초록 ▼

아직까지 다양한 산-염기 대사 장애에서 암모니아 운반체의 역할은 정립되지 않은 상태이다. 본 연구 과제의 목표는 신질환의 요산성화능 장애에 있어서 다양한 병태생리기전에 따른 암모니아 운반체의 역할과 조절기전을 규명하고자 하였다. 이를 위해 다양한 병태생리기전의 요산성화능 장애에 있어서 기전 및 신질환의 진행 시기에 따른 암모니아 운반체의 발현 양상에 대하여 분자생리학적, 형태학적 분석기법을 이용하여 확인하였다.신질환 치료에 영향을 미치는 요소인 알카리 치료, 안지오텐신 II와 알도스테론, 혈중 칼륨 농도 변화에 따른 암모니아 운반체

아직까지 다양한 산-염기 대사 장애에서 암모니아 운반체의 역할은 정립되지 않은 상태이다. 본 연구 과제의 목표는 신질환의 요산성화능 장애에 있어서 다양한 병태생리기전에 따른 암모니아 운반체의 역할과 조절기전을 규명하고자 하였다. 이를 위해 다양한 병태생리기전의 요산성화능 장애에 있어서 기전 및 신질환의 진행 시기에 따른 암모니아 운반체의 발현 양상에 대하여 분자생리학적, 형태학적 분석기법을 이용하여 확인하였다.신질환 치료에 영향을 미치는 요소인 알카리 치료, 안지오텐신 II와 알도스테론, 혈중 칼륨 농도 변화에 따른 암모니아 운반체의 발현 변화를 비교 분석하고, 신질환 환자의 임상지표와 신조직에서 암모니아 운반체의 발현을 확인하여 암모니아 운반체의 조절 기전을 규명하고자 하였다.
실험동물은 200-250g 사이의 웅성 Sprague-Dawley계 흰쥐를 사용하였으며, 대조군, 신세뇨관성 산증, 만성신질환군, 당뇨병성신증군으로 분류하였다. 신세뇨관성 산증군은 아밀로라이드 투여, 리튬투여, 요로폐쇄로 유발하였다. 대사케이지에서 소변 및 혈액 채취하여 pH, osmolality, 혈액가스 분석, 생화학적 및 호르몬 검사, 암모니아 농도를 측정하였다. 대동맥을 통해 PLP용액으로 관류시킨 후 신장 조직을 처리하여, Immunoblotting 반정량법, RT-PCR법, 면역조직화학염색법을 시행하고 병태생리 기전에 따라 비교하였다. 일차항체는 암모니아 운반체 Rhbg (Rhesus B glycoprotein)와 Rhcg (Rhesus C glycoprotein)에 대한 rabbit polyclonal antibody를 사용하였다. 세포분자 수준에서 암모니아 운반체의 조절 변화를 확인하기 위해 Image J 프로그램을 이용한 면역조직화학염색법의 형태학적 정량분석을 시행하여 비교분석하였다.
1차년도에서는 다양한 병태생리 기전의 신질환 모델에서 진행시기에 따라 요 암모니아 배설 변화와 혈중 중탄산염의 변화가 진행됨을 확인하였고, 요 암모니아 배설정도에 따라 각 신질환 모델에서 Rhcg 발현도 변화하는 것을 확인하였다. 2차년도에는 신질환의 요산성화능 장애에서 알카리 치료 및 요로폐쇄 해제에 따른 요산성화능과 암모니아운반체의 발현에 미치는 효과를 확인하였다. 알카리 투여한 만성신부전에서는 만성신부전군에 비하여 요 암모니아 배설이 유의하게 증가하였으며, Rhcg 발현이 증가되었던 만성신부전군에서 알카리 투여후에 Rhcg 발현이 감소하였다. 요로폐쇄군은 폐쇄 해제후 1일, 3일, 14일후를 비교하였으며, 요로폐쇄 해제후 요 암모니아 배설이 증가되었으며, Rhcg 발현은 요로폐쇄후 14일군에서 정상화되었다. 3차년도에는 신질환의 요산성화능 장애 모델에서 안지오텐신 수용체 차단 및 알도스테론 유도체 투여후 레닌-안지오텐신 II-알도스테론계의 변화가 암모니아 운반체가 미치는 영향을 확인하였다. 4차년도에는 신질환의 요산성화능 장애 모델에서 혈중칼륨 농도가 요산성화능과 암모니아 운반체의 발현 변화에 영향을 미치는 것을 확인하였다. 저칼륨식이로 저칼륨혈증을 유발한 만성신부전군에서 만성신부전군에 비하여 혈청 크레아티닌 농도가 높았으며, 혈중 중탄산염 농도가 유의한 상승을 보였다. 요 암모니아 배설은 저칼륨혈증 유발 만성신부전군에서 암모니아 배설이 유의한 증가를 보였으며, Rhcg의 발현 증가소견도 관찰되었다. 5차년도에는 신질환 환자의 신조직에서 암모니아 운반체의 발현 정도를 확인하였다. 신질환에서 동반되는 다양한 기전의 요산성화능 장애에 있어서 암모니아 운반체는 중요한 역할을 하며, 신질환의 요산화능 장애에 있어서 알카리 치료, 안지오텐신 II와 알도스테론의 변화,혈중 칼륨 농도는 암모니아 운반체의 발현에 영향을 주는 것을 확인하였으며, 신질환 환자의 신조직에서 암모니아 운반체의 발현을 직접 확인하여 향후 신질환에 동반된 요산성화능 장애의 진단과 치료 전략에 중요한 기초자료가 될 것으로 생각한다.