초록 ▼

현재 항파상풍 사람면역글로불린의 국가검정을 위한 역가시험으로 동물을 사용한 in vivo toxin neutralization assay법을 사용하고 있다.
그러나 in vivo 시험법은 시험에 많은 시간이 소요되며 동물의 사망/마비에 의한 semi-quantitative 방법이며 동물의 상태, 실험자의 숙달도 등에 따라 실험결과에 편차가 발생할 수 있어 정확한 유효성분의 함량을 정량적으로 측정하기에는 어려움이 있다.
또한 in vitro 시험법으로의 전환이 전세계적으로 추진 중에 있으며 유럽약전에서는 in vitro 항

현재 항파상풍 사람면역글로불린의 국가검정을 위한 역가시험으로 동물을 사용한 in vivo toxin neutralization assay법을 사용하고 있다.
그러나 in vivo 시험법은 시험에 많은 시간이 소요되며 동물의 사망/마비에 의한 semi-quantitative 방법이며 동물의 상태, 실험자의 숙달도 등에 따라 실험결과에 편차가 발생할 수 있어 정확한 유효성분의 함량을 정량적으로 측정하기에는 어려움이 있다.
또한 in vitro 시험법으로의 전환이 전세계적으로 추진 중에 있으며 유럽약전에서는 in vitro 항파상풍 역가시험 방법도 채택하고 있다. 따라서 본 연구에서는 항파상풍 사람면역글로불린 in vitro 역가시험법을 개발, 확립함으로써 시험법의 개선 및 국제조화를 이루고자 한다.
항파상풍 사람면역글로불린 in vitro 역가시험법으로 면역효소화학적 원리를 이용한 시험법을 개발하고 표준곡선의 용량반응을 통하여 표준곡선의 농도 범위 및 코팅 독소 농도, 2차 항체 농도 등 시험을 위한 조건을 설정하였다. 또한 개발된 시험법이 시판되고 있는 상용키트와 비교해서 정밀성과 정확성에서 차이가 없었다. 상용 키트는 값이 비싸고 키트 단종 등 품질관리를 위한 시험법으로 문제점이 있어 항파상풍 사람면역글로불린 in vitro 역가시험법으로 개발한 키트를 선정하였다. 개발된 시험법이 항파상풍 사람면역글로불린 농도를 적절하게 확인할 수 있는지 확인하기 위하여 시험법 밸리데이션을 수행하였다. 그 결과, 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성 및 범위 등에서 기준치를 만족하였다.
다음으로 in vitro 시험법과 in vivo 시험법 간의 상관성을 확인하고자 두 기관에서 각각 자사 완제의약품 3 lot에 대하여 in vivo 시험과 in vitro 시험을 수행하였다. 그 결과 두 시험법 간에 상관성을 보기는 어려웠으나 in vivo와 in vitro 결과 사이에는 통계적으로 차이가 없었으며(P=0.2423) 두방법에 의한 결과 모두 검정 기준인 250 IU 이상을 나타내었다. 내년에는 다양한 역가범위의 검체를 대상으로 한 후속연구를 통하여 in vitro와 in vivo 간 검증 연구가 필요할 것으로 사료된다.
마지막으로 제조된 항파상풍 사람면역글로불린 국가표준품 후보물질을 in vitro 역가시험을 위한 표준물질로 활용하기 위해서는 역가산정이 필요하다. 역가산정을 위해 3개 기관에서 각각 18회씩 역가시험을 수행하였으며 최종 역가는 37.15 IU/vial이었다.

Abstract ▼

Currently, the potency of human tetanus immunoglobulin for national lot release is tested in vivo toxin neutralization assay.
However, in vivo method for potency test is time-consuming, relatively expensive, subjective, and raise ethical issues regarding the use of live mammals. The use of accura

Currently, the potency of human tetanus immunoglobulin for national lot release is tested in vivo toxin neutralization assay.
However, in vivo method for potency test is time-consuming, relatively expensive, subjective, and raise ethical issues regarding the use of live mammals. The use of accurate in vitro assays is therefore desirable for ethical, clinical, and economic reasons. Moreover, in vitro testing is highly reproducible and sensitive.
The purpose of this study is to establish the in vitro potency test for human tetanus immunoglobulin by substituting in vivo toxin neutralization assay currently used for lot release.
We developed enzyme immunoassay (EIA) kit and compared with 2 commercial EIA kits. When compared to precision and accuracy, there is no statistically difference between developed and commercial kits. Commercial kits are expensive and always have the availability concern. Therefore, we selected developed kit for tetanus immunoglobulin in vitro assay.
The method validation study was conducted on developed EIA kit according to ICH guideline. All validation parameters including accuracy, precision, specificity, linearity and range satisfied the defined specification.
Correlation study between currently used in vivo method and in vitro method showed that there is no co-relation between two methods. However, there is no statistically difference between values obtained by in vitro and in vivo methods(P=0.2423).
Finally, in vitro potency of National Standard candidate manufactured by Green cross corporation(2011) was tested collaboratively with the 3 laboratory including our lab. The new national standard for tetanus immunoglobulin was assigned a potency of 37.15 IU of tetanus immunoglobulin per vial.
In conclusion, we developed EIA kit for tetanus in vitro potency assay. Developed EIA kit is reliable and suitable method for tetanus immunoglobulin potency test. The potency of in vitro test is not different from that of in vivo assay. However, further study is needed to confirm that developed in vitro assay can be used as official national lot release test

목차 Contents

• 자체연구개발과제 연차실적 • 계획서 ... 1
• 표 지 ... 2
• 요 약 문 ... 4
• Summary ... 5
• 목 차 ... 6
• Ⅰ. 연구개발과제 연구결과 ... 7
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 7
• 제2장 연구개발과제의 국내 • 외 연구개발 현황 ... 10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 12
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 28
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 29
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 31
• 제7장 참고문헌 ... 32