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제안 방법
- 이용하여 측정하였다. HPLC 분석에는 hypersil ODS column(150x4.6 mm, 5 11m pore size, Supelco Inc.)°| 사용되 었고 acetonitrile : 0.1% phosphoric acid = 65: 35(v/ v)로 한 용액을 이동상으로 하였으며 1 mL/min의 유속으로 10 UL를 투여 시 238 nm(Jasco UV-975 detector, Tokyo, Japan)에서 측정하였다. Monacolin K 함량은 표준물질을 같은 조건에서 작성한 검 량선으로부터 산출하여 홍국 100 g당 g으로 나타내었다.
- Monaccilin K 함량은 HPLC(Jasco PU-987 pump, Tokyo, Japan)를 이용하여 측정하였다. HPLC 분석에는 hypersil ODS column(150x4.
- Monacolin K의 열에 의한 안정성을 알아보기 위해 홍국 80% ethanol 추출물을 10, 20, 40, 60, 80℃에서 일정 기간 동안 저 장하면서 monacolin K를 측정한 결과는 Fig. 1과 같다. 10℃에서 저장한 경우 4주 후에도 2.
- 그리고 동일하게 홍국 80% ethanol 혼합물을 조제 하고 3 N HC1 을 가해 pH 2 (소비 량: 45.0 UL/10 mL)와 pH 4(10.5 uL/10 mL) 로, 3 N NaOH를 가해 pH 8(20.5 uL/10 mL)과 pH 10(50.0 UL/10 mL)으로 조정 한 후, monacolin K를 추출하고 상등액을 취하여 실온에서 5일간 저장하였다. 또한 동일하게 홍국 80% ethanol 혼합물을 조제 하고 acetic acid, citric acid, lactic acid를 각각 6%, 0.
- 5% lactic acid를 첨가) 및 수분량(0~80%)을 조절하여 저장하면서 monacolin K 함량을 측정하였다. 그리고 중성 aluminum oxide를 이용하여 open column chromatography■> 행하여 홍국으로부터 monacolin K를 분리하였다. 그 결과, monacolin K는 40℃ 이상의 온도에서 상당히 불안정 하여 분해 되었다.
- 0 UL/10 mL)으로 조정 한 후, monacolin K를 추출하고 상등액을 취하여 실온에서 5일간 저장하였다. 또한 동일하게 홍국 80% ethanol 혼합물을 조제 하고 acetic acid, citric acid, lactic acid를 각각 6%, 0.6%, 1.5%가 되도록 첨가해 pH 4.0으로 조정한 후, monacolin K를 추출하고 상등액을 취하여 실온에서 5일간 저장하였다. 마지막으로 홍국 분말 1 g에 99.
- 0으로 조정한 후, monacolin K를 추출하고 상등액을 취하여 실온에서 5일간 저장하였다. 마지막으로 홍국 분말 1 g에 99.9% ethanol 9 mL를 가해 동일하게 monacolin K를 추출하고 이의 상등액 에 증류수를 첨가해 수분함량이 0, 20, 40, 60, 80% 가 되도록 조제한 후 20℃에서 4주간 저장하였다.
- 그러나 monacolin K에 관해서 는 임상효과(11-13), 측정조건(14T6), 생성경로(9), monacolin K 생산 균주의 탐색(17, 18) 등에 관해서는 연구되었으나, 이의 안정성이나 정제에 관해서는 아직 보고된 예가 없다. 이에 본 연구에서는 가열, pH, 유기산 및 수용액 중에서의 monacolin K의 안정 성을 알아보았고 홍국으로부터 monacolin K 를 정제하였다.
- 이 있다. 이에 열(20, 40, 60, 80℃), pH(2, 4, 8, 10), 유기산 (pH 4.0으로 조정 하기 위해 6% acetic acid, 0.6% citric acid, 1.5% lactic acid를 첨가) 및 수분량(0~80%)을 조절하여 저장하면서 monacolin K 함량을 측정하였다. 그리고 중성 aluminum oxide를 이용하여 open column chromatography■> 행하여 홍국으로부터 monacolin K를 분리하였다.
- 홍국 분말 1 g에 80% ethanol 9 mL를 가해 1분간 흔들어 monacolir K를 추출한 후 상등액을 10℃의 저온실과 20℃의 실온에서 0주간, 40℃의 항온기 에서 5일간, 60℃의 항온기 에서 24시간, 80℃의 항온기에서 12시간 저장하였다. 그리고 동일하게 홍국 80% ethanol 혼합물을 조제 하고 3 N HC1 을 가해 pH 2 (소비 량: 45.
- 34는 한국식 품개발연구원에서 보관중인 것을 사용하였다. 홍국균은 PDA(po- tato dextrose agar: Difco) 배지를 사용하여 30℃에서 4일간 균체를 배 양한 후, 배지 중량의 10%에 상당하는 멸균수를 배지에 첨가하고 분쇄하여 백미(일야 수침하여 탈수한 후 스테인레스 체 에 담아 120℃에서 20분간 증자하였다)에 5%가 되도록 접종하였다. 다음 1.
- 홍국으로부터의 monacolin K의 분리는 중성 aluminum oxide(Sigma Co.) 수지 를 사용하여 open column chromatog- raphy를 행하여 분리 하였다. Columne 2x30 cm의 크기로 수지 용량은 60 mL가 되도록 하였으며, 용리 액은 80% eth- anol을 사용하여 수지 에 6 mL(홍국 분말 1 g에 80% ethanol 9 mL을 가해 1분간 흔들어 추출한 혼합물의 상등액)을 loading하여 5 ml/5! 분획하고 각 분획물의 monacolin K의 함량은 분획물 ImL당 Ug으로 나타내었으며 색도는 510 nm 에서의 흡광도(Hewlett Packard spectrophotometer, model 8753, Germany)로 나타내었다.
대상 데이터
- 백미는 시중(경기도, 성남) 재래시장에서 구입하여 사용하였다. Monacolin K 추출용 ethanol과 증류수는 HPLC분석용 (Fisher Co.
- , USA)을 사용하였다. 표준품 monacolin K(일명, mevinolin)는 Sigma사로부터 구입하여 사용하였다.
- 홍국균 Monascus purpureus CBS 281.34는 한국식 품개발연구원에서 보관중인 것을 사용하였다. 홍국균은 PDA(po- tato dextrose agar: Difco) 배지를 사용하여 30℃에서 4일간 균체를 배 양한 후, 배지 중량의 10%에 상당하는 멸균수를 배지에 첨가하고 분쇄하여 백미(일야 수침하여 탈수한 후 스테인레스 체 에 담아 120℃에서 20분간 증자하였다)에 5%가 되도록 접종하였다.
데이터처리
- 실험결과는 2차례의 평균값을 구하여 mean± standard deviation—나타내었다.
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