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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 손쉽게 구하여 구황식물 및 약재로 널리 사용되어 온 민들레의 체내 지질대사 개선효능을 구명 하기 위하여 1% 콜레스테롤과 0.25% 콜산 나트륨을 첨가한 고콜레 스테 롤 유발식 이를 흰쥐 에 게 급여 하고 민들레의 분획별 추출물이 혈청과 간조직 중의 지질농도변화에 미치는 영향을 관찰하였다.
제안 방법
- 6주간 사육한 흰쥐를 16시간 절식시 킨 후 에테르로 가볍 게 마취 하여 개복하고 복부 대동맥으로부터 채혈하여 실온에서 30분간 방치한 다음 600xg에서 10분간 원심분리하여 혈청을 얻었다. 간조직은0.
- 간조직 중의 지질은 Folch 등(15)의 방법에 의해 추출한 후 혈청과 동일한 방법으로 즉정하였다. HMG~CoA reducatse 활성은 Hulcher와 Oleson의 방법 (16), ACAT 활성은 Gillies 등(17)의 방법을 수정 . 보완하여 측정하였다.
- 고콜레스테롤혈증 유발식이는 AIN-93(11)을 기준으로 1% 콜레스테롤과 0.25% 콜산나트륨을 첨가하여 조제하였다. 민들레 잎은 분획별로추출하여 열수추출물군, 에 틸 아세 테 이 트추출물군과 에 테 르추출물군으로 나누고 사람이 섭 취 하는 양과 흰쥐의 사료섭 취 량을 고려하여 식이 kg당 11.
- 25% 콜산나트륨을 첨가하여 조제하였다. 민들레 잎은 분획별로추출하여 열수추출물군, 에 틸 아세 테 이 트추출물군과 에 테 르추출물군으로 나누고 사람이 섭 취 하는 양과 흰쥐의 사료섭 취 량을 고려하여 식이 kg당 11.45 g의 민들레가 함유되도록 식이에 첨가하여 급여하였다. 물은 제한없이 공급하였고 사육실 온도는 18 ±2℃로 유지하였으며, 조명은 12시간 주기(08: 00~20 : 00)로 조절하였다.
- HMG~CoA reducatse 활성은 Hulcher와 Oleson의 방법 (16), ACAT 활성은 Gillies 등(17)의 방법을 수정 . 보완하여 측정하였다.
- 에 틸아세 테 이 트추출물은 민들레 에메 탄올 : 증류수(4 : 1) 1,000 mL를 가하고 24시간 방치 하여 분리한 조직 잔사에 에틸아세테이트 1,000mL를 가해분액깔대기 에서 진탕하면서 12시간 방치한 후 여과한 상층 액을 진공회전증발기로 감압농축 후 동결건조하여 사용하였다. 에테르추출물은 민들레 100 g에 99% 메탄올 1, 000 mL 가해 분액깔대기에서 진탕하면서 24시간 방치한 후 여과한'상층액을 진공회전증발기로 감압농축하여에 테 르 100 mL와 증류수 50 mL를 가하고 상층액을 취 해이를 진공회전증발기로 감압농축한 후 동결건조하여 사용하였다(Fig. 1). 각 분획별 추출물의 수득률은 열수 추출물이 21.
- 열수추출물은 민들레 100 g에 증류수 1, 000 mL를 가한 다음 heating mantle상에서 24시간 진탕 하여 여과한 여 액을 진공회전증발기로 감압농축한 후 동결건조하여 사용하였다. 에 틸아세 테 이 트추출물은 민들레 에메 탄올 : 증류수(4 : 1) 1,000 mL를 가하고 24시간 방치 하여 분리한 조직 잔사에 에틸아세테이트 1,000mL를 가해분액깔대기 에서 진탕하면서 12시간 방치한 후 여과한 상층 액을 진공회전증발기로 감압농축 후 동결건조하여 사용하였다.
- 유리콜레스테롤 농도는 kit(아산제약, 한국)를 사용하여 측정하였으며, 콜레스테릴에스테르 농도는 총 콜레스테롤 농도에서 유리콜레스테롤 농도를 뺀 값으로 표시하였다. 지단백-콜레스테롤 농도는 kit(Eiken Co.
- 물은 제한없이 공급하였고 사육실 온도는 18 ±2℃로 유지하였으며, 조명은 12시간 주기(08: 00~20 : 00)로 조절하였다. 최종 체중에서 실험개시 전의 체중을 감하여 체중증가량으로 표시하였고, 식이섭취량은 일정 시각에 측정하였으며 식이효율은 체중증가량을 식이 섭취량으로 나누어 산출하였다.
- 흰쥐에게 1% 콜레스테롤과 0.25% 콜산나트륨을 첨가한 고콜레스테롤혈증 유발식이와 민들레추출물을 분 획별(열수추출물군, 에 틸아세 테 이 트추출물군, 에 테르추출물군)로 나누어 급여하여 민들레추출물이 고콜레스테롤혈증에 미치는 영향을 구명하였다. 체중증가량과 식이 섭취량은 대조군에 비하여 열수추출물군에서 유의적으로 증가되 었으며 식 이효율의 유의적인 차이는 관찰되 지 않았다.
대상 데이터
- 실험동물은 Sprague Dawley계의 이유한 수컷 흰쥐 32마리를 10일간 적응시킨 후 평균 체중 110+10 g인 것을 난괴 법 에 의해 4군(Table 1)으로 나누어 6주간 사육하였다. 고콜레스테롤혈증 유발식이는 AIN-93(11)을 기준으로 1% 콜레스테롤과 0.
- 풍건한 제주도산 서양 민들레 잎 100 g을 균질기로 고속 2분, 저속 3분간을 3회 반복하여 조직을 파쇄하여 사용하였다. 열수추출물은 민들레 100 g에 증류수 1, 000 mL를 가한 다음 heating mantle상에서 24시간 진탕 하여 여과한 여 액을 진공회전증발기로 감압농축한 후 동결건조하여 사용하였다.
데이터처리
- 실험 결과는 SAS package를 이용하여 실 험군당 평 균土표준편차로 표시하였고, one way ANOVA 분석한 후각 군간의 평균치의 통계적 유의성은 p<0.05 수준에서 Duncan's multiple test(18)에 의해 검정하였다.
이론/모형
- , 일본)를 사용하여 측정하였다. 간조직 중의 지질은 Folch 등(15)의 방법에 의해 추출한 후 혈청과 동일한 방법으로 즉정하였다. HMG~CoA reducatse 활성은 Hulcher와 Oleson의 방법 (16), ACAT 활성은 Gillies 등(17)의 방법을 수정 .
- 혈청 중의 중성지질은 Muller 효소법 (12)에 의 해, 총 콜레스테롤 농도는 Richmond의 방법 (13)으로 측정하였으며, 인지질 농도는 Eng와 Noble(14)의 방법으로 측정하였다. 유리콜레스테롤 농도는 kit(아산제약, 한국)를 사용하여 측정하였으며, 콜레스테릴에스테르 농도는 총 콜레스테롤 농도에서 유리콜레스테롤 농도를 뺀 값으로 표시하였다.
성능/효과
- 1). 각 분획별 추출물의 수득률은 열수 추출물이 21.4%, 에틸 아세테이트추출물이 4%, 에테르 추출물이 10%이었다.
- 간조직 중의 HMG-CoA reductase 활성은 대조군에 비하여 민들레 열수추출물군에서 유의적으로 감소되었으며, ACAT 활성은 민들레추출물 급여군 모두 유의적인 감소를 나타내었다. 본 실험결과 민들레추출물 특히, 열수 추출물과 에 틸 아세 테 이 트추출물 급여는 고콜레 스테롤식 이를 급여한 흰쥐의 간조직 중 ACAT 활성을 감소시키므로써 혈청과 간조직의 총콜레스테롤과 유리 콜레스테롤 축적을 억제하는 것으로 사료된다.
- 간조직의 중성지질, 총콜레스테롤, 유리콜레스테롤 및콜레스테릴에스테르 농도는 각각의 민들레추출물 급여 시 대조군에 비하여 유의적으로 감소되었다. 특히 에틸아세테이트추출물군이 열수추출물군과 에 테 르추출물군에비 하여 중성지질 및 유리콜레스테롤 농도의 감소 효과가 현저한 것으로 나타났으며, 총콜레스테롤 농도는 열수 추출물 군과 에틸아세테이트추출물군의 감소 정도가 현저하였다.
- 반면, HDL-콜레스테롤 농도는 열수추출물과 에틸아세테이트추출물 급여시 유의적인 증가를 나타내었다. 동맥경화지수는 민들레추출물군 모두 유의적으로 감소되었다.
- 이와 같은 HDL-콜레스테 롤 농도 증가는 말초조직으로부터 콜레스테롤을 간으로 운반하여 혈관벽에 콜레스테롤 침착을 방지(28, 29)함으로써 관상동맥질환 예방이 가능함을 제시하고 있다. 또한 동맥경화발병 위험을 나타내는 동맥경화지수(AI)는 민들레추출물 급여시 유의적으로 감소됨으로써 고콜레스테롤혈증 개선에 효과가 있을 것으로 사료된다.
- 민들레 열수추출물이 고콜레스테롤 식이를 급여한 흰쥐의 간조직 중 HMG-CoA reductase 활성을 조절하므로써 혈중 지질수준을 개선할 수 있을 것으로 생각된다. 또한, 고콜레스테롤 식이 급여시 ACAT 활성이 증가하고 동맥벽에 콜레스테롤에스테르의 침착을 촉진하여 동맥경화 발현에 관련된다고 보고(33)되 어있으므로, 본 실험에서 민들레추출물 급여시 ACAT 활성감소는 콜레스테롤과 콜레스테롤에스테르의 농도를 경감 시 키므로써 동맥경화증의 예방과 치 료에 효과적 일 것으로 관찰되었다.
- 반면 민들레 분획 별추줄물군 모두 식 이 효율에는, 유의적인 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
- 반면, HDL-콜레스테롤 농도는 열수추출물과 에틸아세테이트추출물 급여시 유의적인 증가를 나타내었다. 동맥경화지수는 민들레추출물군 모두 유의적으로 감소되었다.
- 나타내었다. 본 실험결과 민들레추출물 특히, 열수 추출물과 에 틸 아세 테 이 트추출물 급여는 고콜레 스테롤식 이를 급여한 흰쥐의 간조직 중 ACAT 활성을 감소시키므로써 혈청과 간조직의 총콜레스테롤과 유리 콜레스테롤 축적을 억제하는 것으로 사료된다.
- 본 실험에서 HMG-CoA reductase 활성은 대조군에 비하여 민들레 열수추출물군에서만 유의적으로 감소되었으며 , ACAT 활성 은 대조군에 비하여 민들레 추출물 급여 군에서 유의적인 감소를 나타내었다. 분획에 따른 차이는 열수추출물군에 비해 에틸아세테이트추출물군이 유의적으로 감소되었다.
- 인지질은 지단백질의 구성요소일 뿐만 아니라 지질의 운반에 관여함으로써 합성 또는 공급 장애시 지방간의 원인이 되는데(22, 23), 혈중의 인지질 농도저하는 지방간 진행 요인으로 보고(24)되어 있다. 본 실험에서 각각의 민들레추출물 급여 시 혈중의 총콜레스테롤과 콜레스테릴에스테르 농도 감소와 인지질 농도 증가를 관찰함으로써 고콜레스테롤혈증 예방 및 치료에 민들레추출물이 효과적인 것으로 사료된다.
- 유의적인 감소를 나타내었다. 분획에 따른 차이는 열수추출물군에 비해 에틸아세테이트추출물군이 유의적으로 감소되었다. 민들레 열수추출물이 고콜레스테롤 식이를 급여한 흰쥐의 간조직 중 HMG-CoA reductase 활성을 조절하므로써 혈중 지질수준을 개선할 수 있을 것으로 생각된다.
- 25% 콜산나트륨을 첨가한 고콜레스테롤혈증 유발식이와 민들레추출물을 분 획별(열수추출물군, 에 틸아세 테 이 트추출물군, 에 테르추출물군)로 나누어 급여하여 민들레추출물이 고콜레스테롤혈증에 미치는 영향을 구명하였다. 체중증가량과 식이 섭취량은 대조군에 비하여 열수추출물군에서 유의적으로 증가되 었으며 식 이효율의 유의적인 차이는 관찰되 지 않았다. 혈청과 간조직 중의 중성지질, 총콜레스테롤과 콜레스테릴에스테르 농도는 대조군에 비하여 민들레추출물 급여시 유의적으로 감소되 었으며, 특히 에틸아세테이트추출물군의 간조직 중의 중성지질, 유리콜레스테롤 및 총콜레스테롤의 감소효과가 현저 한 것으로 나타났다.
- 킬로미크론-과 VLDL-콜레스테롤 농도는 민들레추출물 급여 시 대 조군에 비하여 유의 적 으로 감소되 었으며 분 획별에 따른 차이는 관찰되지 않았다. LDL-콜레스테롤 농도는 민들레추줄물 급여 시 감소하는 경향이 었는데, 특히 열수추출물과 에 틸아세 테 이 트추출물군은 유의 적 인 감소 효과를 나타냈다.
- 대조군에 비하여 유의적으로 감소되었다. 특히 에틸아세테이트추출물군이 열수추출물군과 에 테 르추출물군에비 하여 중성지질 및 유리콜레스테롤 농도의 감소 효과가 현저한 것으로 나타났으며, 총콜레스테롤 농도는 열수 추출물 군과 에틸아세테이트추출물군의 감소 정도가 현저하였다. Sinclair와 Collins(30)는 고지방식이 섭취시 지방간 발병은 인지질의 합성 감소로 인한 것으로 보고하였는데, 본 실험에서 인지질 농도가 민들레추출물 급여시 대조군에 비하여 유의 적 이 지 는 않으나 증가하는 경향을 나타냄으로써 지방간 진행을 억제할 수 있을 것으로 사료된다.
- 。특히 열수추출물군의 증가 정도가 유의적인 것으로 나타났다. 반면 민들레 분획 별추줄물군 모두 식 이 효율에는, 유의적인 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
- 혈청 중 킬로미크론, VLDL-콜레스테롤 농도는 민들레추출물 급여 시 유의적으로 감소되었는데 열수 추출물과 에 틸아세 테 이 트추출물군의 감소정도가 큰 것으로 관찰되었다. 반면, HDL-콜레스테롤 농도는 열수추출물과 에틸아세테이트추출물 급여시 유의적인 증가를 나타내었다.
- 체중증가량과 식이 섭취량은 대조군에 비하여 열수추출물군에서 유의적으로 증가되 었으며 식 이효율의 유의적인 차이는 관찰되 지 않았다. 혈청과 간조직 중의 중성지질, 총콜레스테롤과 콜레스테릴에스테르 농도는 대조군에 비하여 민들레추출물 급여시 유의적으로 감소되 었으며, 특히 에틸아세테이트추출물군의 간조직 중의 중성지질, 유리콜레스테롤 및 총콜레스테롤의 감소효과가 현저 한 것으로 나타났다. 반면, 혈청 인지질 농도는 민들레추출물 급여시 유의적 인증가를 나타내었으며 간조직에서는 유의적이지는 않으나 증가되는 경향이었다.
- 혈청의 인지질 농도는 대조군에 비하여 민들레 분 획별 추출물 모두 유의적인 증가를 나타내었다. 인지질은 지단백질의 구성요소일 뿐만 아니라 지질의 운반에 관여함으로써 합성 또는 공급 장애시 지방간의 원인이 되는데(22, 23), 혈중의 인지질 농도저하는 지방간 진행 요인으로 보고(24)되어 있다.
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