초록 ▼

수인성·식품매개바이러스는 인간의 분변에서 배출된 바이러스가 환경에 오염되고, 물을 통해 전달되어 이를 이용하여 제조, 가공한 식품으로 인간에게 다시 전달되어 집단발생을 일으킨다. 이러한 식중독의 신속한 원인규명을 위해 식중독 원인조사 시험법을 활용하고 있으나, 현재 식중독 원인조사 시험법에는 1,500L의 식품용수 시험법만 있고, 소량의 음용수에 대한 바이러스 시험법은 없어 음용수 1L에 적용 가능한 식중독바이러스 검출 시험법을 개발하여 식중독 원인조사 시험법에 반영하고자 한다. 또한 식품 및 환경에 존재하는 미량의 노로바이러스의

수인성·식품매개바이러스는 인간의 분변에서 배출된 바이러스가 환경에 오염되고, 물을 통해 전달되어 이를 이용하여 제조, 가공한 식품으로 인간에게 다시 전달되어 집단발생을 일으킨다. 이러한 식중독의 신속한 원인규명을 위해 식중독 원인조사 시험법을 활용하고 있으나, 현재 식중독 원인조사 시험법에는 1,500L의 식품용수 시험법만 있고, 소량의 음용수에 대한 바이러스 시험법은 없어 음용수 1L에 적용 가능한 식중독바이러스 검출 시험법을 개발하여 식중독 원인조사 시험법에 반영하고자 한다. 또한 식품 및 환경에 존재하는 미량의 노로바이러스의 검출민감도 향상하고, 노로바이러스 유전자 변종 발생을 추적하기 위하여 본 연구에서는 노로바이러스 유전자 검출 시약 검토를 통하여 검출한계를 향상시키고, 유전형 분석 부위를 확대하고자 하였다.
본 연구의 목표달성을 위해 가장 빈번하게 발생되는 대표적인 식중독바이러스 3종 (A형간염바이러스, 로타바이러스, 뮤린노로바이러스)의 배양법을 확립함으로써 바이러스를 확보하였다. 또한 문헌조사를 통하여 소량의 물을 이용한 바이러스 시험법 3종을 선정하였다. 선정된 시험법은 다양한 흡착-탈리-농축법을 이용하여 A형간염바이러스에 적용을 한 뒤 시험법 별로 가장 우수한 검출한계을 보인 시험법을 이용하여 로타바이러스와 뮤린노로바이러스에도 적용하여 검출한계를 실험하였다. 그 결과, modified ISO 15216 시험법에서 검출한계가 제일 낮았으며(HAV;10² copy/L, Rota;10³ copy/L, MNV;10¹ copy/L), process control인 mengo virus로 회수율을 확인한 결과 64.9%(10³ copy/L 기준)로 나타났다(>1% 이상 적합) 노로바이러스 유전자 증폭효율의 증가를 위하여 시약 변경을 검토하였다. 현재 식중독 원인조사에서 사용하는 시약 외, 국내 생산제품이나 해외제품을 선정하기 위하여 조사하여, 총 6개의 국내외 제조사의 시약을 선정하고(국내 3건, 국외 3건), 노로바이러스 양성대조군에 적용하여 증폭효율을 검토하였다. 그 결과 RT-qPCR에서는 현행 A사와 F사가 GI GII 모두 10¹ copy/uL로 검출한계가 가장 낮았다. 아울러 1-step RT-PCR의 경우, D사가 타 제조사 시약에 비해 검출한계가 높았다(GI;10¹ copy/uL, GII:10⁰ copy/uL) Takara를 이용한 1차 PCR product를 template DNA로 하여 semi-nested PCR을 제조사 별로 진행하였다. 그 결과 D사와 F사에서 가장 검출한계가 낮았다. 변경된 시약을 음용수, 조리용수에서 분리한 노로바이러스에 적용한 결과, 새로 선정된 시약에서 증폭효율이 개선되었음을 확인하였다.
본 연구는 마지막으로 노로바이러스 유전형 분석 부위를 추가하여 식중독 원인조사에 도입하기 질병관리청의 유전자형 결정 증폭부위(RdRp+capsid region)과 식약처 유전형 결정 증폭부위 (capsid)를 이용하여 총 4가지의 시험법을 비교하였다(시험법 1; 질병청(1차), 시험법 2; 질병청(1차)+질병청(2차), 시험법 3; 질병청(1차)+식약처 (2차), 시험법 4; 식약처(1차)+식약처(2차)) 그 결과, 현행 식약처 시험법의 증폭 효율이 가장 높았으며, 그 뒤를 이어 시험법 3. 시험법 2 순으로 높음을 확인하여 식품 및 환경중에서의 노로바이러스 검출을 위해서는 semi-nested는 반드시 필요할 것이라고 사료되었다. 따라서, 식약처 시험법(시험법3) 진행 후 또한 시험법 2와 시험법 3을 동시 진행함으로써 검출율을 유지하는 유전자형 결정부위 확대 가능성을 확인할 수 있었다.
본 연구를 통해 개선·개발된 시험법을 식중독 원인조사에 적용함으로써 신속하고 정확한 식중독 원인 규명에 기여할 것으로 기대된다.

(출처 : 요약문 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 국문 요약문 ... 4
• 목차 ... 5
• 표목차 ... 6
• 그림목차 ... 11
• 연구개발과제 연구결과 ... 13
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 13
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 24
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 36
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 128
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 131
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 132
• 제7장 참고문헌 ... 135
• 끝페이지 ... 140