초록 ▼

○ 연구결과
- 기작 규명을 위해서 B형 간염바이러스 모델인 HepG2.2.15 간세포주를 사용
- 추출된 분획을 세포독성 검정에서 ethanol fraction(OJE)의 경우 600 ug/ml의 농도에서 세포독성이 나타나지 않았음. 하지만 1000 ug/ml의 농도에서 약 34%의 세포독성이 나타나는 것을 확인.
- 미나리 추출물은 NF-kB transcription factor의 신호전달체계를 억제하는데 I-kBa의 분해를 억제하여 p65 subunit의 핵으로의 전사를 억제함으로 염증유발 cytokines의

○ 연구결과
- 기작 규명을 위해서 B형 간염바이러스 모델인 HepG2.2.15 간세포주를 사용
- 추출된 분획을 세포독성 검정에서 ethanol fraction(OJE)의 경우 600 ug/ml의 농도에서 세포독성이 나타나지 않았음. 하지만 1000 ug/ml의 농도에서 약 34%의 세포독성이 나타나는 것을 확인.
- 미나리 추출물은 NF-kB transcription factor의 신호전달체계를 억제하는데 I-kBa의 분해를 억제하여 p65 subunit의 핵으로의 전사를 억제함으로 염증유발 cytokines의 DNA 발현을 억제. 또한 B형 간염 virus DNA의 replication을 억제하여 viral particle의 형성을 저해.
- DNA의 발현을 억제함으로 간염 전파의 원인으로 알려져 있는 HBeAg/HBsAg의 발현 저해그리고 감염된 세포의 Bax/Bcl-2 rato를 변화시켜 apoptosis를 유도.
- chloroform과 ethyl acetate 층을 대상으로 추가 실험을 하였는데 모두 유사한 결과를 얻었으나 chloroform 층에서 다소 높게 활성이 나타냄. 추출물의 활성 성분을 분리한 결과 caffeic acid로 동정되었는데 caffeic acid 5 ug/ml 농도에서 proinflammatory cytokines의 유리를 억제하는 것으로 확인, 향후 제품화의 측면에서 보조적인 자료로 활용하기 위해 기존의 간염치료제와의 상승작용을 확인함.
- lamivudine caffeic acid 사용한 결과 효과적인 상승효과를 확인하였고, virus DNA replication을 억제한 것을 볼 때 lamivudine의 역전사 억제효과를 효율적으로 지원하여 상호작용하였으리라 생각
- 본 연구의 결과로부터, 미나리 추출물과 분리동정된 caffeic acid는 NF-kB 신호전달체계를 억제함을 통해 간염의 진행을 효과적으로 억제할 것으로 여겨지며 또한 virus DNA replication을 억제하여 virus의 활성을 저해하는 효과 또한 있는 것으로 여겨지며 기존에 임상적으로 사용되고 있는 간염치료제와 더불어 보조적인 역할을 담당할 수 있는 제품 개발을 기대.
- caffeic acid의 처리가 세포의 산화적 스트레스를 억제하고 있음을 시사
- in vivo assay에서 Caffeic acid(10 mg/kg, 40 mg/kg)를 2주 동안 경구 투여하였으며, 마지막 투여 세 시간 후 CCl₄ 를 경구 투여하여 간독성을 유발시켰다. CCl₄ 만 투여한 Rat 에서는 간독성 지표인 GOT 와 GPT 수치가 증가하였고 CCl4 투여 전 caffeic acid를 경구 투여한 rat 에서는 그 수치가 유의적으로 감소하였으며, 세포 괴사도 감소. Rat의 간과 신장을 균질화 한 후 MDA, GSH 함량과 SOD, GPx, catalase, GST 활성을 측정하여 본 결과, MDA 함량은 CCl₄ 만 처리한 군에서 유의적으로 증가하였으며, GSH 함량과 SOD, GPx, catalase, GST 활성은 유의적으로 낮게 나타났다. 그러나 CCl₄ 투여 전caffeic acid 를 경구 투여한 rat 에서는 이 같은 효과가 보이지 않았으며, 대조군과의 유의차가 없었음.
- 미나리로부터 분리된 caffeic acid는 산화적 손상으로부터 세포를 보호하며, CCl₄ 투여로 인해 발생하는 간독성에 대한 억제효과를 갖고 있음을 확인하였다. 따라서, 미나리 에탄올 추출물 또는 이로부터 분리된caffeic acid는 간 기능 개선용 건강지향제품으로 활용될 수 있을 것으로 기대
- 미나리추출물과 발효추출물의 여러 실험을 통한 간보호 활성에 대한 유의적 차이가 없었고 독성자 체도 없어 발효보다는 경제성에 의거 직접추출물로 제품화를 시도
- 전임상시험에서는 미나리 추출물의 in vivo 생쥐 실험계에서 간 기능개선 효능을 확인하고 추출물과 발효액의 안전성을 확보하는데 초점
- 독성을 확인한 결과 단 한 마리의 mouse도 죽지않았음으로 일반적인 투여농도에서는 전혀 문제가 되지 않는 것으로 확인
- lipid peroxidation 결과와 비교해 봐도 일치하는 것으로 미나리 추출물이 간 지질 산화를 억제
- 나리 발효액의 안전성을 확인하기 위해 6주령된 balb/c mouse 24마리를 구입하여 매일 1ml의 발효원액을 4주간 경구투여 하였다. 발효액의 장기적인 투여는 생리학적/면역학적인 지표에 변화를 가져오지 않았으며 따라서 동물전임상에서는 안전한 것으로 나타났음.
- 추출물과 발효액은 전임상 단계에서 매우 안전한 것으로 생리학적/면역학적 지표에 의해 확인 하였으며 장기적인 투여는 ConA로 유발된 간염모델에서 부분적인 효과를 나타내었음으로 기존의 미나리 섭취가 독성으로 인해 간손상을 유발할 수도 있다는 일설에 대해 미나리 제품의 안전성을 확보하였다고 생각되며 또한 발효액도 독성이 나타나지 않았음으로 향후 미나리 관련 제품의 판매 확보와 발효액을 이용한 새로운 제품의 개발이 기대

Abstract ▼

Ⅰ. Title
Development of functional drinks from Oenanthe javanica Dc. to enhance hepatic protection
Ⅱ. Objectives and Significance
Oenanthe javanica Dc. (OJ) is a perennial herb which mostly grows on a dam ground or a streamside and also it is a natural product that was widely used as a medi

Ⅰ. Title
Development of functional drinks from Oenanthe javanica Dc. to enhance hepatic protection
Ⅱ. Objectives and Significance
Oenanthe javanica Dc. (OJ) is a perennial herb which mostly grows on a dam ground or a streamside and also it is a natural product that was widely used as a medicinal food to treat for jaundice, hypertension, and liver diseases in traditional way. The purpose of the study is to develop the functional food or drinks to enhance hepatic protection from hepatitis or else, to define its action mode for safety purpose, and to accumulate database to help the industrialization in both in vitro and in vivo.
Ⅲ. Research Summary
The present study was conducted to investigate the hepatoprotective effects of Oenanthe javanica DC. (OJ) against oxidative stress in two experimental models, hepG2 cells for in vitro and rats for in vivo. The OJ was extracted by hot water (OJH), cold water (OJC), 80% EtOH (OJE) and MeOH (OJM). Of four extracts, OJE contained the relatively large phenolic compound. It also exihibited the high DPPH radical- and superoxide anion radical- scavenging activities with the inhibition of lipid peroxidation. To determine the in vitro hepatoprotective effects of OJE and OJH, they were treated to HepG2 cells in the presence of H²O². Compared to the cells with the treatment of OJH, OJE treated cells showde the high viability, suggesting OJE as a better hepatoprotectant. Since OJE had the high hepatoprotective pontential, it was further fractionated by partitioning with n-hexane (OJE-H), chloroform (OJE-C), ethyl acetate (OJE-E) and water (OJE-W). In this stage, OJE-E showed the highest amount of phenolic compound and the strongest antioxidative activities among the other fractions. The fact that OJE and OJE-E revealed the high antioxidant activities, indicates that they have a high concentration of phenolic compounds, which are responsible for their high antioxidant activities. Also, OJE-E exhibited the protective effect against oxidative stress induced by 2mM H²O² in HepG2 cells. Therefore, OJE-E was employed to the next study for the purification of hepatoprotectant by TLC and HPLC.
In determining an action mode of OJE in molecular and cellular basis, HepG2.2.15 cell line was employed, which is transfected by hepatitis B virus (HBV) genome. Cytotoxic level of OJE was determined by MTT assay; then EC50 was determined as 1750 ug/ml of OJE-E. The proinflammatory cytokine(IL-1b and TNF-a) production was reduced to the control level by treatment of 600 ug/ml. The induction of COX-2 was inhibited by OJE treatment in a dose-dependent manner. At the same line, PGE2 level was also reduced by OJE treatment in a dose-dependent manner. Determined by luciferase assay, both NF-kB and AP-1 transcriptional expression induced by LPS was reduced to control level at 600 ug/ml. The degradation of ikBa was blocked by treatment fo 600 ug/ml OJE. These findings suggest that OJE could down-regulate inflammation reaction by inhibiting both NF-kB and AP-1 transcriptional factors, implying that OJE may inhibit inflammation process in hepatitis B virus (HBV)-infected liver cells. Although OJ has been long used for treatment of hepatic disease such as hepatitis and liver cirrhosis, there are reports in controversy referring that it has no effect or aggravate the symptom of hepatic diseases. Thus, in current study, we have evaluated anti-viral effect of OJE in HepG2.2.15 cells. The extracellular secretion of HBeAg and HBsAg from HepG2.2.15 cell was decreased at 600 ug/ml of OJE, indicating that it has blocked the viral expression, evidenced by mRNA level. in vivo animal study, the immunological and biochemical parameters were applied to ensure the safety of OJE. In survival test, ICR mice have been survived for 4 weeks with 5g/kg/day OJE through oral administration. The function of spleen and liver was same as control, which OJE in long-term treatment would not cause any toxicity at least in animal study. In ConA-induced hepatitis model with balb/c mouse, OJE consumption for 4 weeks showed the reduction in plasma TNF-a, IL-1b, PGE2, and lipid peroxidation. Consumption of fermented OJ has also revealed no harmful effect on biochemical and immunological parameters. It showed the synergistical effect with vitamin E consumption to remove oxidative stress, but it has no synergistically effect on alleviating inflammation with lamivudine in combination. Based on these results, at least in animal model, it has been demonstrated that OJ extract and its fraction could be used as a functional food to help reduce inflammation reaction in liver.
The hepatoprotectant from OJ was identified as caffeic acid (CA). Caffeic acid [3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoic acid], which is a hydroxycinamic acid derivative, is one of the antioxidative compounds in various agriculture products such as coffee beans, potatoes, grains and vegetables. To determine the antioxidant activities of CA, the DPPH radical- and superoxide anion radical-scavenging activities and the TBARS generation inhibitory activities were examind. In DPPH radical scavenging activity assay, IC50 was 5.35 ug/mL, and the inhibitory effects on TBARS generation was 76.8% at a dose of 80 ug/mL. To investigate the hepatoprotective effects of CA, assays for the H2O2-induced cytotoxicity and the formation of intracellular reactive oxygen species were performed in HepG2 cells. The pretreatment for 24 h with 30~50 ug/mL of CA completely prevented the oxidative stress induced by H²O². Also, less reactive oxygen species were intracellularly formed with the treatment of CA. When CA was treated in HepG2 cells, the changes in enzymatic antioxidative activities such as superoxide dismutase (SOD), catalase, glutathione-S-transferase (GST), and glutathione peroxidase (GSH-Px) and non-enzymatic antioxidative activities such as glutathion (GSH), and malondialdehyde (MDA) were examined. The cells were divided into 4 groups; ⅰ) control, ⅱ) 2 mM H²O², and ⅲ) 2mM H²O² plus 10 ug/mL of CA, and ⅳ) 2 mM H²O² plus 40 ug/mL of CA. The activities of SOD, catalase, GST, GSH-Px and GSH levels in the H²O² group were significantly lower than those of the control group, while H²O² plus CA group stimulated the hepatic enzyme activities and GSH level. The level of MDA which had been increased by H²O² were markedly decreased in the CA pre-treated group. From these results, we recognized that CA might be considered as a useful agent in the prevention of various liver injuries induced by oxidative stress.
Therefore, the capability of CA to protect against CCl₄-induced hepatotoxicity and oxidative stress was investigated in rats. In this study, the model of CCl₄-induced acute hepatotoxicity in rats, was employed because this chemical is a potent hepatotoxin and a single exposure can rapidly lead to severe hepatic necrosis and steatosis. As expected, a single oral dose of CCl₄ at 1.25 mL/kg showed the significant hepatotoxicity, as evidenced by a dramatic elevation in the serum GOT and GPT activities and an increased incidence and severity of histopathological hepatic lesions in rats. In addition, CCl₄ treatment produced high levels of oxidative damage, as evidenced by a significant elevation in hepatic MDA level and a significant decrease in GSH concentration and catalase, SOD, GST, and GPx activities, which suggest a role of oxidative stress in CCl4 hepatotoxicity. However, pre-treatment with CA showed a significant protective effect against CCl₄-induced acute hepatotoxicity and oxidative stress in rats. A single oral dose of CCl₄ at 1.25 mL/kg resulted in a significant increase in the hepatic MDA concentration, indicating increased lipid peroxidation caused by administration of CCl₄. The significant decrease in the hepatic MDA concentration confirms that pretreatment with CA could effectively protect against the hepatic lipid peroxidation induced by CCl₄.
These results indicated that CA from OJ had protective action against H₂O₂-induced hepatotoxicity in vitro and CCl₄-induced hepatotoxicity in vivo, indicating CA as a useful hepatoprotectant against various liver diseases induced by oxidative stress.
Based upon these results, the ethanolic extract from O. javanica DC. were further utilized as the industrial point. The industrial-based extraction and purification procedure was established, and then the drink containing the hepatotactant from O. javanica DC. was produced.

목차 Contents

• 제출문 ... 1
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 9
• TABLE OF CONTENTS ... 13
• 목차 ... 16
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 22
• 제 1 절 연구개발의 목적 ... 22
• 제 2 절 연구개발의 필요성 ... 23
• 제 1 항 기술적 측면 ... 23
• 제 2 항 경제ㆍ산업적 측면 ... 23
• 제 3 항 사회ㆍ문화적 측면 ... 24
• 제 3 절 연구개발의 범위 ... 24
• 제 1 항 미나리 발효추출물에서 유효물질/제품의 in vitro 활성 측정 ... 24
• 제 2 항 미나리 유효성분 추출, 발효 및 제품개발에 관한 연구 ... 24
• 제 3 항 미나리에서 간활성 유효물질/제품의 간기능 활성화에 대한 전임상 ... 24
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 25
• 제 1 절 해외의 일반 간염연구 현황 ... 25
• 제 2 절 국내의 일반 간염연구 현황 ... 26
• 제 3 절 생약성분의 간염억제 연구동향 ... 28
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 31
• 제 1 절 미나리 발효추출물에서 유효물질/in vitro 활성 측정 ... 31
• 제 1 항 재료 및 방법 ... 31
• 가. 재료 ... 31
• 나. 실험방법 ... 31
• 1) 시료의 항산화 활성 ... 31
• 2) HepG2 세포에서의 항산화능 측정 ... 32
• 3) HepG2 세포에서의 MDA 함량 변화 측정 ... 32
• 4) cytotoxicity 유무는 in vitro test에서 규명 ... 32
• 5) B형 간염 표면항원에 대한 억제 정도 분석 ... 33
• 6) 미나리 발효추출물의 항바이러스 작용을 보기 위하여 HBV-DNA 복제 copy number 검색법 ... 33
• 7) DNA fragmentation assay과 anti-apoptotic 단백질의 발현 측정 ... 33
• 8) 염증 관련 사이토카인의 생성에 미치는 영향 분석 ... 34
• 9) NF-kB의 활성화 측정 ... 34
• 제 2 항 결과 ... 35
• 가. 미나리 추출물 및 간 기능 개선 유용 성분의 항산화 및 free radical 소거능 측정 ... 35
• 1) 미나리 추출물 및 간 기능 개선 유용 성분의 지질과산화 억제능 측정 ... 35
• 2) 미나리 추출물 및 간 기능 개선 유용 성분 DPPH radical 소거능 측정 ... 37
• 3) 미나리 추출물 및 간 기능 개선 유용 성분의 superoxide anion- radical 소거능 측정 ... 39
• 나. 미나리 함유 간 기능 향상 유용성분의 in vitro 상에서의 산화적 스트레스 억제효과 ... 41
• 1) Catalase 활성 ... 41
• 2) Superoxide Dismutase 활성 ... 42
• 3) Glutathione-S-transferase ... 43
• 4) Glutathione Peroxidase ... 44
• 5) Glutathione ... 45
• 6) Malondealdehyde ... 46
• 다. 미나리 추출물의 HepG2.2.15 간염세포계에서의 항염증효과 측정 ... 47
• 1) MTT 독성 test ... 47
• 2) LPS 과 유도된 HepG2.2.15 세포에서의 proinflammatory cytokine의 발현 억제 측정 ... 48
• 3) PGE2의 발현 억제 측정 ... 50
• 4) OJE 의 COX-2 의 발현 억제 측정 ... 50
• 5) NF-kB 와 AP-1 transcription factor의 활성화 및 신호전달체계 억제 효과 측정 ... 51
• 6) OJE에 의한 I-kBa degradation 억제 측정 ... 53
• 라. 미나리 추출물의 HBV replication 억제효과 측정 ... 53
• 1) OJE의 HBsAg과 HBeAg의 발현 억제 측정 ... 53
• 2) OJE에 의한 HBV mRNA 발현 억제 효과 측정 ... 55
• 마. 미나리 추출물의 간염세포계에서의 apoptosis 효과 ... 55
• 1) DNA fragmentation assay 측정 ... 55
• 2) Bcl-2/Bax의 발현 측정 ... 56
• 바. 클로로포름 분획의 humanl HepG2.2.15 간염세포계에서의 항염증 효과 측정 ... 57
• 1) MTT 독성 test ... 57
• 2) LPS/PMA 로 유도된 HepG2.2.15 세포에서의 proinflammatory cytokine의 발현 억제 측정 ... 58
• 3) PGE2 의 발현 억제 측정 ... 60
• 4) 클로로포름 분획 의 COX-2 의 발현 억제 측정 ... 61
• 5) NF-kB 와 AP-1 transcription factor의 활성화 및 신호전달체계 억제 효과 측정 ... 61
• 6) 클로로포름 분획에 의한 I-kBa degradation 억제 측정 ... 62
• 사. 클코로포름 분획의 HBV replication 억제효과 측정 ... 63
• 1) OJE의 HBsAg과 HBeAg의 발현 억제 측정 ... 63
• 2) 클로로포름 분획에서 HBV mRNA 발현 억제 효과 측정 ... 65
• 아. HepG2.2.15 세포에서 caffeic acid와 다른 화합물과의 상승효과 연구 ... 65
• 1) PGE2 발현 억제에 미치는 영향 ... 65
• 2) proinflammatory cytokines의 발현에 미치는 caffeic acid와 다른 화합물과의 상승효과 ... 66
• 제 2 절 미나리 유효성분 추출, 발효 및 제품개발에 관한 연구 ... 68
• 제 1 항 재료 및 방법 ... 68
• 가. 재료 ... 68
• 나. 실험방법 ... 68
• 1) HepG2 세포주 배양 ... 68
• 2) 미나리 추출물 조제 ... 68
• 3) 활성물질의 분획 ... 68
• 4) Silica gel 60에 의한 Prep. TLC ... 69
• 5) HPLC ... 70
• 6) IR spectroscopy ... 70
• 7) FAB mass spectroscopy ... 70
• 8) Nuclear magnetic resonance spectroscopy ... 70
• 9) 일반성분 분석 ... 70
• 10) 총 폴리페놀 함량 ... 70
• 11) 총 플라보노이드 함량 ... 71
• 12) DPPH radicals 소거능 ... 71
• 13) Superoxide anion radical 소거능 ... 71
• 14) 지질과산화 억제능 ... 71
• 15) 세포독성 ... 72
• 16) 간기능 향상능 측정 ... 72
• 17) 미나리 함유 간 기능 개선 유용물질의 공업적 추출방법 ... 72
• 18) 미나리 함유 간 기능 개선 유용물질의 공업적 수준 분리 및 정제 ... 72
• 19) 당액추출물로부터 발효미생물의 선별과 동정 ... 73
• 20) 선별 미생물을 이용한 미나리발효액으로 유효성분의 추출과 간보호 활성의 비교 ... 73
• 21) 산업적 순도수준의 정제물질에 대한 소재화 적성 검토 및 시제품 제작 ... 73
• 제 2 항 결과 ... 74
• 가. 미나리의 성분분석 ... 74
• 나. 용매별 추출조건의 최적화 ... 75
• 다. 추출횟수별 추출조건의 최적화 ... 76
• 라. 추출방법에 따른 추출조건의 최적화 ... 77
• 마. 대량 추출방법의 확립 ... 78
• 바. 추출물별 in vitro 간 기능 개선과 비교 ... 78
• 사. 미나리 추출물의 한외여과 ... 80
• 아. 미나리 추출물의 용매별 분리 ... 81
• 자. 활성물질의 분리 ... 85
• 차. 정제물질의 구조분석 및 물리화학적 성질 ... 88
• 카. 미나리 함유 유용성분의 in vitro 간기능 개선 효과 측정 ... 93
• 타. 미나리 함유 간 기능 개선 유용물질 공업적 추출조건 최적화 ... 95
• 파. 미나리 함유 간 기능 개선 물질의 공업적 수준에서의 분리 및 정제 ... 96
• 하. 당액추출물로부터 발효미생물의 선별과 동정 ... 97
• 갸. 선별 미생물을 이용한 미나리발효액으로 유효성분의 추출과 간보호 활성의 비교 ... 98
• 냐. 건강지향식품으로의 시제품 제작 및 안정성 검사 ... 101
• 제 3 절 미나리에서 간활성 유효물질/제품의 간기능 활성화에 대한 전임상 연구 ... 105
• 제 1 항 재료 및 방법 ... 105
• 가. 재료 ... 105
• 나. 실험방법 ... 105
• 1) cytokines의 측정 ... 105
• 2) 치사량 (LD50) 측정 test ... 106
• 3) 수명연장효과 (survival test)의 검증 ... 106
• 4) 미나리의 간염활성추출물의 NK cell 활성에 미치는 영향성 측정 ... 106
• 5) T 세포와 B 세포의 증식능력(mitogenesis) 측정 ... 106
• 6) Th1/Th2 type cytokines 의 분비능력 측정 ... 107
• 7) 간조직의 lipid peroxidation 측정 ... 107
• 8) 간조직의 vitamin E 량의 측정 ... 107
• 9) GOT, GOP 및 혈중 지질의 측정 ... 107
• 10) PBMC의 산화적 스트레스 측정 ... 108
• 11) cytotoxic T(Tc) cell의 활성 측정 ... 108
• 12) MTT assay ... 108
• 13) In vivo 상에서 미나리 간 기능 개선 유용성분의 독성평가 ... 108
• 14) In vivo 상에서 미나리 간 기능 개선 유용물질의 유효성 평가 ... 109
• 제 2 항 실험 결과 ... 113
• 가. 미나리 추출물의 mouse RAW264.7 macrophage cell line에서의 항염증 효과 측정 ... 113
• 1) MTT 독성 test ... 113
• 2) lipopolysaccharide(LPS) 유도된 RAW264.7 세포에서의 TNF-a의 발현 억제 측정 ... 114
• 3) OJE의 PGE2 의 발현 억제 측정 ... 114
• 4) OJE 의 OX-2 의 발현 억제 측정 ... 115
• 5) NF-kB 와 AP-1 transcription factor의 활성화 및 신호전달체계 억제 효과 측정 ... 116
• 6) OJE에 의한 I-kBa degradation 억제 측정 ... 118
• 나. 미나리 추출물의 안전성 평가 ... 118
• 1) 미나리 추출물 (OJE)의 독성 및 LD50 결정 ... 118
• 2) 장기조직의 무게 측정 ... 120
• 3) 염증 관련 cytokines의 측정 ... 120
• 4) 독성 T 세포 (Tc)의 활성 측정 ... 123
• 5) SOD와 Catalase의 측정 ... 123
• 6) NK 세포의 활성 측정 ... 124
• 7) hepatic vitamin E 농도 측정 ... 125
• 8) hepatic lipid peroxidation ... 125
• 다. 미나리 단일 및 복합 추출물의 안전성 평가 ... 126
• 1) 미나리 클로로포름 분획(CF)의 독성 및 LD50의 결정 ... 126
• 2) 장기 조직의 무게 측정 ... 127
• 3) 염증 관련 혈중 cytokines의 유리 측정 ... 128
• 라. 미나리 발효액의 안전성 확인 연구 ... 130
• 1) 혈중 GPT와 GOT level 분석 ... 130
• 2) 혈중 vitamin C 농도 분석 ... 131
• 3) 혈중 lipid peroxidation 분석 ... 132
• 4) PBMC 산화적 스트레스에 대한 저항적 분석 ... 133
• 마. 미나리 활성성분인 caffeic acid와 coumaric acid, lamivudin, interferon-r 과의 상승효과 확인 ... 133
• 바. 미나리 유용성분의 in vivo 독성평가 ... 135
• 사. 미나리 유용성분의 in vivo 간기능 개선 효과 ... 135
• 1) 체중변화와 장기무게 ... 135
• 2) 혈액 성분 분석 ... 136
• 3) 조직병리학적 변화 측정 ... 138
• 4) 산화적 스트레스 억제능 측정 ... 140
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 149
• 제 1절 연구개발 착안점 및 달성도 ... 149
• 제 2절 관련분야의 기술발전에의 기여도 ... 151
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 152
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 154
• 제 7 장 참고문헌 ... 156
• 부록 ... 162
• 1. 발표논문 ... 162
• 2. 특허출원 ... 177
• 끝페이지 ... 180