[논문]RAW264.7 대식세포에서 괭생이 모자반 추출물의 면역활성 증진 효과

김동섭; 성낙윤; 박상윤; 김건; 엄지; 유진곤; 서인라; 한인준; 조용백; 김경아

doi:10.4163/jnh.2018.51.6.507

RAW264.7 대식세포에서 괭생이 모자반 추출물의 면역활성 증진 효과
Immunomodulating activity of Sargassum horneri extracts in RAW264.7 macrophages 원문보기

Journal of nutrition and health, v.51 no.6, 2018년, pp.507 - 514

김동섭 (한국프라임제약(주)) , 성낙윤 (한국프라임제약(주)) , 박상윤 (한국프라임제약(주)) , 김건 (한국프라임제약(주)) , 엄지 (한국프라임제약(주)) , 유진곤 (한국프라임제약(주)) , 서인라 (한국프라임제약(주)) , 한인준 (한국프라임제약(주)) , 조용백 (한국프라임제약(주)) , 김경아 (충남대학교 식품영양학과)

초록
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본 연구에서는 모자반목 모자반과 갈조류인 괭생이 모자반의 3가지 서로 다른 추출물의 면역활성 가능성을 비교연구하기 위하여 RWA264.7 대식세포에 서로 다른 괭생이 모자반 추출물을 처리하여 $TNF-{\alpha}$, IL-6 및 NO 분비능과 MAPK 신호전달경로 및 $NF-{\kappa}B$ 활성화 수준을 측정하였다. 괭생이 모자반 열수추출물, 주정추출물, 그리고 초임계추출물 중 괭생이 모자반 열수추출물이 세포독성은 없는 농도 ($50{\mu}g/mL$)에서 $TNF-{\alpha}$, IL-6의 생성뿐 아니라 iNOS 활성화를 통한 NO 분비를 촉진하였다. 이러한 괭생이 모자반 열수추출물의 면역증진 효과는 MAPK 신호전달경로 및 $NF-{\kappa}B$ 활성화를 통해 이루어지고 있음을 확인하였다. 본 연구결과는 괭생이 모자반 열수추출물의 면역활성 증진 가능성을 제시하여 향후 대식세포의 활성 유도를 통한 면역증진 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이다.

Abstract ▼ AI-Helper

Purpose: Sargassum horneri (S. horneri) is a species of brown macroalgae that is common along the coast of Japan and Korea. The present study investigated the immuno-modulatory effects of different types of S. horneri extracts in RAW264.7 macrophages. Methods: S. horneri was extracted by three different methods, hot water extraction, 50% ethanol extraction, and supercritical fluid extraction. Cell viability was then measured by MTT assay, while the production levels of tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$), interleukin-6 (IL-6), and nitric oxide (NO) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay and Griess assay, respectively. The expression and activation levels of inducible NO synthase (iNOS), mitogen-activated protein kinase (MAPK) and nuclear factor ${\kappa}B$ ($NF-{\kappa}B$) were examined by western blot analysis. Results: The three different S. horneri extracts were nontoxic against RAW 264.7 cells up to $50{\mu}g/mL$, among which treatment with hot water extract (HWE) of S. horneri significantly enhanced the production of TNF-${\alpha}$, IL-6, and NO in a dose-dependent manner. Hot water extract of S. horneri also increased the expression level of iNOS, suggesting that up-regulation of iNOS expression by HWE of S. horneri was responsible for the induction of NO production. In addition, treatment of RAW 264.7 macrophages with HWE of S. horneri increased the phosphorylation levels of ERK, p38 and JNK. Furthermore, the activation and subsequent nuclear translocation of $NF-{\kappa}B$ was enhanced upon treatment with HWE of S. horneri, indicating that HWE of S. horneri activates macrophages to secrete TNF-${\alpha}$, IL-6 and NO and induces iNOS expression via activation of the $NF-{\kappa}B$ and MAPKs signaling pathways. Conclusion: Taken together, these findings suggest that HWE of S. horneri possesses potential as a functional food with immunomodulatory activity.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

17 본 연구에서는 LPS를 처리한 군과 비교하여 LPS를 처리하지 않은 RAW264.7세포에 괭생이 모자반 추출물을 처리할 때 선천성 면역을 활성화시킬 정도의 사이토카인 생성에 미치는 효과를 조사하기 위하여 다양한 사이토카인들 중 TNF-α 와 IL-6의 생성 정도를 관찰하였다.
^10,15,16한편 괭생이 모자반 주정추출물의 경우 높은 농도 (200 μg/mL)에서 항염증 효과를 가지는 것으로 보고되었다.³¹ 그러나 괭생이 모자반 추출물의 면역증진 효능에 대한 연구는 현재까지 보고된 바가 없으며 본 연구에서 괭생이 모자반 추출물 중 열수추출물의 면역활성 증진 가능성을 처음 제시하였다. 향후 괭생이 모자반 열수추출물의 면역증진 활성이 추출물 내 어떠한 성분에 의한 것인지 규명하기 위하여 분리 및 정제과정을 통하여 추가적인 성분분석 연구가 필요할 것으로 사료된다.
이러한 괭생이 모자반 열수추출물의 면역증진 효과는 MAPK 신호전달경로 및 NF-κB 활성화를 통해 이루어지고 있음을 확인하였다. 본 연구결과는 괭생이 모자반 열수추출물의 면역활성 증진 가능성을 제시하여 향후 대식세포의 활성 유도를 통한 면역증진 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이다.
본 연구에서는 RWA264.7 대식세포에 괭생이 모자반의 열수추출물, 주정추출물, 초임계추출물을 처리하여 이들이 세포생존, 사이토카인 및 NO 생성에 미치는 영향을 비교하는 한편 mitogen-activated protein kinases (MAPKs)신호전달경로 및 nuclear factor kappa B (NF-κB) 활성화 등에 미치는 영향을 관찰함으로써 이들의 면역증강활성 및 분자적 작용기전을 규명하고, 면역증강 소재로서의 개발 가능성을 알아보고자 하였다.
본 연구에서는 모자반목 모자반과 갈조류인 괭생이 모자반의 3가지 서로 다른 추출물의 면역활성 가능성을 비교연구하기 위하여 RWA264.7 대식세포에 서로 다른 괭생이 모자반 추출물을 처리하여 TNF-α, IL-6 및 NO 분비능과 MAPK 신호전달경로 및 NF-κB 활성화 수준을 측정하였다.

제안 방법

5, 25 및 50 μg/mL의 농도로 처리하였고, 양성대조군인 LPS 또한 200 ng/mL 농도로 처리하였다. 30분후 세포를 수집하여 PBS로 3회 세척한 다음,NE-PERTM Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagentskit (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA)를 사용하여 세포질과 핵 내의 단백질을 순차적으로 분리하였다. 분리된단백질은 BCA protein detection kit (Thermo Scientific Inc.
48 well plate에 RAW 264.7 cell을 5 × 104 cell/well로 분주한 후, 37°C, 5% CO2 incubator에 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, PBS에 희석된 HWE, EE,및 SFE 추출물을 각각 1.5625, 3.125, 6.25, 12.5, 25 및 50μg/mL의 농도로 처리하였고, 양성대조군인 lipopolysaccharide (LPS; Sigma-Aldrich) 또한 1 μg/mL 농도로 처리하여 24시간 동안 배양한 후, 배양 상등액을 분리하였다.
48 well plate에 RAW 264.7 cell을 5 × 104 cell/well로 분주한 후, PBS에 희석된 HWE, EE, 및 SFE 추출물을 각각3.125, 6.25, 12.5, 25 및 50 μg/mL의 농도로 처리 하였고,양성대조군인 LPS 또한 1 μg/mL 농도로 처리하여 24시간동안 배양한 후, 배양 상등액을 분리하였다.
MTT 시약의 첨가로 생긴 formazan을 녹이기 위해서 DMSO (Sigma-Aldrich)를 100 μL씩 첨가하고, 1시간 후 micro-plate reader (Epoch, BioTek, Winooski,VT, USA)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, Control (medium only)의 흡광도 값을 기준으로 세포생존율을 비교하였다.
분리된 배양 상등액 100 μL에 동량의 Griess (SigmaAldrich) 시약을 처리하여 10분 동안 암실에서 반응시킨 후,micro-plate reader를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. NO의 농도는 sodium nitrite (NaNO₂, Sigma-Aldrich)를 사용하여 얻은 표준 직선과 비교하여 산출하였다.
RAW 264.7 대식세포를 6 well plate에 1 × 106 cell/well로 분주하여 12시간 동안 완전히 부착시키고, PBS에 희석된 HWE 추출물을 12.5, 25 및 50 μg/mL의 농도로 처리하였고, 양성대조군인 LPS 또한 200 ng/mL 농도로 처리하였다.
괭생이 모자반 열수추출물, 주정추출물, 그리고 초임계추출물 중 괭생이 모자반 열수추출물이 세포독성은 없는 농도 (50 μg/mL)에서 TNF-α, IL-6의 생성뿐만 아니라 iNOS 활성화를 통한 NO 분비를 촉진하였다.
괭생이 모자반 열수추출물은 55 μm의 백필터 (bagfilter) 여과 후 원심박막농축기 (evaporator, CEP-LABO,Okawahara, Japan)를 이용하여 고형분 함량 20%brix가 되도록 농축하였고, 분무건조 (spray dryer, HKC-100-DJ,Niro, Denmark)한 것을 괭생이 모자반 열수추출물 (HWE)로 사용하였다.
괭생이 모자반 열수추출물을 얻기 위하여 수분함량이 10%이하로 1차 가공된 괭생이 모자반 원물을 100 mm 수준으로 분쇄한 다음 시료 1 kg에 원물대비 30배에 상당한정제수 30 L를 가하여 온도 90°C에서 4시간 동안 추출하였다.
괭생이 모자반 추출물 처리가 대식세포 활성화에 미치는 영향을 평가하기 위하여 RAW264.7 세포에 3가지 서로 다른 추출물을 처리한 후 세포 상등액에서 NO의 생성 및 NO생성에 관여하는 INOS 발현 정도를 각각 Griess반응법과Western blotting으로 조사하였다. 양성대조군인 LPS를 처리 시 NO 분비능이 크게 증가하는 것을 관찰할 수 있었다 (Fig.
괭생이 모자반 추출물의 세포독성 여부를 평가하기 위하여 RAW264.7 대식세포에 3가지 서로 다른 추출물: 열수추출물 (HWE), 주정추출물 (EE), 초임계추출물 (SFE)을 각각 농도 별로 처리하여 24시간 배양한 후 MTT assay를 수행하였다 (Fig. 1). 괭생이 모자반 추출물을 처리하지 않고 배양한 음성 대조군 (CON)의 세포생존율 100%와 비교하였을 때 괭생이 모자반 추출물을 처리한 경우 50 μg/mL 농도까지 생존율에 변화가 없거나 (SFE) 증가하는 것으로 나타나 (HWE, EE) RAW264.
괭생이 모자반의 주정 추출물을 얻기 위하여 50% 발효주정을 용매로 하여, 시료 1 kg에 용매 20 L를 가하여 4시간 동안 침지시켰다. 침지 후 55 μm의 백필터 (bag filter)여과 후 회전식 감압농축기 (evaporator, HS-20SP, HahnshinS&T, Kim-po, Korea)를 이용, 80°C에서 농축물의 부피가 3L가 될 때까지 감압 농축한 후, 영하 80°C 이하에 동결건조 (freeze dryer, OPR-FDT-8650, Operon, Gyeonggi, Korea)하여 괭생이 모자반 주정 추출물 (EE)로 사용하였다.
3 L/min의 유량으로 설정하였다. 발효주정 주입 완료 후 120분 동안 이산화탄소만을 공급하여 400 bar의 등압 유지하여 총 4시간 30분 동안의 초임계추출 공정을 통해 괭생이 모자반 초임계 추출물을 수득하였다. 이후 회전식 감압농축기 (evaporator, HS-20SP,Hahnshin S&T, Korea)를 이용, 50°C에서 발효주정이 함유된 괭생이 모자반 초임계 추출물을 완전 농축하여 최종 괭생이 모자반 초임계 추출물 (SFE)로 사용하였다.
5, 25 및 50 μg/mL의 농도로 처리 하였고,양성대조군인 LPS 또한 1 μg/mL 농도로 처리하여 24시간동안 배양한 후, 배양 상등액을 분리하였다. 분리된 배양상등액 내 사이토카인 함량은 ELISA kit (eBioscience Co.,San Diege, CA, USA)을 사용하여 측정하였으며, 이때 사이토카인의 농도는 kit에 포함되어 있는 표준용액으로부터 산출된 표준곡선으로부터 계산되었다.
분리된단백질은 BCA protein detection kit (Thermo Scientific Inc. USA)을 사용하여 단백질 정량을 실시하였으며, well당 20μg 의 cell lysate를 10% polyacrylamide gel에 각각 loading하여 SDS-PAGE로 변성 분리하였다.
상기 건조된 괭생이 모자반 원물 60 kg을 2 mm의 입자크기로 분쇄한 후,400 bar의 압력과 50°C의 온도로 설정하고 추출 보조용매로서 발효주정을 투입하였다.
이러한 결과로 미루어 3가지 괭생이 모자반 추출물 중 열수추출물의 처리가 세포독성 없이 다른 추출물에 비해 TNF-α 와 IL-6의 생성을 증가시키는 한편 iNOS 발현을 통하여 NO생성을 촉진함으로써 면역활성에 기여하는 것으로 사료되며 이후 실험은 괭생이 모자반 열수추출물을 이용하여 수행하였다.
5)로10분씩 3회 세척하였으며, phosphate(p)-p38, p38, ERK,p-ERK, JNK, p-JNK, IκB, 및 NF-κB의 발현량을 측정하기 위해 1차 항체 (Cell signaling Technology, Danvers, MN,USA)를 1:1,000으로 희석하여 4°C에서 overnight 시키고, TBST로 10분간 3회 세척하였다. 이후 2차 항체 (abcam,Cambridge, UK)를 1:5,000으로 희석하여 2시간 동안 반응시키고, TBST로 10분간 5회 세척하였으며, electrochemil-uminescence (ECL; Millipore Merck KGaA) reagent를 이용 하고, LAS-4000 (GE Healthcare Life Sciences, Marlborough, MA, USA) 이미지 장치를 이용하여 분석하였다.
이후 TBST (20nM tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.05% Tween-20, pH 7.5)로10분씩 3회 세척하였으며, phosphate(p)-p38, p38, ERK,p-ERK, JNK, p-JNK, IκB, 및 NF-κB의 발현량을 측정하기 위해 1차 항체 (Cell signaling Technology, Danvers, MN,USA)를 1:1,000으로 희석하여 4°C에서 overnight 시키고, TBST로 10분간 3회 세척하였다.
이후 회전식 감압농축기 (evaporator, HS-20SP,Hahnshin S&T, Korea)를 이용, 50°C에서 발효주정이 함유된 괭생이 모자반 초임계 추출물을 완전 농축하여 최종 괭생이 모자반 초임계 추출물 (SFE)로 사용하였다.
추출방법 별 괭생이 모자반 추출물의 처리에 따른 대식세포의 세포 생존율을 평가하기 위하여, RAW 264.7 cell을 96 well plate에 3 × 104 cell/well 의 농도로 분주한 후37°C, 5% incubator에서 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 괭생이 모자반 추출물 (HWE, EE, 및SFE)을 각각 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma Aldrich,St Louis, MO)에 100 mg/mL의 농도로 용해하여 phosphatebuffered saline (PBS; Welgene, Namcheon, Gyeongsan,Korea)에 희석하여 12.5, 25 및 50 μg/mL의 농도로 24시간동안 처리 하였다.
침지 후 55 μm의 백필터 (bag filter)여과 후 회전식 감압농축기 (evaporator, HS-20SP, HahnshinS&T, Kim-po, Korea)를 이용, 80°C에서 농축물의 부피가 3L가 될 때까지 감압 농축한 후, 영하 80°C 이하에 동결건조 (freeze dryer, OPR-FDT-8650, Operon, Gyeonggi, Korea)하여 괭생이 모자반 주정 추출물 (EE)로 사용하였다.

대상 데이터

괭생이 모자반 초임계 추출물을 얻기 위하여, 용매는 이산화탄소로서 임계압력 73.76 bar과 임계온도 30.95°C 이상으로 액체와 기체의 확산계수와 점도, 밀도와 같은 물리화학적 특성을 모두 갖춘 초임계 이산화탄소 (supercriticalcarbon dioxide, Sc-CO2)를 사용하였고 보조용매는 발효주정 (fermentation ethanol)을 사용하였다.
단백질 분석을 위하여 본 실험에 사용된 JNK, phosphate(p)-JNK, actin 항체는 Santa Cruz Biotechnology Inc. (SantaCruz, CA, USA)에서 구입하여 사용하였고, iNOS 항체는 abcam (Cambridge, UK)에서 구입하여 사용하였고, p-p38,p38, ERK, p-ERK, IκB, NF-κB(p65), 및 β-actin 항체는 Cell Signaling Technology (Beverly, Ma, USA)에서 구입하여 사용하였다.
본 연구에 사용한 괭생이 모자반은 전라남도 완도 일대에서 수거한 후 정수를 이용하여 침지 세척 및 자숙의 탈염과정을 거친 후 건조하여 수분함량이 10% 이하로 1차 가공된 건조 원물을 상온 보관하면서 본 실험에 추출용 시료로 사용하였다.
한국세포주은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 RAW264.7 마우스 대식세포를 분양 받아 100 unit/mL 의 penicillin 및streptomycin, 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco BRL,Grand Island, NY, USA)가 첨가된 Dulbecco's ModifiedEagle's Medium (DMEM; Gibco BRL, Grand Island, NY,USA) 배지를 사용하여 37°C, 5% CO2 조건하에서 배양하였다.

데이터처리

Statistical analysis was performed using Student's two tails t-test with a significant level of * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001, compared to control (CON) group.
Statistical analysis was performed using Student's two tails t-test with a significant level of * p < 0.05, and ** p < 0.01 compared to control (CON) group.
Statistical analysis was performed using Student's two tails t-test with a significant level of ** p < 0.01, and *** p < 0.001, compared to control (CON) group.
각 실험군의 분석 항목별 통계적 유의성은 Student's two tailed t-test 로 * p < 0.05, **p < 0.01 및 ***p < 0.001 수준에서 비교하였다.
실험 결과는 Statistical Package for the Social Sciences 141 (SPSS, 10.0, IBM, Chicago, IL, USA) 통계 프로그램을 이용하여 평균 (mean) ± 표준편차 (SD)로 나타냈다.

이론/모형

18,19이에 괭생이 모자반 열수추출물에 의한 면역 활성화 효과의 분자적 기전을 조사하기 위하여 MAPKs 신호전달경로의 활성과 괭생이 모자반 열수추출물 처리와의 연관성을western blotting으로 관찰하였다. 괭생이 모자반 열수추출물을 처리한 경우 LPS 처리군과 유사하거나 그 이상의 수준으로 p38, ERK1/2, JNK의 인산화 정도가 농도의존적으로 증가하였다 (Fig.

성능/효과

30본 연구에서는 괭생이 모자반 열수추출물에 의한 MAPKs 신호전달경로 단백질의 인산화 증가와 NF-κB의 p65 단백질의 핵 내부로의 전이유도를 확인할 수 있었으며 (Fig. 4)이러한 결과는 대식세포에서 괭생이 모자반 열수추출물에 의한 TNF-α, IL-6, NO 분비능 증가의 분자적 기전이 MAPKs 신호전달경로와 NF-κB를 활성화임을 의미한다.
괭생이 모자반 추출물을 처리하지 않고 배양한 음성 대조군 (CON)의 세포생존율 100%와 비교하였을 때 괭생이 모자반 추출물을 처리한 경우 50 μg/mL 농도까지 생존율에 변화가 없거나 (SFE) 증가하는 것으로 나타나 (HWE, EE) RAW264.7 대식세포에 대한 괭생이 모자반 추출물의 세포독성은 없는 것으로 나타났다.
한편, 괭생이 모자반 열수추출물을 처리할 경우 농도의존적으로 NO의 발생이 증가하였으나 주정추출물과 초임계추출물 처리 시 NO의 발생을 관찰할 수 없었다. 또한 괭생이 모자반 열수추출물 처리 시 iNOS 발현이 증가함을 보였고 이러한 결과는 괭생이 모자반 열수추출물이 iNOS 발현을 통하여 NO생성을 촉진하였음을 의미한다 (Fig. 3B). 이러한 결과로 미루어 3가지 괭생이 모자반 추출물 중 열수추출물의 처리가 세포독성 없이 다른 추출물에 비해 TNF-α 와 IL-6의 생성을 증가시키는 한편 iNOS 발현을 통하여 NO생성을 촉진함으로써 면역활성에 기여하는 것으로 사료되며 이후 실험은 괭생이 모자반 열수추출물을 이용하여 수행하였다.
또한 대식세포가 분비하는 사이토카인은 NF-κB 활성화에 의해서도 발현되므로 괭생이 모자반 열수추출물처리에 따른 NF-κB 단백질 발현 정도를 핵 내 단백질 fraction 및 세포질 내 단백질 fraction으로 각각 분류하여 알아본 결과 핵 내 단백질 fraction에서 NF-κB의 p65 단백질 발현은 괭생이 모자반 열수추출물 처리농도에 의존적으로 증가된 반면, 세포질 내 단백질 fraction에서의 IκB 단백질 발현은 감소되는 것을 관찰하였다(Fig. 4B).
본 연구에서 확인하였듯이 RAW264.7 대식세포에서 3가지 서로 다른 추출법에 따른 괭생이 모자반 추출물은 각기 다른 생리활성을 보였으며 그 중 열수추출물을 처리할 경우 TNF-α와 IL-1β 의 분비뿐만 아니라 iNOS 발현을 통한 NO 분비능이 다른 추출물에 비해 현저히 증가되는 것을 관찰할 수 있었다 (Fig. 2와 3).
7 세포에 3가지 서로 다른 추출물을 처리한 후 세포 상등액에서 NO의 생성 및 NO생성에 관여하는 INOS 발현 정도를 각각 Griess반응법과Western blotting으로 조사하였다. 양성대조군인 LPS를 처리 시 NO 분비능이 크게 증가하는 것을 관찰할 수 있었다 (Fig. 3A). 한편, 괭생이 모자반 열수추출물을 처리할 경우 농도의존적으로 NO의 발생이 증가하였으나 주정추출물과 초임계추출물 처리 시 NO의 발생을 관찰할 수 없었다.
괭생이 모자반 열수추출물, 주정추출물, 그리고 초임계추출물 중 괭생이 모자반 열수추출물이 세포독성은 없는 농도 (50 μg/mL)에서 TNF-α, IL-6의 생성뿐만 아니라 iNOS 활성화를 통한 NO 분비를 촉진하였다. 이러한 괭생이 모자반 열수추출물의 면역증진 효과는 MAPK 신호전달경로 및 NF-κB 활성화를 통해 이루어지고 있음을 확인하였다. 본 연구결과는 괭생이 모자반 열수추출물의 면역활성 증진 가능성을 제시하여 향후 대식세포의 활성 유도를 통한 면역증진 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이다.
한편, 괭생이 모자반 추출물을 농도 별 (3.125, 6.25, 12.5, 25, 및 50 μg/mL)로 처리 시 열수추출물의 경우 대조군에 비해 TNF-α 와 IL-6의 생성이 유의성 있게 증가하여 50 μg/mL 농도의 경우 LPS처리군과 비슷한 수준을 보였으며 주정추출물의 경우 TNF-α의 생성은 농도의존적으로 증가하였고 IL-6의 생성은 50 μg/mL 농도에서 유의성 있게 증가하였다.

후속연구

³¹ 그러나 괭생이 모자반 추출물의 면역증진 효능에 대한 연구는 현재까지 보고된 바가 없으며 본 연구에서 괭생이 모자반 추출물 중 열수추출물의 면역활성 증진 가능성을 처음 제시하였다. 향후 괭생이 모자반 열수추출물의 면역증진 활성이 추출물 내 어떠한 성분에 의한 것인지 규명하기 위하여 분리 및 정제과정을 통하여 추가적인 성분분석 연구가 필요할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	면역이란?	면역이란 외부 인자에 대한 생체의 방어 수단으로 인체의 면역계는 단핵구 (monocyte), 호중구 (neutrophile) 및포식세포 (phagocyte) 등과 같은 다양한 면역세포들간의 상호작용에 의하여 그 체계가 유지된다. 이들 중 대식세포(macrophage)는 외부 항원을 포식하고, 면역 조절인자인nitric oxide (NO)와 tumor necrosis factor-α (TNF-α),Interleukin-1β (IL-1β), IL-6 와 같은 염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)을 분비하여 자신의 포식작용을 증가시키거나 자연살해세포, 수지상세포 등의 선천면역의 활성을 유도하는 한편 외부 항원을 인식한 후 T 세포에 전달하여 세포의 활성화와 분화를 조절함으로써 적응면역의 활성에도 기여하는 것으로 알려져 있다.
	사이토카인은 무엇으로 보고되어 있는가?	대식세포는 감염원을 인식하는 초기의 면역세포로서 인체의 비특이적 방어체계인 내재면역뿐만 아니라 특이적 방어체계인 적응면역 등 다양한 숙주 반응에 관여하여 숙주방어와 항상성 유지에 관여하는 것으로 알려져 있다. 활성화된 대식세포에서 분비되는 대표적인 국소 단백질인 TNF-α, IL-1β 및 IL-6 등과 같은 사이토카인은 세포의 성장 및 분화, 염증뿐만 아니라 면역반응 등의 역할을 담당하는 것으로 보고되어 있다. 특히 TNF-α는 미성숙 면역세포의 표면에 단백질 혹은 보조자극인자의 발현을 촉진하여 성숙된 형태의 세포로 전환시켜 암세포의 세포 용해를 유도함으로써 직접적으로 항암 작용을 나타내기도 하며또한 항원에 오염된 세포의 살해능력을 증진시켜 초기 면역반응에 중요한 역할을 한다.
	괭생이 모자반 추출물에 대한 선행연구에 의하면 괭생이 모자반 추출물이 특히 골대사에 동화작용을 하는 것으로 보고되었는데 이 중 Yamaguchi의 연구가 보고한 것은 무엇인가?	괭생이 모자반 추출물에 대한 선행연구에 의하면 괭생이 모자반 추출물이 특히 골대사에 동화작용을 하는 것으로 보고되어 있다. Yamaguchi의 연구에 의하면 괭생이 모자반 열수추출물은 in vivo와 in vitro에서 모두 골격의 칼슘보유 증가를 통해 골다공증 방지 기능이 있는 것으로 보고되어 있다.14 또한 괭생이 모자반 열수추출물은 항산화및 대장세포 등에서 항암효과를 가지며 특히 추출물 내 푸칸 설페이트 (fucan sulfate) 가 헤르페스 바이러스 복제에 대한 억제효과를 가지고 있음이 보고되었다.10,15,16 한편 괭생이 모자반 주정추출물의 경우 높은 농도 (200 μg/mL)에서 항염증 효과를 가지는 것으로 보고되었다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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