의 실제 함유 역가를 정확히 측정하는 것이 치료에 필수적이다. 그러나 전 세계적으로 혈액응고인자의 역가 측정을 위한 시험법이 통일되어 있지 않고 시험방법에 따라 역가 결과가 유의한 차이를 보인다는 보고들이 있다.
따라서 본 연구에서는 생물학적제제 기준 및 시험방법에 수재된 혈액응고 8인자제제의 역가시험 방법인 응고시간 측정법(clotting assay)과 유럽 등에서 널리 이용되고 있는 합성기질 측정법(chromogenic assay)을 비교?분석하기 위하여 국내 유통 제품들에 대하여 세 가지 시험방법[응고시간 측정법, 합성기질 측정법(coamatic factor VIII assay, CM), 합성기질 측정법(coatest SP FVIII assay, CT)]으로 시험을 수행하였다. 시험에 사용된 제품들은 혈장분획제제 3개 제품 및 유전자재조합 혈액제제 4개 제품을 사용하였으며, 유전자재조합 혈액제제 중에는 B 도메인이 제거된 형태의 제품 1개를 포함하였다.
시험결과의 재현성을 높이기 위하여 본 시험에 들어가기 전 국내 혈액응고 8인자의 제조사 2곳을 선정하여 공동연구를 수행한 결과 식약청을 포함한 3개의 시험소 모두 두 시험방법 간 역가에 유의한 차이가 있음을 알 수 있었다.
제제별로 각 시험방법에 대한 역가 비교 결과 흥미롭게도 혈장분획제제 제품을 이용한 시험에서는 응고시간 측정법이 2가지의 합성기질 측정법 보다 각각 9.8%(CM), 13.5%(CT) 높은 역가를 나타낸 반면, 유전자재조합 혈액제제의 경우 합성기질 측정법이 응고시간 측정법보다 각각 11.3%(CM), 5.3%(CT) 높은 역가를 나타내었다.
또한 제제 간 차이가 가장 적은 것이 어떤 방법인지를 비교?분석해 본 결과, 2개의 합성기질 측정법은 각각 P 값이 0.05보다 작은데 반해 응고시간 측정법의 P값은 0.3708로서 나타나, 응고시간 측정법의 경우에 제제에 따른 역가 결과 값에 유의한 차이가 나타나지 않는 것으로 분석되었다. 마지막으로 유전자재조합 혈액제제 중 발현 단백질의 구조적 차이(full-length vs. B 도메인 제거)는 시험방법에 따라 결과에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
본 연구를 통해 혈액응고 8인자제제 역가시험의 경우 응고시간 측정법이 합성기질 측정법에 비해 제제 차이에 따른 역가 차이를 최소화 할 수 있는 시험법이라는 결론을 내릴 수 있었다. 따라서 임상에서는 응고시간 측정법을 이용해 환자의 혈중 혈액응고 8인자의 역가를 측정하여 환자의 중증도 및 치료를 통한 호전 여부를 판단하는 것이 치료제의 변경에 따른 오차를 줄일 수 있는 방법이 될 것으로 판단된다. 또한 혈액응고 8인자의 기준규격을 설정할 경우에도 응고시간 측정법을 사용하는 것이 바람직하고, 만약 합성기질 측정법을 사용할 경우에는 응고시간 측정법을 병행하는 것이 제제 차이에서 오는 편차를 줄일 수 있는 방법인 것으로 사료된다.
Abstract
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Blood coagulation factors, which exist from factor I to factor XIII, are the essential protein in a living body for stopping of bleeding. Hemophilia is a hereditary genetic disorder owing to the blood coagulation factor deficiency. In Hemophilia A, coagulation factor VIII is absent, and in Hemophi
Blood coagulation factors, which exist from factor I to factor XIII, are the essential protein in a living body for stopping of bleeding. Hemophilia is a hereditary genetic disorder owing to the blood coagulation factor deficiency. In Hemophilia A, coagulation factor VIII is absent, and in Hemophilia B, factor IX is deficient. For the treatment and/or the prevention of hemophilia, it can be controlled with regular infusions of each deficient coagulation factor. Hemophilia A is classified according to blood coagulation factor VIII concentration; mild hemophilia with below 1%(0.01 unit/mL), moderate hemophilia with 1~5%(0.01 ~0.05 unit/mL), and severe hemophilia with 6~30%(0.06~0.30 unit/mL). Blood coagulation factor VIII, which is used for the treatment of hemophilia A, has been developed and treated with plasma-derived products using human plasma and recombinant products. Owing to the specificity of blood coagulation products, that should be infused to necessary demand compared to blood coagulation concentration in patient's blood, to calibrating actual containing potency of products with the blood concentration correctly is essential for the treatment. However, there is no standardized assay in the world for calibrating the potency of blood coagulation factor VIII, and there are lots of papers showing a significant difference of the potency result in the assay methods. Therefore, a comparative study is performed with three test methods.
In this study, three plasma-derived products and four recombinant products, including one of which generates the expression construct removed B-domain, are used. In order to improve reliability, a collaborative study was performed with KFDA and two manufacturers in preliminary experiment. It was found that the potencies are significantly different according to the test methods. In plasma-derived products, the clotting assay shows much higher potency, 9.8% (coamatic factor VIII assay, CM) and 13.5%(coatest SP FVIII assay, CT) than the chromogenic assay regardless of laboratories, while in recombinant products, it showed to be opposed to the clotting assay, 11.3%(CM) and 5.3%(CT). In addition, in analysis to find the difference of products, each P value in two chromogenic assay is less than 0.05, while P value in the clotting assay is 0.3708. At last, it was confirmed that the constructional difference(full-length vs. B-domain) in recombinant products has few effects on the results on each test method. Therefore, it is concluded that the clotting assay would be a better way to minimize the potency difference depending on the products. In addition, for establishing the specification and test methods of blood coagulation FVIII, either to use the clotting assay only or to run parallel with the clotting assay in case of using the chromogenic assay is recommended.
목차 Contents
- 표지 ...3
- 요약문 ...4
- SUMMARY ...6
- 목차 ...7
- Ⅰ. 연구개발과제 연구결과 ...8
- 제1장 연구개발과제의 개요 ...8
- 제1절 연구개발과제의 목표 ...8
- 제2절 연구개발과제의 필요성 ...8
- 제2장 연구개발과제의 국내?외 연구개발 현황 ...10
- 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ...13
- 제1절 연구수행 내용 ...13
- 제2절 연구수행 결과 ...15
- 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...21
- 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...23
- 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ...24
- 제1절 활용성과 ...24
- 제2절 활용계획 ...25
- 제7장 참고문헌 ...26
- 제8장 첨부서류 ...27
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