보고서 정보
주관연구기관 |
국립암센터 National Cancer Center |
연구책임자 |
김상수
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참여연구자 |
백혜정
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2011-04 |
과제시작연도 |
2010 |
주관부처 |
보건복지부 |
사업 관리 기관 |
한국보건산업진흥원 Korea Health Industry Development Institute |
등록번호 |
TRKO201300028423 |
과제고유번호 |
1355061270 |
사업명 |
보건의료기술연구개발 |
DB 구축일자 |
2013-09-21
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키워드 |
유방암.에스트로젠.유전자돌연변이마우스.BRCA1.Breast Cancer.estrogen.knockout mice.
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초록
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II. 연구개발의 내용 및 범위
1. in vitro model의 개발: knockdown과 동시에 GFP marker로 대상세포를 표지할 수 있는 in vitro model을 사용하여 세포내의 정확한 결실 혹은 발현억제를 유도하는 모델 사용. 이 후의 분석방법은 세포의 DNA의 손상, 세포의 생장과 세포사의 정도를 gamma-H2AX, Comet assay, MTT assay, BrdU, Annexin-V, TUNEL, DNA fragmentation을 통해 측정. 또한 세포의 extract를 추출하고 항체를 사용하여 wes
II. 연구개발의 내용 및 범위
1. in vitro model의 개발: knockdown과 동시에 GFP marker로 대상세포를 표지할 수 있는 in vitro model을 사용하여 세포내의 정확한 결실 혹은 발현억제를 유도하는 모델 사용. 이 후의 분석방법은 세포의 DNA의 손상, 세포의 생장과 세포사의 정도를 gamma-H2AX, Comet assay, MTT assay, BrdU, Annexin-V, TUNEL, DNA fragmentation을 통해 측정. 또한 세포의 extract를 추출하고 항체를 사용하여 western blot을 시행.
2. in vivo model의 개발: Brca1co/coMMTV-cre 돌연변이 쥐를 이용한 in vivo model을 사용하여, 에스트로젠에 의한 즉각적인 반응을 통한 유전적 결함의 축적, 지속적인 에스트로젠 투여와 비만 유도에 의한 암의 발생 빈도의 변화를 조사. 이 과정에서 얻은 조직은 파라핀으로 고형화 시킨 후 절편하여 병리학적 분석, 조직 면역학적 염색기법에 의하여 분석 하거나 조직의 extract를 추출하여 western blot을 시행.
3. 타겟의 발굴: 대상 단백질을 선별하고 저해제나 siRNA를 통한 발현억제가 이상증식을 억제하는지 관찰. 관심 타겟 억제제는 in vivo model을 사용하여 검증.
Abstract
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Ⅱ. Research Procedure
1. Developing of in vitro model: To downregulate the Brca1, we used the expression knockdown by introducing siRNA and shRNA. Then, we analyzed the DNA damage, cell proliferation, and apoptosis by using gamma-H2AX staining, Comet assay, MTT assay, BrdU, Annexin-V, and TUNEL a
Ⅱ. Research Procedure
1. Developing of in vitro model: To downregulate the Brca1, we used the expression knockdown by introducing siRNA and shRNA. Then, we analyzed the DNA damage, cell proliferation, and apoptosis by using gamma-H2AX staining, Comet assay, MTT assay, BrdU, Annexin-V, and TUNEL assay. And We also performed the western blot from the extracts of cultured cells.
2. Developing of in vivo model: As the backbone of mice model, we used Brca1co/coMMTV-cre mutant mice. To see the effect of estrogen and obesity, we injected the estrogen in solution or slowly released bead, and feed the mice in high fat diet. Mice were monitored at least twice a week for possible symptoms related to illness and tumor formation. When mice developed symptoms and tumors, tissues were collected for further analysis. For histology analysis, tissues were fixed, embedded in paraffin wax, and the further analyzed.
3. Target validation: when we identified the target protein, we inhibited its function by shRNA knockdown.
목차 Contents
- 1. 겉표지 ... 1
- 2. 제출문 ... 3
- 3. 보고서 요약서 ... 4
- 4. 요약문 (한글) ... 5
- 5. 요약문 (영문) ... 7
- 6. 연구 성과 실적 및 향후 계획 ... 9
- 7. 참여연구원 현황표 ... 13
- II. 총괄연구과제 연구결과 ... 14
- 1. 연구개발과제의 배경 및 필요성 ... 15
- 2. 국내외 기술개발 현황 ... 15
- 3. 연구개발과제의 추진체계 ... 17
- 4. 연구개발수행 내용 및 결과 ... 18
- 5. 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 28
- 6. 향후 연구성과 추진 계획 ... 29
- 7. 연구개발결과의 파급효과 ... 29
- 8. 연구개발결과의 활용계획 ... 30
- 9. 참고문헌 ... 30
- IV. 첨 부 서 류 ... 32
- ○. 실적증빙자료 및 첨부서류 목차 ... 33
- 2. 실적 증빙자료 ... 37
- 3. 기타 첨부서류 ... 37
- 최종보고서 평가 면제요청서 (중개연구 논문성과 달성) ... 38
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