해당화 뿌리의 추출물 모두 0.5g/L 이하의 농도로 투여 시는 정상세포 생존율을 80%이상으로 유지시켜 시료자체에 의한 독성은 나타나지 않으며, 각 추출물의 암세포에 대한 생육억제활성은 0.1 mg/ml의 낮은 농도에서도 비교적 $40{\sim}60%$의 높은 억제율을 나타내었다. 추출물들은 0.5mg/ml 이상의 농도에서 MCF7에 대하여 66%이상, A549에 대하여서는 70%이상의 생육억제활성을 나타내었다. Hep3B에 대하여서는 에탄을 추출물은 78%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었으며, AGS에 대하여 물 추출물이 약 68%정도의 암세포 생육억제활성을 나타내었다 각 추출물의 selectivity에 있어서 각 추출물이 0.1mg/ml에서 1.0mg/ml의 농도에서 4이상의 수치를 나타내어 해당화 뿌리 추출물들이 암세포를 선택적으로 사멸하는 기작을 지닌 것을 확인하였다. 또한 암세포와 정상세포의 시간에 따른 산화 정도를 Microphysiometer를 이용하여 측정한 결과 시료 투여 후 점차적으로 산화도가 빠르게 증가하는 것을 확인하였다. 각 시료들의 면역세포생육 증진 기능은 0.5 mg/ml 이상의 농도에서 B세포의 생장을 $1.2{\sim}1.3$배 이상 증가시켰으며, T세포의 경우 $1.2{\sim}1.5$배 이상의 생장율의 증가를 나타내었다 에탄올 추출물이 물 추출물들에 비하여 높은 면역세포의 생육증진활성을 나타냄을 확인하였고, cytokine의 생성측정정도를 측정한 결과, IL-6는 에탄을 추출물이 배양 6일째 0.5mg/ml의 농도에서 최고 61.3 pg/ml의 분비량을 나타내었으며, $TNF-{\alpha}$도 에탄올 추출물이 배양 6일째 최고 61.9 pg/ml의 분비량을 나타내었다. acridine orange와 ethidium bromide로 형광염색하여 인간 면역 T cell에 대한세포 사멸형태를 측정한 결과 배양 4일째부터 15% 이상의 세포들이 자가 사멸 형태로 사멸함을 확인할 수 있었다.
해당화 뿌리의 추출물 모두 0.5g/L 이하의 농도로 투여 시는 정상세포 생존율을 80%이상으로 유지시켜 시료자체에 의한 독성은 나타나지 않으며, 각 추출물의 암세포에 대한 생육억제활성은 0.1 mg/ml의 낮은 농도에서도 비교적 $40{\sim}60%$의 높은 억제율을 나타내었다. 추출물들은 0.5mg/ml 이상의 농도에서 MCF7에 대하여 66%이상, A549에 대하여서는 70%이상의 생육억제활성을 나타내었다. Hep3B에 대하여서는 에탄을 추출물은 78%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었으며, AGS에 대하여 물 추출물이 약 68%정도의 암세포 생육억제활성을 나타내었다 각 추출물의 selectivity에 있어서 각 추출물이 0.1mg/ml에서 1.0mg/ml의 농도에서 4이상의 수치를 나타내어 해당화 뿌리 추출물들이 암세포를 선택적으로 사멸하는 기작을 지닌 것을 확인하였다. 또한 암세포와 정상세포의 시간에 따른 산화 정도를 Microphysiometer를 이용하여 측정한 결과 시료 투여 후 점차적으로 산화도가 빠르게 증가하는 것을 확인하였다. 각 시료들의 면역세포생육 증진 기능은 0.5 mg/ml 이상의 농도에서 B세포의 생장을 $1.2{\sim}1.3$배 이상 증가시켰으며, T세포의 경우 $1.2{\sim}1.5$배 이상의 생장율의 증가를 나타내었다 에탄올 추출물이 물 추출물들에 비하여 높은 면역세포의 생육증진활성을 나타냄을 확인하였고, cytokine의 생성측정정도를 측정한 결과, IL-6는 에탄을 추출물이 배양 6일째 0.5mg/ml의 농도에서 최고 61.3 pg/ml의 분비량을 나타내었으며, $TNF-{\alpha}$도 에탄올 추출물이 배양 6일째 최고 61.9 pg/ml의 분비량을 나타내었다. acridine orange와 ethidium bromide로 형광염색하여 인간 면역 T cell에 대한세포 사멸형태를 측정한 결과 배양 4일째부터 15% 이상의 세포들이 자가 사멸 형태로 사멸함을 확인할 수 있었다.
The biological activities of extracts from Rosa rugosae Radix were compared. About 78% of the growth of human hepato- carcinoma and 68% of human gastric cancer cell was inhibited in adding 0.5 mg/ml of the extracts of Rosa rugosae Radix respectively. The growth of human breast cancer cells was also ...
The biological activities of extracts from Rosa rugosae Radix were compared. About 78% of the growth of human hepato- carcinoma and 68% of human gastric cancer cell was inhibited in adding 0.5 mg/ml of the extracts of Rosa rugosae Radix respectively. The growth of human breast cancer cells was also inhibited in adding 0.5 mg/ml of the extracts as well as 66% of the human cancer cells. It was proved that the growth of human normal lung cell, scored as 20% for the extracts. Overall selectivity of the extracts on several human cancer cell line was over 4, which is higher than those from the Rosa rugosae Radix. The growth of both human immune B and T cells was enhanced up to 1.2 to 1.5 times by adding the extracts, compared to the controls. The secretion of tumor necrosis factor-alpha$(TNF-{\alpha})$ from T cell was also increased up to 61.9 pg/ml in adding the ethanol extract (0.5 mg/ml). Ethanol extract also increased up to about 61.3 pg/ml of interleukin-6(IL-6) from B cell.
The biological activities of extracts from Rosa rugosae Radix were compared. About 78% of the growth of human hepato- carcinoma and 68% of human gastric cancer cell was inhibited in adding 0.5 mg/ml of the extracts of Rosa rugosae Radix respectively. The growth of human breast cancer cells was also inhibited in adding 0.5 mg/ml of the extracts as well as 66% of the human cancer cells. It was proved that the growth of human normal lung cell, scored as 20% for the extracts. Overall selectivity of the extracts on several human cancer cell line was over 4, which is higher than those from the Rosa rugosae Radix. The growth of both human immune B and T cells was enhanced up to 1.2 to 1.5 times by adding the extracts, compared to the controls. The secretion of tumor necrosis factor-alpha$(TNF-{\alpha})$ from T cell was also increased up to 61.9 pg/ml in adding the ethanol extract (0.5 mg/ml). Ethanol extract also increased up to about 61.3 pg/ml of interleukin-6(IL-6) from B cell.
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문제 정의
따라서, 본 연구에서는 해당화뿌리에 대하여 여러 암세포주에 생육억제 활성과 인간 면역 세포에 대한 활성증진 실험으로 배양 기간동안 세포 생육도의 증진과 cytokine의 분비를 측정하였다.
제안 방법
5mg/ml)들은 24시간이 지난 각각의 well에 첨가한 후 8일간 다시 incubation 된 cell을 hemacytometer로 세포 수를 즉정하였다. 그리고 추출물들을 처리하지 않은 대조구와 비교하여 세포의 생육과 세포 수에 따라 면역활성을 측정하였다. 또한 보다 명확한 면역활성 효과를 검증하기 위한 면역세포들이 배지 내에 분비하는 cytokine인 Tumor Necrosis Factor-a와 Interleukine-6의 양은 ELISA kit(Genzyme, USA)를 이용하여 측정되어졌다.
그리고 추출물들을 처리하지 않은 대조구와 비교하여 세포의 생육과 세포 수에 따라 면역활성을 측정하였다. 또한 보다 명확한 면역활성 효과를 검증하기 위한 면역세포들이 배지 내에 분비하는 cytokine인 Tumor Necrosis Factor-a와 Interleukine-6의 양은 ELISA kit(Genzyme, USA)를 이용하여 측정되어졌다. 배양액을 원심분리한 상등액을 다양한 농도의 표준물질들과 함께 37 ℃에서 30분간 배양 후 450nm에서 흡광도를 즉정하여 표준물질을 이용해 표준곡선을 작성하고 이에 시료에서 얻어진 O.
면역 기능 증강 효과는 인간 면역 세포인 T ceU(Jurkat)과 B cell(Raji)을 이용하여 검증하였다. 세포의 생육은 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 5% CO2, 37 ℃에서 배양하였으며, 면역 기능 증강 효과는 24well plate에 세포를 2.
또한 보다 명확한 면역활성 효과를 검증하기 위한 면역세포들이 배지 내에 분비하는 cytokine인 Tumor Necrosis Factor-a와 Interleukine-6의 양은 ELISA kit(Genzyme, USA)를 이용하여 측정되어졌다. 배양액을 원심분리한 상등액을 다양한 농도의 표준물질들과 함께 37 ℃에서 30분간 배양 후 450nm에서 흡광도를 즉정하여 표준물질을 이용해 표준곡선을 작성하고 이에 시료에서 얻어진 O.D 값을 비교하여 cytokine의 양을 측정하였다(오, 1991).
본 실험에 사용한 해당호KRosa rugoase Radix) 뿌리는 경동시장에서 국산으로 확인된 것을 구입하여 물로 깨끗이 세척 후 열풍 건조기를 이용하여 24시간 동안 열에 의한 성분의 변화 등을 막기 위해 32.5℃에서 건조시킨 후에 추출 수율의 향상을 위해 잘게 분쇄한 후 수직의 환류냉각기가 부착된 추출 flask에 시료 중량 100g 에 대하여 각각 10배의 증류수와 ethanol을 사용하여 100℃와 78℃에서 12시간 동안 2회 반복 추출하였다. 얻어진 각각의 추출물들은 감압 여과장치로 여과하여 농축·동결건조한 후 각각의 수율을 계산하여 실험에 사용하였다.
5℃에서 건조시킨 후에 추출 수율의 향상을 위해 잘게 분쇄한 후 수직의 환류냉각기가 부착된 추출 flask에 시료 중량 100g 에 대하여 각각 10배의 증류수와 ethanol을 사용하여 100℃와 78℃에서 12시간 동안 2회 반복 추출하였다. 얻어진 각각의 추출물들은 감압 여과장치로 여과하여 농축·동결건조한 후 각각의 수율을 계산하여 실험에 사용하였다.
염색시약은 Ca2+와 Mg2+이 없는 PBS에 acridine orange와 ethidium bromide를 각각 100yg/ml가 되도록 녹였다. 이 두 용액을 섞고 세포농도가 5×106 cells/ml가 되는 세포 현탁액 100μl에 염색시약 4μl를 첨가한후 형광 현미경으로 세포를 관찰하였다.
, 1997). 즉정조건은 Pump cyclee total cycle time이 2분으로 하여 최종 측정되는 시간은 30초 간격으로 하였다. Adherent celle 보통 실험 1일전, capsule에 옮겨 안정화시킨다.
대상 데이터
세포 배양에 사용된 기본배지는 HEL299, AGS, A549는 RPMI1640(GIBCO, USA)을 Hep3B, MCF7는 DMEM(GIBCO, USA)을 사용하여 FBS를 10% 첨가하여 배양하였다. 실험에 사용한 세포의 초기 농도는 4×104cells/ml의 농도로 조절하여 96well tissue culture microplate에 100μl/well)씩 접종하여 사용하였다.
실험에 사용된 암세포주는 인간 유래의 간암세포(Hep3B), 위암세포(AGS), 유방암 세포(MCF7), 폐암세포(A549), 정상세포로는 인간 폐세포(HEL299)를 이용하였다. 세포 배양에 사용된 기본배지는 HEL299, AGS, A549는 RPMI1640(GIBCO, USA)을 Hep3B, MCF7는 DMEM(GIBCO, USA)을 사용하여 FBS를 10% 첨가하여 배양하였다.
이론/모형
세포 사멸형태는 염색법을 이용하여 측정(Al-Rubei et al., 1995 ; Bharat et al., 1985)하였다. 염색시약은 Ca2+와 Mg2+이 없는 PBS에 acridine orange와 ethidium bromide를 각각 100yg/ml가 되도록 녹였다.
실험에 사용한 세포의 초기 농도는 4×104cells/ml의 농도로 조절하여 96well tissue culture microplate에 100μl/well)씩 접종하여 사용하였다. 암 세포의 생육 저해와 정상세포의 세포독성은 su]forhodamineB(SRB) 방법을 이용하였다(Doyle et al., 1993; Dool et al., 1981).
해당화 뿌리 에탄올 추출물의 세포에 대한 대사(산화)활성도의 영향을 즉정하기 위하여 Microphysiometer(Molecular Devices, USA)를 사용하였다(Juwferg et al., 1997). 즉정조건은 Pump cyclee total cycle time이 2분으로 하여 최종 측정되는 시간은 30초 간격으로 하였다.
성능/효과
5mg/ml이상의 농도에서 MCF7에 대하여 66%이상, A549에 대하여서는 70%이상의 생육억제활성을 나타내었다. Hep3B에 대하여서는 에탄올 추출물은 78%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었으며, AGS에 대하여 물 추출물이 약 68%정도의 암세포 생육억제활성을 나타내었다. 각 추출물의 selectivity에 있어서 각 추출물이 0.
9 pg/ml의 분비량을 나타내었다. acridine orange와 ethidium bromide로 형광염색하여 인간 면역 T cell에 대한 세포 사멸형태를 측정한 결과 배양 4일째부터 15% 이상의 세포들이 자가 사멸 형태로 사멸함을 확인할 수 있었다.
또한 암세포와 정상세포의 시간에 따른 산화 정도를 Microphysiometer를 이용하여 측정한 결과 시료 투여 후 점차적으로 산화도가 빠르게 증가하는 것을 확인하였다. 각 시료들의 면역세포생육 증진 기능은 0.5 mg/ml 이상의 농도에서 B세포의 생장을 1.2~1.3배 이상 증가시켰으며, T 세포의 경우 1.2~1.5배 이상의 생장율의 증가를 나타내었다. 에탄올 추출물이 물 추출물들에 비하여 높은 면역세포의 생육 증진활성을 나타냄을 확인하였고, cytokine의 생성측정 정도를 측정한 결과, IL-6는 에탄올 추출물이 배양 6일째 0.
Hep3B에 대하여서는 에탄올 추출물은 78%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었으며, AGS에 대하여 물 추출물이 약 68%정도의 암세포 생육억제활성을 나타내었다. 각 추출물의 selectivity에 있어서 각 추출물이 0.1mg/ml에서 L0mg/ml의 농도에서 4이상의 수치를 나타내어 해당화 뿌리 추출물들이 암세포를 선택적으로 사멸하는 기작을 지닌 것을 확인하였다. 또한 암세포와 정상세포의 시간에 따른 산화 정도를 Microphysiometer를 이용하여 측정한 결과 시료 투여 후 점차적으로 산화도가 빠르게 증가하는 것을 확인하였다.
해당화 뿌리 에탄올 추출물 모두 시료 투여 후 세포의 산화가 서서히 나타남을 확인할 수 있었으며, 암세포의 경우 정상세포에 비하여 산화도의 증가가 점차 급격해 지는 것을 확인할 수 있었다. 간암세포의 경우 같은 농도에서 시료 투여 48시간 후 약 78.8%정도의 생육저해를 나타내고 있는데, 산화도의 양상으로 미루어 세포가 약물에 대한 반응이 빠르게 나타남을 알 수 있었다.
5mg/ml의 농도 이상에서 76%이상의 생육억제활성을 나타내었다. 간암세포주인 Hep3B에 대하여서는 증류수 추출물은 0.5mg/ml이상의 농도에서 약 55%정도, 에탄올 추출물들은 78%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타헜으며, 위암세포주인 AGS에 대하여 증류수 추출물들은 0.5mg/ml이상의 농도에서 약 68%정도, 에탄올 추출물들은 62%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었다. 또한 각 추출물의 정상세포독성에 대한 암세포의 억제율을 나타내기 위하여 같은 농도에서의 정상세포 사멸도에 대한 암세포 사멸도의 비를 나타내는 selectivity에 있어서 각 추출물이 0.
5mg/ml이상의 농도에서 약 68%정도, 에탄올 추출물들은 62%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었다. 또한 각 추출물의 정상세포독성에 대한 암세포의 억제율을 나타내기 위하여 같은 농도에서의 정상세포 사멸도에 대한 암세포 사멸도의 비를 나타내는 selectivity에 있어서 각 추출물이 0.1mg/m에서 1.0mg/ml의 농도에서 4.5이상의 수치를 나타내어 해당화 뿌리 추출물들은 암세포를 선택적으로 사멸하는 기작을 지닌 것을 확인하였다.
1mg/ml에서 L0mg/ml의 농도에서 4이상의 수치를 나타내어 해당화 뿌리 추출물들이 암세포를 선택적으로 사멸하는 기작을 지닌 것을 확인하였다. 또한 암세포와 정상세포의 시간에 따른 산화 정도를 Microphysiometer를 이용하여 측정한 결과 시료 투여 후 점차적으로 산화도가 빠르게 증가하는 것을 확인하였다. 각 시료들의 면역세포생육 증진 기능은 0.
9 pg/ml의 분비량을 나타내었다. 또한 해당화 뿌리 추출물의 인간 면역 T cell에 대한 세포 사멸형태를 acridine orange와 ethidium bromide로 형광 염색하여 측정한 결과, Fig. 7에 나타낸 바와 같이 배양 4일째부터 15% 이상의 세포들이 자가 사멸 형태로 사멸함을 확인할 수 있었다.
5배 이상의 생장율의 증가를 나타내었다. 에탄올 추출물이 물 추출물들에 비하여 높은 면역세포의 생육 증진활성을 나타냄을 확인하였고, cytokine의 생성측정 정도를 측정한 결과, IL-6는 에탄올 추출물이 배양 6일째 0.5mg/ml의 농도에서 최고 61.3 pg/ml의 분비량을 나타내었으며, TNF-a도 에탄올 추출물이 배양 6일째 최고 61.9 pg/ml의 분비량을 나타내었다. acridine orange와 ethidium bromide로 형광염색하여 인간 면역 T cell에 대한 세포 사멸형태를 측정한 결과 배양 4일째부터 15% 이상의 세포들이 자가 사멸 형태로 사멸함을 확인할 수 있었다.
5와 6에 나타내었다. 증류수 추출물과 에탄올 추출물의 면역세포생육증진 기능은 Fig. 5에 나타난 바와 같이 0.5 mg/ml 이상의 농도에서 B세포의 생장을 1.2~1.3배 이상 증가시켰으며, 단일클론 항체의 생성 등에 관여하는 cytokine인 IL-6는 에탄올 추출물이 배양 6일째 0.5mg/ml의 농도에서 최고 61.3 pg/ml의 분비량을 나타내었다. Fig.
1 mg/ml의 낮은 농도에서도 비교적 40~60%의 높은 억제율을 나타내었다. 추출물들은 0.5mg/ml이상의 농도에서 MCF7에 대하여 66%이상, A549에 대하여서는 70%이상의 생육억제활성을 나타내었다. Hep3B에 대하여서는 에탄올 추출물은 78%이상의 높은 암세포 생육억제활성을 나타내었으며, AGS에 대하여 물 추출물이 약 68%정도의 암세포 생육억제활성을 나타내었다.
4에 나타내었다. 해당화 뿌리 에탄올 추출물 모두 시료 투여 후 세포의 산화가 서서히 나타남을 확인할 수 있었으며, 암세포의 경우 정상세포에 비하여 산화도의 증가가 점차 급격해 지는 것을 확인할 수 있었다. 간암세포의 경우 같은 농도에서 시료 투여 48시간 후 약 78.
1 mg/ml의 낮은 농도에서도 비교적 40~50%의 높은 억제율을 나타내었다. 해당화 뿌리의 증류수 및 에탄올 추출물 모두 0.5mg/ml이상의 농도에서 유방암 세포주인 MCF7에 대하여 65%이상, 폐암세포주인 A549에 대하여서는 모든 추출물 0.5mg/ml의 농도 이상에서 76%이상의 생육억제활성을 나타내었다. 간암세포주인 Hep3B에 대하여서는 증류수 추출물은 0.
해당화 뿌리의 추출물 모두 0.5g/L 이하의 농도로 투여시는 정상세포 생존율을 80%이상으로 유지시켜 시료자체에 의한 독성은 나타나지 않으며, 각 추출물의 암세포에 대한 생육억제활성은 0.1 mg/ml의 낮은 농도에서도 비교적 40~60%의 높은 억제율을 나타내었다. 추출물들은 0.
참고문헌 (21)
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