선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- I' 그러나 이러한 흥분성아미노산과 관련된 수용체를 차단하는 화합물들이 심각한 부작용 때문에 임상시험에서 새로운 의약품으로 아직까지 인정을 받지 못하고 있는 실정이다.25) 따라서 제주도 자원식물들인 손바닥 선인장 열매와 삼백초의 메탄올 추출물이 이러한 glutamate 수용체의 자극으로 인한 신경세포의 손상과정에 관여하는 것으로 알려진 free radical의 생성 증가와 arachidonic acid 투여로 인한 뇌신경세포 손상에 방어효과가 있는지 알아보고자 생쥐 피질신경세포를 초대배양(primary culture)하여 조사하였다.
제안 방법
- 09% trypsin이 있는 시험관에 넣어 37℃에서 1시간 배양하였다. 그후 이를 꺼내 500Xg 에서 5분간 원심분리시킨 다음 상등액을 버리고 여기에다 각각 10%씩의 우태가 및 말의 혈청이 있는 Eagle's minimal essential medium(MEM) 배양액을 1 mZ 넣어 파스테르 파이펫으로 뇌세포를 여러번 왕복하여 부서지게하여 하나씩의 세포로 모두 분리될 때까지 여러번 반복한 다음 epidermal growth factor# 첨가하여 24 well의 배양판에 0.5~0.75 대뇌반구/plate 농도로 각각 400 B씩 분주하였다. 첫 2주간은 그냥 방치하고 그 이후는 1주일 마다 1회씩 배양액을 2/3씩 교환하였다.
- 75 대뇌반구/plate 농도로 각각 400 B씩 분주하였다. 첫 2주간은 그냥 방치하고 그 이후는 1주일 마다 1회씩 배양액을 2/3씩 교환하였다. 이렇게 하여 자란 3~6주 정도된 글리아를 기질로 신경세포를 키우기 위해 임신 15~16일된 생쥐를 동일한 마취제를 사용하여 무균적으로 임신된 자궁을 꺼낸다음 역시 뇌를 적출하여 대뇌피질 부위를 입체현미경하에서 미세 핀셋으로 짤라 동일하게 단리세포로 만든 다음 글리아 위에 배양하였다.
- 이때 글리아를 키우던 배지는 모두 제거하고 우태가 및 말의 혈청이 각각 5%씩 들어있는 MEM 배지를 400 B되게 하여 세포를 유지하였다. 그리고 5~7일째 비신경세포의 성장을 억제하기 위해 cytosine arabinoside (10 皿)를 첨가하였고 이렇게 하여 2주 이상 신경세포를 키워 성숙하게 되었을 시 실험에 사용하였다. 이때 신경손상유발 독성물질과 이들 두 식물추출물을 배양세포에 농도별로 각각 가하여 방어효능을 조사하였다.
- 그리고 5~7일째 비신경세포의 성장을 억제하기 위해 cytosine arabinoside (10 皿)를 첨가하였고 이렇게 하여 2주 이상 신경세포를 키워 성숙하게 되었을 시 실험에 사용하였다. 이때 신경손상유발 독성물질과 이들 두 식물추출물을 배양세포에 농도별로 각각 가하여 방어효능을 조사하였다.
- Superoxide anion radical로 인한 신경손상에 대해 손바닥선인장 및 삼백초 메탄올추출물의 방어효능을 조사하기 위해 xanthine(0.5 mM)/xanthine oxidase (10mU/m戒를 HEPES-buffered control salt solution (HCSS)에 녹여 배양신경세포에 10분간 노출시킨 뒤 (이때 식물추출물을 농도별로 동시에 처리, 대조군은 무처리) 다시 MEM 배양액으로 교환하고 20~24시간 뒤 Lactate dehydrogenase(LDH)를 정량하여 대조군과 비교평가 하였다. Hydroxyl radicals.
- Hydroxyl radicals. 인한 신경손상에 대해 이들 두 식물추출물의 방어효능을 조사하기 위해서는 FeCl2(50 nM)/ascorbic acid(25 |1M)를 HEPES- buffered control salt solution(HCSS)에 녹여 배양신경세포에 2시간 노출시킨 뒤(이때 식물추출물을 농도별로 동시에 처리, 대조군은 무처리) 다시 MEM 배양액으로 교환하고 20~24시간 뒤 LDH를 정량하여 대조군과 비교평가 하였다. Arachidonic acid로 인한 신경손상에 대해 이들 두 식물추출물의 방어효능을 조사하기 위해서 100皿의 arachidonic acid를 식물추출물과 동시에 MEM 배양액 상에서 처리하고 20~24시간 뒤 LDH를 정량하여 대조군과 비교평가 하였다.
- 인한 신경손상에 대해 이들 두 식물추출물의 방어효능을 조사하기 위해서는 FeCl2(50 nM)/ascorbic acid(25 |1M)를 HEPES- buffered control salt solution(HCSS)에 녹여 배양신경세포에 2시간 노출시킨 뒤(이때 식물추출물을 농도별로 동시에 처리, 대조군은 무처리) 다시 MEM 배양액으로 교환하고 20~24시간 뒤 LDH를 정량하여 대조군과 비교평가 하였다. Arachidonic acid로 인한 신경손상에 대해 이들 두 식물추출물의 방어효능을 조사하기 위해서 100皿의 arachidonic acid를 식물추출물과 동시에 MEM 배양액 상에서 처리하고 20~24시간 뒤 LDH를 정량하여 대조군과 비교평가 하였다.
- 신경세포의 손상은 배양세포에서 세포밖의 배양액으로 분비되는 LDH를 측정하였는데 손상 및 파괴된 세포로부터 분비가 거의 완료되는 20~24시간 정도에서 세포 배양액을 채취하여 microplate reader로 측정하였다. 이 방법은 흥분성아미노산 및 유리라디칼로 인한 배양신경세포 독성시 LDH의 분비가 손상 및 파괴된 신경세포수와 비례하였음은 이미 확인되었다.
- 1A, IB). 대조약물로서는 superoxide anion radical을 억제하는 것으로 알려진 catalase(50 U/m/)를 사용하여 비교하였다. 이에 대한 위상차 현미경으로 세포체를 사진찍어 신경세포가 이들 추출물 투여로 보호됨을 형태학적으로 재확인하였다(Fig.
- 3A, 3B). 이에 대해 위상차 현미경상 세포체를 사진 찍어 신경세포가 이들 추출물 투여로 보호됨을 형태학적으로 재확인하였고(Fig. 4), 대조약물로는 deferoxamine (200 |1M)을 사용하여 이들 두 식물 주줄물과 비교하였다.
대상 데이터
-
식물추출물 제조
제주시내 오일장에서 구입한 제주산 손바닥 선인장 열매 및 삼백초를 잘 건조시킨 다음 70% methanol(MeOH)에 300 g/1.5 L 되게 2-3일간 침적시켜 놓은 다음 80℃ 수욕조에서 3시간 정도 가열하여 회전식 증발기를 사용하여 농축시킨 다음 -80K에서 동결시켜진 공동결건조기를 사용하여 powder 형태로 검색시료를 제조하여 -20℃에 밀봉 보관하였다가 실험에 사용하였다.
데이터처리
- 모든 실험성적은 mean土S.E로 나타내었으며 posthoc Student-Neuman-Keuls 방법에 의해 유의성을 검정하였다.
- The bars denote LDH release (mean ± SEM, n=4) in sister cultures 20~24 h after a 10 min exposure to X/XO alone, with the addition of 50 U/ml catalase (+), or with the addition of MEOF or MESC at the indicated concentrations. The differences were evaluated with one-way ANOVA and the post-hoc Student-Neuman-Keuls test for multiple comparisons (*p<0.01, **p<0.001 vs. controls).
- The bars denote LDH release (mean ± SEM, n=4) in sister cultures 20~24 h after a 10 min exposure to X/XO alone, with the addition of 50 U/ml catalase (+), or with the addition of MEOF or MESC at the indicated concentrations. The differences were evaluated with one-way ANOVA and the post-hoc Student-Neuman-Keuls test for multiple comparisons (*p<0.01, **p<0.001 vs. controls).
성능/효과
- 성숙된 배양신경세포에 X(0.5mM)/XO(10mU/mZ)를 손바닥 선인장 및 삼백초 메탄올추출물과 함께 10분동안 처리하였을 시 superoxide anion radical 유발신경손상에서는 손바닥선인장 및 삼백초 투여군에서 10 p.g/m/~l mg/mZ 처리농도에서 대조군에 비해 각각 53-89% 및 48~100%의 농도의존적인 신경손상 억제효과를 나타내어 두 추출물간에 비슷한 억제효과가 있음을 알 수있었다(Fig. 1A, IB). 대조약물로서는 superoxide anion radical을 억제하는 것으로 알려진 catalase(50 U/m/)를 사용하여 비교하였다.
- 2). Hydroxyl radical로 인한 신경손상에 대한 손바닥선인장 및 삼백초 메탄올추출물 방어효과를 알아보기 위해 FeCl2(50 pM)/ascorbic acid(25 pM)와 함께 각각의 두 식물추출물을 10阐m/~lmg/m/ 농도로 2시간동안 동시처리하고 20~24시간 뒤 그 방어효과를 조사한바 손바닥선인장 및 삼백초 투여군에서 대조군에 비해 각각 35-100% 및 15~98%의 농도 의존적인 신경손상 억제효과를 보였으며 손바닥선인장 투여군이 삼백초 투여군에 비해 각각의 투여농도에서 보다 우수한 억제효과를 나타냄을 알 수 있었다(Fig. 3A, 3B). 이에 대해 위상차 현미경상 세포체를 사진 찍어 신경세포가 이들 추출물 투여로 보호됨을 형태학적으로 재확인하였고(Fig.
- 배양신경세포에 100(1M의 arachidonic acid를 손바닥선인장 및 삼백초 메탄올 추출물과 함께 20-24시간 동안 처리하였을 시 손바닥선인장 및 삼백초 추줄물 1 mg/m/ 처리농도에서 대조군에 비해 각각 22% 및 38%의 신경독성 방어효과를 나타내어 삼백초 추출물이 arachidonic acid 유발 신경손상에 대해 손바닥선인장 추출물보다 더 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다(Fig. 5).
- 기본 연구가 미흡한 실정이다. 본 연구에서는 손바닥선인장 열매 뿐만 아니라 삼백초 메탄올추출물도 마우스 신경세포배양을 이용한 free radical 관련 신경손상시 우수한 보호효과가 있음을 알 수 있었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.