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문제 정의
- 본 조사는 2001년도 1월부터 12월 사이에 서울시 관내 2개 도축장에 출하된 소, 돼지 도체표면의 미생물 오염지표미생물(일반세균 및 대장균)과 주요 식중독 원인균을 검사하여 위생적이고 안전한 축산물을 소비자에게 공급하여 시민 보건위생향상 및 식육의 안전성 확보에 기여하고자 본 조사를 실시하였다.
- 이에 축산물의 안전성 확보를 위하여 비조리시에 발생할 수 있는 각종 병원균으로부터 오염을 방지하고 도축장의 위생상태나 작업과정을 모니터링하기 위한 검사가 필요하며, 가축의 도살해체과정 및 발골 과정은 다단계이기때문에 도체 및 식육에의 오염은 방혈 단계에서 방혈칼에 의하여 오염된 후 혈관을 통하여오염이 확산되거나 박피단계와 내장파열에 의한 내용물 및 분뇨의 유출에 의한 오염이 가장 크므로 각종 식중독의 원인균을 도축과정에서부터 차단하는데 의의가 있다.
제안 방법
- 1.monocytogenes는 Fraser broth 에 접종하여 37℃에서 18~24시간 증균배양 및 4℃에서 1주일간 cold enrichment하여 PALCAM 배지에 접종하여 48시간 배양한 후, 특이적인 집락을 선택하여 그람염색, 용혈성 검사 및 CAMP test, catalase test, API Listeria kit(BioMerieux, France) 및 O 항원에 대한 혈청 학적 실험을 실시하였으며, miniVIDAS(BioMerieux, France)를 이용하여 L monocytogenes 양성임을 확인하였다.
- 미생물 시험법에 준하여 실시하였다. E coll O157:H7의 분리를 위해서 mEC broth(novobiocin 20“g/mL)에 접종하여 37℃에서 18~24시간 증균배양한 후 CT-SMAC 배지 및 Fluorocult 0157 medium (Merck, Germany) 에 접종하여 sorbitol 비분흐H 집락과 초록색의 MUG 비분해 집락을 선택하여 MacConkey agar에서 lactose 분해능을 검사하였다. 그외 확인 실험으로 Latex test kit (Oxoid, England) 검사 및 생화학 검사로 TSI 배지 및 miniAPI 32E kit(BioMerieux, France) 를 사용하였으며, 최종적으로。및 H 항원에 대한 혈청학적 검사를 실시하였다.
- S a成eus는 10% NaCl 이 포함된 TSB에서 37℃ 에 18~24시간 증균배양시킨 후 baird parker medium(w/egg yolk tellurite) 및 mannitol salt medium(w/egg yolk)에서 37℃ 에 18~24시간 배양하여 집락주위에 opaque region이 있는 검은색 집락 및 난황 반응을 보이는 mannitol 분해집락을 선택하여 그람염색, 용혈성 검사, Latex test kit(Oxoid, England), coagulase test 및 DNase test를 실시하였다.
- 배양하였다. TSC배지에서 lecithinase 양성반응을 보이며 H2S를 생성한 집락을 선택하여 그람염색을 실시하였다. 그람양성 간균의 형태를 확인한 후 용혈성, lactose 분해능이 있고 젤라틴 액화 반응을 보이는 균을 Cl perfringens로 동정하였으며 miniAPI system (BioMerieux, France)으로 확인하여 최종 동정하였다.
- TSC배지에서 lecithinase 양성반응을 보이며 H2S를 생성한 집락을 선택하여 그람염색을 실시하였다. 그람양성 간균의 형태를 확인한 후 용혈성, lactose 분해능이 있고 젤라틴 액화 반응을 보이는 균을 Cl perfringens로 동정하였으며 miniAPI system (BioMerieux, France)으로 확인하여 최종 동정하였다.
- 일반세균수는 표준평판배양법 (Aerobic Plate Count) 으로 표준한천평판배지에 시료를 혼합 응고시켜 배양 후 형성한 세균의 집락수를 계수하여 시료중의 생균수를 산출하였다. 대장균(Generic E coli) 수는최확수법(3개 또는 5개 시험관을 이용한 MPN 법)으로 BGLB배지에서 가스산생 양성인 시험관으로부터 EC-MUG배지에 접종하여 44.5 ℃ 에서 24시간 배양한 후 자외선을 조사하여 푸른 형광이 관찰되는 시험관을 대장균 추정시험양성으로 판정하였다. 양성으로 판정된 시험관으로부터 EMB배지(또는 MacConkey agar) 에 이식하여 37℃에서 24시간 배양하여 전형적인집락을 관찰하고 그람염색, IMVIC 시험으로 최종 확정하고 최확수표에 근거하여 대장균수를 산출하였다.
- E coll O157:H7의 분리를 위해서 mEC broth(novobiocin 20“g/mL)에 접종하여 37℃에서 18~24시간 증균배양한 후 CT-SMAC 배지 및 Fluorocult 0157 medium (Merck, Germany) 에 접종하여 sorbitol 비분흐H 집락과 초록색의 MUG 비분해 집락을 선택하여 MacConkey agar에서 lactose 분해능을 검사하였다. 그외 확인 실험으로 Latex test kit (Oxoid, England) 검사 및 생화학 검사로 TSI 배지 및 miniAPI 32E kit(BioMerieux, France) 를 사용하였으며, 최종적으로。및 H 항원에 대한 혈청학적 검사를 실시하였다.
- 서울시 관내 2개 도축장에서 생산된 소 225 두와 돼지 215두 도체표면에 대하여 미생물 오염도 검사 및 소 630두, 돼지 625두의 도체 표면에 대해 병원성 미생물 오염을 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 5 ℃ 에서 24시간 배양한 후 자외선을 조사하여 푸른 형광이 관찰되는 시험관을 대장균 추정시험양성으로 판정하였다. 양성으로 판정된 시험관으로부터 EMB배지(또는 MacConkey agar) 에 이식하여 37℃에서 24시간 배양하여 전형적인집락을 관찰하고 그람염색, IMVIC 시험으로 최종 확정하고 최확수표에 근거하여 대장균수를 산출하였다.
- 미생물시험 법에 의하여 실시하였다. 일반세균수는 표준평판배양법 (Aerobic Plate Count) 으로 표준한천평판배지에 시료를 혼합 응고시켜 배양 후 형성한 세균의 집락수를 계수하여 시료중의 생균수를 산출하였다. 대장균(Generic E coli) 수는최확수법(3개 또는 5개 시험관을 이용한 MPN 법)으로 BGLB배지에서 가스산생 양성인 시험관으로부터 EC-MUG배지에 접종하여 44.
대상 데이터
- 도축후 멸균 거즈를 10m£ buffered peptone water(BPW) 희석액에 담근 후 멸균장갑을 끼고 lOOcnf용 시료채취틀(template) 을 사용하여 지육 표면 중 미생물 오염이 가장 많은 3개 부위에서 시료를 채취하였다. 소는 도축후 12시간 이상이 경과한 예냉 상태에서 시료를 채취하였으며, 돼지는 예냉과정을 거치지 않고 출고됨으로 작업후 바로 시료를 채취하였다.
- 시료를 채취하였다. 소는 도축후 12시간 이상이 경과한 예냉 상태에서 시료를 채취하였으며, 돼지는 예냉과정을 거치지 않고 출고됨으로 작업후 바로 시료를 채취하였다. 오염지표 세균인 일반세균수와 대장균수 및 Sal-mongla의 검사를 위하여는 소 225건, 돼지 215건을 검사하였으며, 식중독 원인균인 E coli O157:H7, S aureus 및 L monocytogenes, Cl perfringens 균 검사를 위하여 소 630건, 돼지 625건을 검사하였다.
- 오염지표 세균검사는 서울시 관내 2개 도축장에서 도축된 소 855두, 돼지 840두를 대상으로 하였다.
- 소는 도축후 12시간 이상이 경과한 예냉 상태에서 시료를 채취하였으며, 돼지는 예냉과정을 거치지 않고 출고됨으로 작업후 바로 시료를 채취하였다. 오염지표 세균인 일반세균수와 대장균수 및 Sal-mongla의 검사를 위하여는 소 225건, 돼지 215건을 검사하였으며, 식중독 원인균인 E coli O157:H7, S aureus 및 L monocytogenes, Cl perfringens 균 검사를 위하여 소 630건, 돼지 625건을 검사하였다.
이론/모형
- 26)중 축산물 시험방법, 9. 미생물 시험법에 준하여 실시하였다. E coll O157:H7의 분리를 위해서 mEC broth(novobiocin 20“g/mL)에 접종하여 37℃에서 18~24시간 증균배양한 후 CT-SMAC 배지 및 Fluorocult 0157 medium (Merck, Germany) 에 접종하여 sorbitol 비분흐H 집락과 초록색의 MUG 비분해 집락을 선택하여 MacConkey agar에서 lactose 분해능을 검사하였다.
- 축산물시험방법, 9. 미생물시험 법에 의하여 실시하였다. 일반세균수는 표준평판배양법 (Aerobic Plate Count) 으로 표준한천평판배지에 시료를 혼합 응고시켜 배양 후 형성한 세균의 집락수를 계수하여 시료중의 생균수를 산출하였다.
성능/효과
- 2. 돼지 도체표면의 일반세균수(cfu/c而는 1000이하 도체가 68.8%, 1, 001~10, 000의범위가 21.9%, 10, 001~100,000이 9.3%로서 농림부의 도축장 권장기준을 초과한 경우는 없었다.
- 3. 소 도체표면의 E coli 수(cfu/cuf)는 농림부권장기준 이하인 100 이하가 98.2%이며 권장기준 초과는 1.8%이었다.
- 4. 돼지 도체표면의 E coli 수(cfu/cnf)는 농림부 권장기준 이하인 10, 000 이하가 99.5% 이며 권장기준 초과는 0.5%이었다.
- 5. 병원성 미생물은 E coli O157:H7은 소 도체 표면에서 2건(0.32%), S aureus는 돼지 도체 표면에서 12건(1.9%), L monocytogenese 소 도체표면에서 1건(0.15%), 돼지도체표면에서 4건(0.64%)이 검출되었으며, Cl perfringens는 소 도체표면에서 14건(2.22%), 돼지 도체표면에서 11건 (1.76%)이 검출되었다.
- 돼지의 도체표면의 대장균 수는 1~10의 범위가 46.5%, 11~100 범위가 38.6%, 101 -1, 000 의 범위가 13.9%, 1001~10, 000의 범위가 0.5% 로 조사되었으며, 농림부 도축장 검사권장기준인 l, 000cfu를 초과한 경우는 한여름인 9월 중 l, 100cfu 대장균이 1건(0.5%)이 검출되었다 (Table 4).
- 본 실험에서는 소 630두, 돼지 625두의 도체표면에서 E coli O157:H7, L monocytogenes, S aureus, Cl peifringens의 오염 검사 결과, E coli O157:H7은 2건, S aureus는 12건, Cl petfringens는 25건이 검출되었다. 분리된 S aureus에 대해 enterotoxin 생산여부를 검사한결과 12개의 분리주 중 3개 균주에서 enterotoxin이 검출되었다.
- 본 실험의 결과 일반 세균수는 excellent 등급에 속하는 도체가 소는 72%, 돼지는 68.8% 이며 goode 소는 17.3% 돼지는 21.9%이며, acceptablee 소는 10.2% 돼지는 9.3%로 나타났다. 이는 excellent의 경우 미국 24.
- 11 건이 검출되었다. 분리된 S aureus에 대해 enterotoxin 생산여부를 검사한 결과 12건 중 3개 균주에서 enterotoxin이 검출되었다(Table 5).
- 25건이 검출되었다. 분리된 S aureus에 대해 enterotoxin 생산여부를 검사한결과 12개의 분리주 중 3개 균주에서 enterotoxin이 검출되었다.
- 서울시내 도축장에서 도축한 돼지 215두를 대상으로 오염지표 미생물을 검사한 결과 1, 000 이하인 excellent에 속하는 토체가 68.8%, 1, 001-10, 000에 속하는 good이 21.9%, 10, 001-100, 000 에 속하는 acceptable이 9.3%이 며 100, 001이 상인 undesirablee 없는 것으로 나타났다(Table 2).
- 서울시내 도축장에서 도축한 소 225두를 대상으로 오염지표 미생물을 검사한 결과 일반세균수에 의하여 도축의 등급을 매기는 선진국의기준과 비교하면 Table 1과 같이 1, 000이하인 excellent에 속하는 도체가 72%, 1, 001-10, 000 에 속하는 good이 17.8%, 10, 001~100,000에 속하는 acceptable이 10.2%이며, 100, 001이상인 undesirablee 없는 것으로 나타났다(Table 1).
- 소 630두, 돼지 625두의 도체표면에서 E coli O157:H7, L monocytogenes, S aureus, Cl perfringens를 검사한 결과, 소에서는 E coli O157:H7은 2건, L monocytogenese 1 건, Cl perfringens 14건이 검출되었으며, 돼지에서는 L monocytogenes 가 4건, S aureus 는 12 건, Cl perfringens는 11 건이 검출되었다. 분리된 S aureus에 대해 enterotoxin 생산여부를 검사한 결과 12건 중 3개 균주에서 enterotoxin이 검출되었다(Table 5).
- 소의 도체표면의 대장균 수는 1~10의 범위가 73.3%, 11~100 범위가 249%로 조사되었으며, 농림부 도축장 검사권장기준인 lOOcfu를 초과한 경우는 8월, 9월, 10월에 4건으로 1.8%로 나타났고 그 중 2건은 l, 000cfu를 초과하였다 (Table 3).
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