보고서 정보
주관연구기관 |
대한적십자사 혈액수혈연구원 Korea Red Cross |
연구책임자 |
조남선
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2010-10 |
주관부처 |
보건복지부 |
사업 관리 기관 |
대한적십자사 Korea Red Cross |
등록번호 |
TRKO201300000640 |
DB 구축일자 |
2013-05-20
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키워드 |
헌혈자 보관검체.보존제도.보관검체 보관방법.Blood donor storage samples.Storage systems.Storage method.
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초록
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대한적십자사는 2004년 1월부터 모든 헌혈자 검체를 -20℃ 이하에서 10년간 보존하고 있으며, 주로 수혈 부작용 규명을 위한 look back 조사에 사용하고 있다. 본 연구에서는 현행 헌혈자 보관검체의 안정성을 실험적으로 검증하기 위하여 총 256개의 검체[HBV DNA,HCV RNA,HIV RNA 양성 인 헌혈자 검체 각각 30개,HIV 감염자 검체 20개,WHO HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA 국제 표준품 희석 검체 각각 2개(102,103 IU/mL), HBsAg, anti-HCV,anti-HIV 혈청학적
대한적십자사는 2004년 1월부터 모든 헌혈자 검체를 -20℃ 이하에서 10년간 보존하고 있으며, 주로 수혈 부작용 규명을 위한 look back 조사에 사용하고 있다. 본 연구에서는 현행 헌혈자 보관검체의 안정성을 실험적으로 검증하기 위하여 총 256개의 검체[HBV DNA,HCV RNA,HIV RNA 양성 인 헌혈자 검체 각각 30개,HIV 감염자 검체 20개,WHO HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA 국제 표준품 희석 검체 각각 2개(102,103 IU/mL), HBsAg, anti-HCV,anti-HIV 혈청학적 검사에서 고흡광도(S/CO > 3.0) 양성 검체 및 저흡광도(S/CO < 3.0) 양 성 검체 각각 20개,그리고 음성 대조 검체 20개]를 -20℃ ~ -30℃ 와 -70℃ ~ -80℃에 각각 보관하면서 보존 개시 시점으로부터 6개월 간격으로 안정성 검사를 실시하였다.
본 연구는 3차년도 연구로 1,2차년도와 동일한 조건으로 검체를 보관하였다. 보존 개시 시점으로부터 최대 24개월이 경과된 보관검체의 안정성검사로서 핵산정량검사에는 Cobas Amplicor HBV Monitor Test (Roche Molecular Systems Inc., NJ, USA), Cobas Amplicor HCV Monitor Test, v2.0 (Roche Molecular Systems Inc.) 및 Cobas Amplicor HIV-1 Monitor Test, vl.5 (Roche Molecular Systems Inc.) 시 약을 사용하였다. 혈청학적 검사는 Abbott PRISM HBsAg Assay Kit (ABBOTT, Wiesbaden, Germany), LG HCD 3.0 Plus (LG, 대전,한국) 및 LG Anti-HIV 1/2 Plus (LG, 대전,한국)) 시약을 사용하여 실시하였다. 모든 검사는 duplicate (WHO 국제표 준품 희석검체는 triplicate)로 실시하였으며, 두 온도군 간의 결과차이를 paired T_Test로 분석하였으며 P value 0.05 미만인 경우 유의한 것으로 간주하였다
보관 개시 이후 현재까지 검체에 따라 18~24개월이 경과되었으며,6개월 경과시점 마다 실시한 안정성 검사 결과는 핵산정량검사의 경우 평균 CV가 29~37%이며,두 가지 보존온도에 따른 변화량은 통계학적으로 유의하지 않았다CP>0.05). 혈청학적 검사의 경우에는 평균 CV가 5~10%로 확인되어 재현성 있는 검사결과를 도출 한 것으로 확인되었다. 보관검체를 반복적으로 동결-해동했을 때, HBsAg 의 검사결과는 안정적이었으나 anti-HCV는 5회차 부터,anti-HIV의 경우에는 3~5회차 부터 양성결과가 음성으로 전화되어 영향을 받는 것으로 확인되었다.
결론적으로, 보관검체의 보존 개시 이후 18~24개월의 기간 경과에 따른 안정성 검사를 실시한 결과,일부의 저농도 핵산 양성 검체와 저흡광도 혈청학적 검사 양성 검체를 제외하고는 보존개시 시점과 비교하여 두 가지보존온도 모두에서 유의한 변화는 없는 것으로 관찰되었다. 또한 보관검체에 대한 동결-해동 반복과정이 검체에 미치는 영향은 HBsAg이 가장 적었다. 낮은 농도의 바이러스 핵산을 가지고 있는 검체에 대한 안정성 검사는 검출한계의 문제를 고려하여 핵산정성검사법으로 대체해야 할 것으로 사료되며, 저흡광도 검체에서의 음성 결과 전환에 대한 해석은 이후 추가적인 검토가 이루어져야 할 것이다.
Abstract
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Since January 2004, the Korean Red Cross keeps repository donor samples at -20°C for 10 years. These samples are mainly used for look back studies. To validate the stability of the repository samples, 256 samples were stored at -20 ~ -30°C and -70 ~ -80°C and tested at a 6 month interval. The 256 sa
Since January 2004, the Korean Red Cross keeps repository donor samples at -20°C for 10 years. These samples are mainly used for look back studies. To validate the stability of the repository samples, 256 samples were stored at -20 ~ -30°C and -70 ~ -80°C and tested at a 6 month interval. The 256 samples used for the study consisted of 30 HBV DNA, HCV RNA and HIV RNA positive donor samples each, 20 samples from HIV infected patients, 2 dilutions (102 and 103 IU/mL) of the WHO HBV DNA, HCV RNA and HIV RNA International Standards, 20 samples of HBsAg, anti-HCV and anti-HIV reactive samples either with a high reactivity (S/CO > 3.0) or low reactivity (S/CO < 3.0) each, and 20 negative control samples.
The storage condition of all samples was maintained as in the first and second year study. To validate the stability of the samples stored for a maximum of 24 months, Cobas Amplicor HBV Monitor Test (Roche Molecular Systems Inc., NJ, USA), Cobas Amplicor HCV Monitor Test, v2.0 (Roche Molecular Systems Inc.) and Cobas Amplicor HIV-1 Monitor Test, vl.5 (Roche Molecular Systems Inc.) were used for quantitative NAT. For serological testing Abbott PRISM HBsAg Assay Kit (ABBOTT, Wiesbaden, Germany), LG HCD 3.0 Plus (LG, Daejeon, Korea) and LG Anti-HIV 1/2 Plus (LG, Daejeon, Korea) were used. The dilutions of the International Standards were tested in triplicate all other samples were tested in duplicate. The difference in results between the two storage conditions were analyzed with the paired T-Test and a P value less than 0.05 was regarded as statistically significant.
Depending on the sampling time, samples were stored for 18 to 24 months. Stability tests performed at a 6 month interval showed a mean CV of 29~37% for the quantitative NAT. The difference between the two storage conditions were not significant (P>0.05). For the serological testing the mean CV was 5~10%, showing that the results were stable. Repeated freeze-thawing of the samples had no effect on HBsAg testing, but anti-HCV and anti-HIV results converted into negatives after 5 times or 3~5 times freeze-thawing, respectively.
With the exception of some low concentration nucleic acid positive samples and serologically low reactivity samples, samples stored for 18 to 24 months showed no statistically significant difference compared to the baseline data at both storage conditions. Repeated freeze-thawing had the least effect on HBsAg results. Considering the detection limit of quantitative NAT, qualitative NAT should be used for low concentration nucleic acid positive samples. Conversion of results into negatives in some low reactivity samples warrant further investigation.
목차 Contents
- I. 연구개발결과 요약문 ... 2
- (한글) 헌혈자 보관검체 보존방법 안정성 연구(3차년도) ... 2
- (영문) A study to verify the stability of currently stored blood donor samples (A third year study) ... 3
- Ⅱ. 학술연구용역사업 연구결과 ... 4
- 제1장 최종 연구개발 목표 ... 4
- 제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 12
- 제3장 최종 연구개발 결과 ... 18
- 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ... 47
- 제5장 연구 성과 ... 50
- 제6장 기타 중요변경사항 ... 51
- 제7장 참고문헌 ... 52
- 제8장 첨부서류 ... 54
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