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- b)Inhibition percent (%)=[ 1 -(sample POV/control POV)] xlOO GTC means green tea catechins, POV means peroxide value.
- b)Inhibition percent (%)=[1-(sample MDA/control MDA)] x 100 GTC means green tea catechins, MDA means malondialdehyde.
제안 방법
- - 흰쥐 군을 5마리로 하여 두 군은 5일간 GTC를 saline에 녹여서 10㎎/㎏, 50 m&kg씩 경구 투여하였고, 두 군은 검액 대신 saline을 투여 하였다. 투여 마지막 날 미리 6시간 절식시키고 com oil에 용해시킨 CC1, 를 4ml/kg씩 경구 투여하였다.
- Cytochrome c의 환원을 50% 억제하는 양을 SOD의 1 unit로 정의하였다. Control의 OD/min를 50% 만큼 억제하는 양으로 실험에서는 SOD역가 (specific activity = mg당 unit)를 구하였다.
- SOD의 활성 측정은 Fridovich261 방법에 준해서 측정했다. Xanthine/xanthine oxidase반응~으_로 생성된 superoxide anion에 의해 cytochrome c가 환원되는 것을 측정하는데, SOD에 의해 superoxide anion의 양이 감소하여 cytochrome c의 변화 속도가 감소하는 현상을 이용하여 SOD성을 측정하였다. Cytochrome c의 환원을 50% 억제하는 양을 SOD의 1 unit로 정의하였다.
- 투여 마지막 날 미리 6시간 절식시키고 com oil에 용해시킨 CC1, 를 4ml/kg씩 경구 투여하였다. 검액은 투여하지 않고 Cd, 만 투여하여 양성 대조군으로 하였고, CC14 및 검액을 투여하지 않고 com oil만 투여하여 정상 대조군으로 하였다.
- 따라서, 본 연구에서는 녹차카테킨(GTC)의 항산화 활성을 시험하기 위해 in vitro에서 superoxide dismutase(SOD) 활성과 지질과산화물 생성 저해효과를 측정하였고, 생체내에서 항산화 활성을 시험하기 위해 GTC를 rat에 경구 투여하고 사염화탄소로 지질과산화를 유도시킨 후 microsome 분획을 얻어서 SOD활성과 catalase활성 그리고 지질과산화 저해효과를 측정하였다.
- < 기질로 하여 HQ?를 소모하는 속도를 측정하여 이 간 microsome의 catalase activity 를 측정하였다.31,32) 30% hydrogen peroxide 30μI를 0.
- 20 분간 원심분리하여 균질화되지 않은 조직, 절편 및 미토콘드 리아를 제거하였다. 상징액을 100,000xg로 1시간 원심분리한 후 침강한 pellet을 균질화용액에 현탁시키고 100,000xg 로 다시 한번 원심분리하여 침강한 pellet을 microsome 분 획으로 분취하였다. 조제한 microsome 분획은 Biuret 방법28)에 준하여 단백질을 정량하고 -70℃에서 냉동 보관하여 사용하였다.
- 생체내에서의 항산화작용, 즉 SOD 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, GTC를 rat에 5일간 경구투여한 후 간 microsome 분획에 존재하는 SOD 활성에 미치는 실험결과를 Fig. 1에 나타냈다. CC14 투여로 간 SOD 활성은 정상 대조군에 비해 50% 감소하였으나, GTC 10㎎/㎏ 투여군에 서는 CC14 투여군에 비해서 37% 증가했으며, 50㎎/㎏ 투 여군에서는 유의성 있게 62%의 증가를 나타냈다.
- 그리고, 예로부터 flavonoid와 tannin류 성분을 가지고 있는 식물들은 동맥경화와 뇌졸중 등의 성인병과 노화방지를 위해 건강식품이나 생약등으로 사용되어 왔는데, 이것은 flavonoid류 및 tannin류 성분의 항산 화 작용에 기인한다고 생각되어진다. 이것이 그 식물과 생약의 유효한 효과 중의 하나로 작용하는 것으로 생각되기에 녹차에서 카테킨 성분을 분리하이 항산화 효과를 연구하였다.
- - 흰쥐 군을 5마리로 하여 두 군은 5일간 GTC를 saline에 녹여서 10㎎/㎏, 50 m&kg씩 경구 투여하였고, 두 군은 검액 대신 saline을 투여 하였다. 투여 마지막 날 미리 6시간 절식시키고 com oil에 용해시킨 CC1, 를 4ml/kg씩 경구 투여하였다. 검액은 투여하지 않고 Cd, 만 투여하여 양성 대조군으로 하였고, CC14 및 검액을 투여하지 않고 com oil만 투여하여 정상 대조군으로 하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 Sprague-Dawley(SD) rat는 삼육동물에서 분양받아 2주 이상 실험 사육장 환경에 적응시킨 후 사용하였다. SD rat는 몸무게 200-220 g의 female, 8주령 되는 것을 사용하였고, 사료는 삼양유지의 마우스용 pellet사료 를 주었으며, 물은 자유롭게 먹게 하고, 12h/12h(L/D) cycle의 조건에서 실험하였다. 시약은 Sigma Chemical사로부터 공급받아 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 Sprague-Dawley(SD) rat는 삼육동물에서 분양받아 2주 이상 실험 사육장 환경에 적응시킨 후 사용하였다. SD rat는 몸무게 200-220 g의 female, 8주령 되는 것을 사용하였고, 사료는 삼양유지의 마우스용 pellet사료 를 주었으며, 물은 자유롭게 먹게 하고, 12h/12h(L/D) cycle의 조건에서 실험하였다.
- SD rat는 몸무게 200-220 g의 female, 8주령 되는 것을 사용하였고, 사료는 삼양유지의 마우스용 pellet사료 를 주었으며, 물은 자유롭게 먹게 하고, 12h/12h(L/D) cycle의 조건에서 실험하였다. 시약은 Sigma Chemical사로부터 공급받아 사용하였다.
이론/모형
- SOD의 활성 측정은 Fridovich261 방법에 준해서 측정했다. Xanthine/xanthine oxidase반응~으_로 생성된 superoxide anion에 의해 cytochrome c가 환원되는 것을 측정하는데, SOD에 의해 superoxide anion의 양이 감소하여 cytochrome c의 변화 속도가 감소하는 현상을 이용하여 SOD성을 측정하였다.
- 본 실험에서의 결과치의 유의성은 Student's t-test 법으로 검정호}였다.
- 시료의 지질 과산화물 생성 억제 효과를 linoleic acid를 기질로 사용하여 Nose27)의 방법으로 POV를 측정했다. Linoleic acid(L-1876) 100 μl와 각 시료(5mg/ml) 5 μl를 1.
- 상징액을 100,000xg로 1시간 원심분리한 후 침강한 pellet을 균질화용액에 현탁시키고 100,000xg 로 다시 한번 원심분리하여 침강한 pellet을 microsome 분 획으로 분취하였다. 조제한 microsome 분획은 Biuret 방법28)에 준하여 단백질을 정량하고 -70℃에서 냉동 보관하여 사용하였다.
성능/효과
- 21-24) 또한 녹차의 음용이 화학 물질 및 자외선 등에 의한 암 발생을 억제하며 이는 주로 녹차의 항산화 활성에 기인한다고 보고되어 있다.& 따라서 항산화 효능이 있는 녹차를 이용하여 활성산소를 제거하여 체내 항산화 시스템을 보호하고 나아가 산화적 손상을 억제 할 수 있을 것으로 생각된다. 그리고, 예로부터 flavonoid와 tannin류 성분을 가지고 있는 식물들은 동맥경화와 뇌졸중 등의 성인병과 노화방지를 위해 건강식품이나 생약등으로 사용되어 왔는데, 이것은 flavonoid류 및 tannin류 성분의 항산 화 작용에 기인한다고 생각되어진다.
- 3에 나타냈다. CC14 투여군의 경우 간 과산화치 (MDA)가 정상 대조군에 비해 2.1 배의 증가를 보였으나, GTC lO㎎/㎏ 투여군에서는 CC14 투여군에 비해서 32% 감소했으며, 50㎎/㎏ 투여군에 서는 52%의 감소가 나타났고 유의성이 있었다.
- 1에 나타냈다. CC14 투여로 간 SOD 활성은 정상 대조군에 비해 50% 감소하였으나, GTC 10㎎/㎏ 투여군에 서는 CC14 투여군에 비해서 37% 증가했으며, 50㎎/㎏ 투 여군에서는 유의성 있게 62%의 증가를 나타냈다. 또한, GTC를 rat에 5일간 경구투여한 후 간 microsome 분획에 존재하는 catalase 활성에 미치는 영향을 Fig.
- 2에 나타냈다. CC14 투여로 간 catalase 활성은 정상 대조군에 비해 55% 감소하였으나, GTC 10㎎/㎏ 투여 군에서 는 CC14 투여군에 비해서 40% 증가했으며, 50㎎/㎏ 투여군에서는 75%의 증가를 나타내었고 유의성이 있었다. 그리고, GTC를 rat에 5일간 경구 투여한 후 간 microsome 분획의 지질과산화의 지표인 MDA의 생성에 미치는 영향을 Fig.
- Cytorchrome c 방법을 이용하여 생물에서 대사중 발생하는 유해산소 중의 하나인 superoxide를 화학적으로 소거할 수 있는 능력을 가진 superoxide dismutase(SOD) 활성을 측정한 결과 Table 1에서 보는 바와 같다. GTC의 SOD 활성은 15, 727 unit/g으로서 양성 대조 항산화물질인 quercetin 보다는 낮으나 Rooibos tea보다는 높은 활성을 나타냈다. GTC의 linoleic acid의 과산화물 생성 억제 활성 실험 결과는 Table 2와 같다.
- GTC의 linoleic acid의 과산화물 생성 억제 활성 실험 결과는 Table 2와 같다. GTC의 linoleic acid 기질에 대한 과산 화물 생성 억제 효과는 92.5%로서, 양성 대조 항산화물질인 BHT(89.8%)와 quercetin(83.6%) 보다 높은 억제 효과가 나타났다. 세포하 수준에서의 항 지질과산화 활성을 알아보기 위해서, 간 microsome 분획을 지질원으로 사용하여 GTC의 비효소적 지질과산화 억제활성을 검정한 결과는 Table 3에서 보는 바와 갇다.
- 세포하 수준에서의 항 지질과산화 활성을 알아보기 위해서, 간 microsome 분획을 지질원으로 사용하여 GTC의 비효소적 지질과산화 억제활성을 검정한 결과는 Table 3에서 보는 바와 갇다. GTC의 경우 83.8% 억제효과를 나타냄으로써 양성 대조 항산화물질인 BHT(89.8%)와 비슷하게 비효소적 지질과산화 반응을 효과적으로 억제하고 있는 것으로 나타났다.
- 그리고, GTC를 실험동물에 투여하였을 때 CC%에 의해 억제되었던 SOD와 catalase의 활성이 유의성 있게 회복됨을 관찰할 수 있었으며 과산화지질의 생성은 대조군 수준으로 억제되었다. CC1, 는 체내에서 대사되어 활성화 형태인 친전 자 화합물인 free radicalfCCl, .
- 본 실험 결과 GTC는 항산화 작용과 연관된 과산화지질 생성 억제 효과가 강하게 나타났다. 또한 GTC는 과산화물 생성 억제효과와 rat의 간 microsome의 지질과산히- 억제효과를 가지는데, 강력한 항산회르을 가진 quercetin과 BHT의 효과와 비슷한 억제력을 보였다. 항산화 작용과 관련하여 SOD 효과와 과산화물 생성 억제효과와 rat 간 microsome의 지질과산화 억제효과로 볼 때, GTC가 항산화 작용 및 세포막을 보-호해줄 것으로 사료되나, 이러한 작용이 어떠한 기전에 의해서 일어나는지에 관해서는 더욱 구체적인 연구가 이 루어져야 할 것이다.
- 본 실험 결과 GTC는 항산화 작용과 연관된 과산화지질 생성 억제 효과가 강하게 나타났다. 또한 GTC는 과산화물 생성 억제효과와 rat의 간 microsome의 지질과산히- 억제효과를 가지는데, 강력한 항산회르을 가진 quercetin과 BHT의 효과와 비슷한 억제력을 보였다.
- 이상의 결과들을 요약하면, GTC는 in vitro에서 SOD 활성을 높이면서 지질과산화와 peroxide 생성을 억제시켰고, rat에 경구 투여시에도 지질과산화를 억제시키고 SOD와 catalase 활성을 유의성 있게 억제시켰다. 따라서 본 GTC의 이러한 항산화 활성은 녹차의 노화 방지 작용과 암을 비롯한 긱종 성인병의 예방 효과와 관련성이 높을 것으로 사료 된다.
후속연구
- 또한 GTC는 과산화물 생성 억제효과와 rat의 간 microsome의 지질과산히- 억제효과를 가지는데, 강력한 항산회르을 가진 quercetin과 BHT의 효과와 비슷한 억제력을 보였다. 항산화 작용과 관련하여 SOD 효과와 과산화물 생성 억제효과와 rat 간 microsome의 지질과산화 억제효과로 볼 때, GTC가 항산화 작용 및 세포막을 보-호해줄 것으로 사료되나, 이러한 작용이 어떠한 기전에 의해서 일어나는지에 관해서는 더욱 구체적인 연구가 이 루어져야 할 것이다.
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