초록 ▼

1장. 백일해백신 무독화시험 표준화
백일해백신 무독화시험으로서 히스타민감수성시험은 전세계적으로 백신내 백일해독소의 유무를 검사하는 목적으로 수행된다. 그러나, 마우스종, 주령, 성별등의 다양한 원인으로 인하여 독소양을 보다 정확한 정량결과를 제공하기는 어렵다. 히스타민감수성시험은 크게 사망종말점법과 직장체 온측정법으로 나뉘며, 이 두방법을 표준화하기에는 보다 정확한 정량적결과의 도출이 필요하다.
현재까지는 사망종말점법이 직장체온법보다 덜 민감한 방법으로 알려져 있다. 이에 우리는 이번연구에서 성별과 주령, 종을 달리한 3

1장. 백일해백신 무독화시험 표준화
백일해백신 무독화시험으로서 히스타민감수성시험은 전세계적으로 백신내 백일해독소의 유무를 검사하는 목적으로 수행된다. 그러나, 마우스종, 주령, 성별등의 다양한 원인으로 인하여 독소양을 보다 정확한 정량결과를 제공하기는 어렵다. 히스타민감수성시험은 크게 사망종말점법과 직장체 온측정법으로 나뉘며, 이 두방법을 표준화하기에는 보다 정확한 정량적결과의 도출이 필요하다.
현재까지는 사망종말점법이 직장체온법보다 덜 민감한 방법으로 알려져 있다. 이에 우리는 이번연구에서 성별과 주령, 종을 달리한 36개의 동물군에서 WHO TRS와 유럽약전에서 명시된 히스타민감수성 동물시험기준에 따라 더욱 민감한 마우스모델을 선정하였다. 본 연구를 통해 주령이 높을수록, 특히 수컷에 경우 히스타민에 더욱 민감해진다는 사실을 최초로 확인하였다. 더욱이, 사망종말점법 또한 기존에 알리진 것과 달리 본 연구에서 선정한 마우스모델에서는 마우스직장체온법과 동등한 감수성을 갖는 방법으로 수행될 수 있다는 것을 확인하였다. 또한 백일해무독화시험용 백일해백신표준품과 백일해독소표준품을 사망종말법을 수행하고, 그 결과를 평행분석법을 통해 단위를 비교하여 백일해백신표준품단위를 백일해독소단위로 변환하였다. 단위변환된 국가표준품(06/016)과 백일해독소를 이용하여 사망종말법과 직장체온법간의 각각의 상관관계를 분석하였을 때 상관성이 높음을 확인하였으며, 이 결과를 통해 사망종말법과 직장체온법이 서로 대체가능한 방법임을 제시하였다. 결과적으로 본 연구에서 유럽 및 북미에서 수입되는 유럽약전, WHO TRS의 기준에 따르는 백일해백신의 국가검정을 국가표준품 (06/016)으로 표준화하였으며, 본 연구에서 개발한 마우스모델을 이용한 방법이 모두 동등한 정량적결과를 보임으로써 백일해백신 무독화시험의 표준화에 대한 객관적 근거를 제시하였다.
2장. 국제공동연구
백일해무독화시험법이 기존 동물시험에서 in vitro시험으로 대체할 수 있는 가에 대한 공동연구를 WHO에서 주관하여 수행하였다. 총 9개국 16개 시험기관이 참가하였으며, 이번 공동연구는 동물대체시험가능성에 대한 1차 공동연구로서 두가지 in vitro시험이 서로간에 얼마만큼의 높은 상관관계를 보이는지와 동물시험대체가능성에 대한 목적으로 시행되었다. 백일해독소 무독화공정상 특징이 있는 3가지의 백일해종류, 9개 맹검백신을 이용하여, HPLC법, ELISA법, 마우스직장체온법을 3반복 수행하였다. 결과적으로 연구참여기관 모두 in vitro시험에서는 높은 상관성을 보였으며, 이는 in vitro시험이 백일해무독화시험에 대하여 실험실간의 변이가 적고, 국제적조화가 가능함을 보여주는 결과이다. 동물시험과 in vitro시험간의 상관관계는 유의적 수준의 상관성을 보였으며, 향후 동물대체 무독화시험에 대한 긍정적인 결과를 보였다.

Abstract ▼

Chapter 1. Standardization of specific toxicity for acellular pertussis vaccine Histamine sensitization test (HIST) is used for controlling residual activity of pertussis toxin (PT) in acellular pertussis (aP) vaccines worldwide. However, HIST is still difficult to provide precise quantitative estim

Chapter 1. Standardization of specific toxicity for acellular pertussis vaccine Histamine sensitization test (HIST) is used for controlling residual activity of pertussis toxin (PT) in acellular pertussis (aP) vaccines worldwide. However, HIST is still difficult to provide precise quantitative estimate of toxin activity because of various factors (e.g. mouse strain, age, and sex). Pending the establishment of harmonization of pertussis specific toxicity test between mouse rectal temperature method and mouse lethal end point method, more precise response by HIST must be required. In this study, we screened histamine sensitive mouse strain, including age and sex variation. Among the 36 types of mice, we selected suitable mouse models for HIST. Moreover, we found older mice, especially male mice, are more susceptible than younger mice for HIST. Furthermore, the HIST activity by measuring lethal endpoint seem to be also quantitative like the HIST activity by measuring rectal temperature in our selected model. We also compare to bio-activities of pertussis toxin and national reference vaccine (06/016, KFDA). The relationship between pertussis toxin reference and national reference vaccine (06/016, KFDA) showed significant correlation. This result suggest that two HIST can be replaceable each other. Moreover, national reference vaccine, 06/016 is also able to be used as reference in pertussis specific toxicity test based on lethal end point. Concludingly, we standardized histamine sensitization test for acellular pertussis vaccine using national reference vaccine (06/016).
Chapter 2. International collaborative study
We describe here an international collaborative study carried out on behalf of WHO and organized by NIBSC to assess the methodology transferability of the in vitro test system and its suitability for the testing of three different types of ACV products. This study also evaluated further the relationship between the in vivo activity by HIST and the in vitro assay system. Sixteen laboratories from 9 countries participated in this study. The results showed that estimates of the carbohydrate binding and enzymatic activities of the vaccine samples included in the study demonstrated good agreement among laboratories. On the basis of the results of this study, it is concluded that the methodology of the enzyme coupled-HPLC and carbohydrate-binding assays are transferable between laboratories worldwide. The in vitro assay system is suitable for the three different types of ACV products included in the study. The relationship between the in vivo activity by HIST and the in vitro assay system showed significant correlation and supported the principle of this approach as an alternative to the HIST.

목차 Contents

• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 1
• 표지 ... 2
• 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 목차 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 7
• 제1절 연구개발과제의 목표 ... 7
• 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 7
• 제2장 연구개발과제의 국내 • 외 연구개발 현황 ... 8
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 11
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 26
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 30
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 31
• 제1절 활용성과 ... 31
• 제2절 활용계획 ... 31
• 제7장 참고문헌 ... 33
• 제8장 첨부서류 ... 35