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문제 정의
- 따라서, 저자 등은 방사선 손상에 대한 조직 방어와 면역 조혈계의 회복촉진 효과를 동시에 나타내는 새로운 생약조 합을 도출하고자 하였다. 또한, 손상된 생체에 적용하기 쉽 도록 독성이 거의 없는 원재료를 사용하기 위해 식품공전 상 에 식품의 주원료 혹은 부원료로 등재된 식물소재를 대상으로 하였다.
- 방사선 생 체손상의 방어 및 회 복에 높은 효과를 나타내는 생약조합을 도출하고자 하였다. 이전의 연구에서 6가지 기존 보기 .
- 본 연구에서는 상기한6가지 한약처방제의 방사선 방어효 과 연구결과를 바탕으로 방사선 장해를 효과적으로 극복할 수 있는 새로운 생약복합물을 개발하고자 하였다. 본 연구자 등은 방사선 생 체손상의 방어 및 회복을 위해서는 일차적으 로 조직 의 방어 뿐만 아니라 이 차적 으로 재 생 조직 특히 면 역 조혈계의 회복 촉진이 필수적이라고 생각하였다.
- 본 연구자 등은 방사선 생 체손상의 방어 및 회복을 위해서는 일차적으 로 조직 의 방어 뿐만 아니라 이 차적 으로 재 생 조직 특히 면 역 조혈계의 회복 촉진이 필수적이라고 생각하였다. 이상의 여러가지 측면을 고려하여, 방사선 조사 동물모델에서 재생조 직 방어, 조혈계 방어, 면역조혈계 회복 증진 효과를 동시에 나타내는 새로운 생 약 조합을 도출함으로써 방사선 장해로 부터 생체를 방호하고 회복시킬 수 있는 생약복합물을 개발 하고자 하였다.
- 따라서 방사선방호제 연구에 있어서 이들 각각의 손상기작에 대한 종합적 검토가 필요하다. 이에 본 연구자 등은 한약처 방이 각기 다른 효과를 가지는 여러가지 생 약으로 구성된 복합제 이 므로 그의 방사선 방어 효과가 기 대 되어, 이들복합제 및 그구성 생약의 방사선 방어효과를검색 하였다. 즉, 한의학에서 보기 .
- 또한, 손상된 생체에 적용하기 쉽 도록 독성이 거의 없는 원재료를 사용하기 위해 식품공전 상 에 식품의 주원료 혹은 부원료로 등재된 식물소재를 대상으로 하였다. 특히, 선행연구에서의 구성 생약 각각의 조직 방 어효과를 비교검토하고, 한편으로 각 단일 생약의 면역세포 활성화 효과를 검색한 결과를 바탕으로 각 지표 항목 모두에서 높은 효과를 나타내는 생약복합물을 도출하고자 하였다. 즉, 당귀, 천궁, 백작약을 동일 무게 비율로 혼합하여 열수 추출한 것을 HIM-I으로 명명하고 그 효과를 관찰하였다.
제안 방법
- DPPH radical 소거 활성 : 항산화 효과를 알아보기 위해서 시료가 라디칼 분자에 전자를 공여하는 능력(electron donating ability)을 DPPH(l, l-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radical을 이용하여 측정하였다. 반응은 시료 10 11L, 0.
- 생쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사시 킨 후 6시간에 생쥐를 희 생 시 켜 소장(공장) 부위를 채 취 하여 Camoy 고정 액에 고정하고, 각 마우스당 8~10개의 소장편 을 통상적 방법에 따라 파라핀 포매하여 절편을 제작하였다. Hematoxylin-eosin 염 색 및 DNA fragments 측정 을 위하여 in situ apoptosis detection kit( APOPT AG™, Oncor, Gaithersburg, MD, USA)를 사용하여 in situ DNA end- labelling(ISEL)을 실시하였다. 간단히 기술하면, 표본슬라 이드에 terminal deoxynucleotidyl transferase를 첨가함으 로써 fragmented DNA에 digoxigenin-nucleotides를 부착 시키고, anti-digoxigenin-peroxidase antibody를 면역 염 색 법 으로 결합시 킨 후 diaminobenzidine(Sigma Chemical Co.
- 5일에 생쥐를 희생시켜 소장(공장) 부위를 채취하여 Camoy 고정 액 에 1시간 고정 하였다. 각 생쥐 당 8~10개의 소장편을 통상적 인 방법에 따라 파라핀 포매하고 절편을 제작하였다. 각 생쥐 당 8개의 종절된 소장표본의 가장자리 에 위치 하는 소장움(crypt)의 수를 광학현미경으로 측정 하고 실험군별 평균 및 편차를 산정하였다(14).
- 각 생쥐 당 8~10개의 소장편을 통상적 인 방법에 따라 파라핀 포매하고 절편을 제작하였다. 각 생쥐 당 8개의 종절된 소장표본의 가장자리 에 위치 하는 소장움(crypt)의 수를 광학현미경으로 측정 하고 실험군별 평균 및 편차를 산정하였다(14).
- 생쥐로부터 분리 한 림 프구를 10%의 FBS가 포함된 RPMI1640 배지 에 부유시 킨 후 96-well plate에 분주하였다 (2 X105 cells/200 uL/well). 각각의 림프구 배양 well에 시료를 첨가한 후 세포배양기에서 2일 및 3일간 배양하였다. [meth- yl-3H]-TdR(Amersham Biosciences, Ltd, UK)을 배 양액 에 첨가하고(1.
- 골수세포를 20% FBS가 포함된 RPMI 1640 배양액에 부유 시 킨 후 24-well plate에 2 x 10&개/2 mL/well의 농도로 분주 하였다. 골수세포 배양액 에 시료를 첨가한후 세포배 양기 에서 10일간 배양한 후, trypan blue로 염색하여 살아있는 세포 의 수를 계수하였다.
- 골수세포 증식효과 : 조혈계 촉진효과를 알아보기 위하여, 시험관 내에서 골수세포 배양 시에 시료를 첨가하여 증 식 된 골수간질 세포(bone marrow stromal cells)의 수를 측정하였다. 그 결과, 본 생 약복합물 HIM-I 첨 가 시험 군에서 -골수간질세포 수가.
- 과를 관찰하기 위하여 비장내에 형성된 조혈세포 집락 수를 측정하였다. 그 결과, 생 약복합물 HIM-I 투여 군에서는 방사 선 조사 대조군에 비해 약 5.
- 5 Gy) 조사 대조군과 각 시료병 행 투 여군으로 나누고, 각 군당 ICR 생쥐 8~9마리로 하였다. 생 쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사시 킨 후 9일에 각 실험군의 생쥐를 희생시켜 비장을 채취하여 Bouin 고정 액에 2일간 고정하고 비장표면에 형성된 조혈세포집락을 실체현 미경으로 관찰하였다(21).
- 생쥐 에 대한 방사선 조사는 실험용 방사선 조사기 (Gammacell Elan 3000, Nordion International, Ottawa, Ontario, Can- ada)를 사용하여 eCo 7 선(선 량율: 10.9 Gy/min)을 조혈 모세 포 생존시험 에는 6.5 Gy, 소장움 생존시험 에는 12 Gy, 소장 움 세포자살 시험 에는 2 Gy를 생쥐 에 1회 전신 조사하였다. 시 료투여 는 생쥐 마리 당 1 mg 즉 50 ㎎/㎏ body weight 의 용량으로 방사선 조사 전 36시 간과 12시간에 2회 복강내 로 주사하였다.
- 실험군은 정상대조군, 방사선(12 Gy) 조사 대조군과 각 시료병행 투여군으로 나누고, 각 실험군에 ICR 생쥐를 6마 리씩 충당하였다. 생쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사 시킨 후 3.5일에 생쥐를 희생시켜 소장(공장) 부위를 채취하여 Camoy 고정 액 에 1시간 고정 하였다. 각 생쥐 당 8~10개의 소장편을 통상적 인 방법에 따라 파라핀 포매하고 절편을 제작하였다.
- 실험군은 정상대조군, 방사선(2 Gy) 조사 대조군과 각 시 료병행 투여군으로 나누고, 각 실험군에 ICR 생쥐를 4마리 씩 충당하였다. 생쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사시 킨 후 6시간에 생쥐를 희 생 시 켜 소장(공장) 부위를 채 취 하여 Camoy 고정 액에 고정하고, 각 마우스당 8~10개의 소장편 을 통상적 방법에 따라 파라핀 포매하여 절편을 제작하였다. Hematoxylin-eosin 염 색 및 DNA fragments 측정 을 위하여 in situ apoptosis detection kit( APOPT AG™, Oncor, Gaithersburg, MD, USA)를 사용하여 in situ DNA end- labelling(ISEL)을 실시하였다.
- 내재성 비 장 조혈세포집락 형성시험에는 수컷 생쥐를, 소장움 생존 시험 및 소장움 세포자살(apoptosis) 시험과 그 외 실험에는 암컷 생쥐를 사용하였다. 생쥐는 대한바이오링크(주)에서 구 입하여, 사육실 온도를 23±1℃로 습도를 55~60%로 유지 시키고 명암순환이 12시간 단위로 조절되는 표준 사육방법으로 사육하였으며, 고형사료와 음수는 자유로이 공급하였다. 시료제조
- 5 mCi/well) 4시간 동안 추가로 배양하였다. 세포 는 cell harvesterdnotech, Switzerland)# 이용하여 glass fiber filter strip에 수거한 후 liquid scintillation counter (Packard Instrument Co, USA)를 이용하여 incorporation된 『Hj-TdR의 양을 cpm(count per minute)으로 측정하였다.
- 소장움 생존 증가 효과 : 본 생약복합물 HIM-I 및 구성 생약이 대표적 재생조직의 하나인 소장움 생존에 미치는 영향을 검 증하였다. 그 결과, 정 상대조군의 공장단면 주변부의 움수는 평균 157개였으며, 방사선 조사(12 Gy) 대조군에서는 21 개로 급격히 감소하였다.
- 소장움 세포 자살(apoptosis) 억 제 효과 : 낮은 방사선 량에 의한 소장움 세포의 자살(apoptosis) 유발에 대한 방어 효과를 검증하였다. 그 결과, apoptotic celle 움의 기저부에 주로 형성되었으며, .
- 소장움의 편측 세 포수가 17개 이 상으로 Paneth 세포와 내강이 확연하고 정 확 히 종절된 움만을 선택하여 apoptotic cell의 수를 측정하였다. 소장움의 Paneth 세포를 제외한 4번째 세포까지를 기저 부(base)로 하여, apoptotic cell을 기저부와 전체 소장 움에서 관찰되는 총수로 구분하여 산출하였다(36).
- 생쥐 마리 당 40개 (군별 총 160개 ) 의 소장움을 광학현미경으로 관찰하였다. 소장움의 편측 세 포수가 17개 이 상으로 Paneth 세포와 내강이 확연하고 정 확 히 종절된 움만을 선택하여 apoptotic cell의 수를 측정하였다. 소장움의 Paneth 세포를 제외한 4번째 세포까지를 기저 부(base)로 하여, apoptotic cell을 기저부와 전체 소장 움에서 관찰되는 총수로 구분하여 산출하였다(36).
- 5 Gy, 소장움 생존시험 에는 12 Gy, 소장 움 세포자살 시험 에는 2 Gy를 생쥐 에 1회 전신 조사하였다. 시 료투여 는 생쥐 마리 당 1 mg 즉 50 ㎎/㎏ body weight 의 용량으로 방사선 조사 전 36시 간과 12시간에 2회 복강내 로 주사하였다.
- 실험군은 정상대조군, 방사선(12 Gy) 조사 대조군과 각 시료병행 투여군으로 나누고, 각 실험군에 ICR 생쥐를 6마 리씩 충당하였다. 생쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사 시킨 후 3.
- 저선량 방사선(2 Gy 이하)에 의한 재생조직의 손상에 대한 시료의 방어효과 관찰을 위한 실험모델로 적용하였다. 실험군은 정상대조군, 방사선(2 Gy) 조사 대조군과 각 시 료병행 투여군으로 나누고, 각 실험군에 ICR 생쥐를 4마리 씩 충당하였다. 생쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사시 킨 후 6시간에 생쥐를 희 생 시 켜 소장(공장) 부위를 채 취 하여 Camoy 고정 액에 고정하고, 각 마우스당 8~10개의 소장편 을 통상적 방법에 따라 파라핀 포매하여 절편을 제작하였다.
- 재생조직의 방사선 손상에 대한 시료의 방어효과 관찰을 위한 실험모델로 적용하였다. 대표적인 재생조직의 하나인 소장움(intestinal crypt)은 일정 량 이상의 방사선(12 Gy 이 상)에 노출되면, 3~4일 후 많은 부분이 소실되게 된다.
- 저선량 방사선(2 Gy 이하)에 의한 재생조직의 손상에 대한 시료의 방어효과 관찰을 위한 실험모델로 적용하였다. 실험군은 정상대조군, 방사선(2 Gy) 조사 대조군과 각 시 료병행 투여군으로 나누고, 각 실험군에 ICR 생쥐를 4마리 씩 충당하였다.
- 따라서, 처방제의 구성 생약 각각의 효과검증 결과를 바탕으로 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조혈계 회복 증진 효과 -HIM-1를 동시에 높게 나타내는 새로운 생약조합을 도출하였다. 즉, 당귀, 천궁, 백작약을 동일 무게 비율로 혼합하여 열수 추 출한 것을 새로운 생약복합물 HIM-I으로 개발하였으며 그 효과를 검정하였다. 본 생약복합물 HIM-Ie 면역세포 활성 화에서는 상기한 한약처방제보다 월등하게 높은 효과를 보 였으며, 조혈계 촉진효과도 높은 것으로 나타났다.
- 특히, 선행연구에서의 구성 생약 각각의 조직 방 어효과를 비교검토하고, 한편으로 각 단일 생약의 면역세포 활성화 효과를 검색한 결과를 바탕으로 각 지표 항목 모두에서 높은 효과를 나타내는 생약복합물을 도출하고자 하였다. 즉, 당귀, 천궁, 백작약을 동일 무게 비율로 혼합하여 열수 추출한 것을 HIM-I으로 명명하고 그 효과를 관찰하였다.
- 구입한 생약재 3종 즉, 당귀 ①印地- gui, Angelica gigas Nakai), 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino), 백즈小약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)을 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 100 g 당 증류수 1,000 mL을 가하고 4시간 열탕 추출하였다. 추출 물 내의 고형분을 제거하고 감압농축하여 물추출물(HIM-D 을 얻었다. 이러한 방법으로 얻은 추출물은 동결건조하여 냉동(-75 ℃) 저장하였으며, 실험 직전에 증류수에 녹여 사용하였다.
- 항산화 효과를 알아보기 위해서, 시험관 내에서 DPPH radical 소거 활성 및 지질과산화 억 제 활성을 측정하였다. 그 결과, 생약복합물 HIM-Ie 농도 100, 200, 400 ug/mL에서 각각 24.
대상 데이터
- 생약재는 서울 경동 한약재 시장에서 국내산으로 원산지 증명이 되는 최고 상등품을 구입하였으며, 전통적인 분류방법으로 품종을 확인하였다. 구입한 생약재 3종 즉, 당귀 ①印地- gui, Angelica gigas Nakai), 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino), 백즈小약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)을 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 100 g 당 증류수 1,000 mL을 가하고 4시간 열탕 추출하였다. 추출 물 내의 고형분을 제거하고 감압농축하여 물추출물(HIM-D 을 얻었다.
- 실험에는 7~8주령의 ICR 생쥐를 사용하였다. 내재성 비 장 조혈세포집락 형성시험에는 수컷 생쥐를, 소장움 생존 시험 및 소장움 세포자살(apoptosis) 시험과 그 외 실험에는 암컷 생쥐를 사용하였다. 생쥐는 대한바이오링크(주)에서 구 입하여, 사육실 온도를 23±1℃로 습도를 55~60%로 유지 시키고 명암순환이 12시간 단위로 조절되는 표준 사육방법으로 사육하였으며, 고형사료와 음수는 자유로이 공급하였다.
- 따라서, 저자 등은 방사선 손상에 대한 조직 방어와 면역 조혈계의 회복촉진 효과를 동시에 나타내는 새로운 생약조 합을 도출하고자 하였다. 또한, 손상된 생체에 적용하기 쉽 도록 독성이 거의 없는 원재료를 사용하기 위해 식품공전 상 에 식품의 주원료 혹은 부원료로 등재된 식물소재를 대상으로 하였다. 특히, 선행연구에서의 구성 생약 각각의 조직 방 어효과를 비교검토하고, 한편으로 각 단일 생약의 면역세포 활성화 효과를 검색한 결과를 바탕으로 각 지표 항목 모두에서 높은 효과를 나타내는 생약복합물을 도출하고자 하였다.
- 생약재는 서울 경동 한약재 시장에서 국내산으로 원산지 증명이 되는 최고 상등품을 구입하였으며, 전통적인 분류방법으로 품종을 확인하였다. 구입한 생약재 3종 즉, 당귀 ①印地- gui, Angelica gigas Nakai), 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino), 백즈小약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)을 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 100 g 당 증류수 1,000 mL을 가하고 4시간 열탕 추출하였다.
- , MD, USA)를 사용하는 통상적 방법으로 peroxidase en- zyme 부위 를 발색 시 켰다. 생쥐 마리 당 40개 (군별 총 160개 ) 의 소장움을 광학현미경으로 관찰하였다. 소장움의 편측 세 포수가 17개 이 상으로 Paneth 세포와 내강이 확연하고 정 확 히 종절된 움만을 선택하여 apoptotic cell의 수를 측정하였다.
- 실험군은 방사선 (6.5 Gy) 조사 대조군과 각 시료병 행 투 여군으로 나누고, 각 군당 ICR 생쥐 8~9마리로 하였다. 생 쥐 에 시료를 투여한 다음 방사선을 조사시 킨 후 9일에 각 실험군의 생쥐를 희생시켜 비장을 채취하여 Bouin 고정 액에 2일간 고정하고 비장표면에 형성된 조혈세포집락을 실체현 미경으로 관찰하였다(21).
- 실험에 사용한 세포배양액은 RPMKRosewell Park Memorial Institute) 1640 배지 (pH 7.4)에 2 mg/mL sodium bicarbonate, 20 mM HEPES, 100 U/mL penicillin, 100 lig/mL streptomycin, 0.05 mM 2-mercaptoethanol, 2 mM L-glu- tamine, 1 mM pyruvate, 1% non-essential amino acid 및 10% 또는 20%의 우태아혈청 (FBS; fetal bovine serum)을 첨가한 완전배지를 사용하였으며, 세포배양은 5% CO2, 37 ℃ 포화습도 조건의 세포배양기에서 수행하였다. 모든 시약 은 GIBCO BRL(Praisley, UK)에서 구입하였으며, 다만 2- mercaptoethanole Sigma-Aldrich Co.
-
실험동물
실험에는 7~8주령의 ICR 생쥐를 사용하였다. 내재성 비 장 조혈세포집락 형성시험에는 수컷 생쥐를, 소장움 생존 시험 및 소장움 세포자살(apoptosis) 시험과 그 외 실험에는 암컷 생쥐를 사용하였다.
데이터처리
- 실험군간 차이에 대한 유의성 검정은 Student's t-test를 수행하여 분석하였으며, 분석 프로그램으로는 SPSS 7.0 for windows(SPSS Inc., IL, US A) 를 사용하였다.
이론/모형
- 시료의 면역 세포 활성 화 효과를 알아보기 위하여 , 각 시료 가 시험관 내에서 비장 림프구를 자극하여 증식시키는 정도를 [3H]-thymidine(TdR) incorporation 방법으로 측정하였 다(35). 생쥐로부터 분리 한 림 프구를 10%의 FBS가 포함된 RPMI1640 배지 에 부유시 킨 후 96-well plate에 분주하였다 (2 X105 cells/200 uL/well).
- 조혈계 모 세포(bone marrow stem cells)의 방사선 손상 에 대한 시료의 방어효과 관찰을 위한 실험모델로 적용하였 다(15). 면역조혈계 세포는 방사선에 매우 민감하여 방사선 조사(3~8 Gy) 후 급격히 소실되게 되고, 그 결과 혈액 내에 모자라는 면역세포 수를 보충하기 위해 비상적으로 비장 (spleen)에서도 조혈작용이 일어나므로 일정 시일(9~10일) 경과 후 비장 표면에 형성된 조혈세포 집락을 관찰할 수 있다.
- 지질과산화 억제 활성 : 지질과산화 억제 실험은 흰쥐 (rat)의 간에서 얻은 microsome을 이용하여 TBA(thiobarbituric acid) 반응법을 통해 수행되었다. 지질과산화 반응은 시료 10 μL, 50 mM phosphate buffer(PH 7.
성능/효과
- 1) HIM-1 or its ingredients (50 ㎎/㎏ of body weight) were given i.p. at 36 and 12 hours before irradiation.
- 1) HIMT or its ingredients (50 ㎎/㎏ of body weight) were given i.p. at 36 and 12 hours before irradiation.
- 4). Apoptotic cell의 수를 측정한 결과(Table 3), 정상대조군에서 움 당 평균 0.084개가 관찰되었으며, 방사선 조사(2 Gy) 대조군 에서는 현저하게 증가하였다. HIM-1 병행 투여군에서는 방 사선 조사 대조군에 비해 유의하게 (p<0.
- 084개가 관찰되었으며, 방사선 조사(2 Gy) 대조군 에서는 현저하게 증가하였다. HIM-1 병행 투여군에서는 방 사선 조사 대조군에 비해 유의하게 (p<0.01) 감소되었다(억제 율 37.4%). 이는 높은 효과를 보인 사물탕 및 보중익 기 탕보다 다소 높은 효과이었다(30, 34).
- 이는 한약처방제 6종 중 가장 높은 효과를 보인 보중익기탕보다 3배 이상 높은 수준이었다. 구성 생약 중에서는 당귀 및 천궁 처리군에서 현저하게 높은 증식 효과를 보임으로써, 이들이 면역세포 활성화에 유효 물질로 작용하며 복합으로 상승효과를 나타내는 것으로 평가되었다. 또한, 생약복합물 HIM-I 처리 농 도 별로 보면 100 Ug/mL 농도까지 급격 하게 증가하고 200 Ug/mL 농도 이상에서는 plateau를 나타내었다(Fig.
- 3A). 구성 생약 중에서는 백작약 및 당귀가 조혈 촉진 에 유효 물질로 작용하며 복합으로 상승효과를 나타내는 것으로 평가되었다. 또한, 생약복합물 HIM-I 처리 농도 별로 보면 100 Jig/mL 농도까지 세포수가 급격 하게 증가하고 200 Ug/mL 농도 이상에서는 plateau를 나타내 었다 (Fig.
- 이는 높은 효과를 보인 사물탕 및 보중익 기 탕보다 다소 높은 효과이었다(30, 34). 구성 생약 중에서는 백작약 및 천궁 투여 군에서 apoptoic cell의 수가 현저 하게(p<0.05) 감소 됨으로써, 이들이 유효 물질로 작용하는 것으로 나타났다.
- 이는 한약처방제 6종 중 높은 효과를 보인 보중익기탕 및 사물탕보다 다소 높은 수준이 었다(30, 34). 구성 생약 중에서는 백작약 및 천궁 투여군에서 비장집 락수가 현저하게(p<0.05) 증가됨으로써 , 이들이 유효 물질로 작용하는 것으로 나타났다.
- 5B). 구성 생약 중에서는 백작약이 가장 높은 항산화 효과를 보임으로써 유효 물질로 작용하는 것으로 나타났다. 특히 , HIM-I의 항산화 효과는 방사선에 의한 생 체손상의 많은 부분이 물 분자로부터 생성된 라디칼에 의한 산화적 손상이 라는 점에서 그 작용기전의 일부를 해석하는 것이 될 것이다.
- 골수세포 증식효과 : 조혈계 촉진효과를 알아보기 위하여, 시험관 내에서 골수세포 배양 시에 시료를 첨가하여 증 식 된 골수간질 세포(bone marrow stromal cells)의 수를 측정하였다. 그 결과, 본 생 약복합물 HIM-I 첨 가 시험 군에서 -골수간질세포 수가.음성대조군에 비해 4.
- 과를 관찰하기 위하여 비장내에 형성된 조혈세포 집락 수를 측정하였다. 그 결과, 생 약복합물 HIM-I 투여 군에서는 방사 선 조사 대조군에 비해 약 5.4배 (p<0.05)로 비 장내 조혈세 포 집락 수가 유의하게 증가되었다(Table 1). 이는 한약처방제 6종 중 높은 효과를 보인 보중익기탕 및 사물탕보다 다소 높은 수준이 었다(30, 34).
- 항산화 효과를 알아보기 위해서, 시험관 내에서 DPPH radical 소거 활성 및 지질과산화 억 제 활성을 측정하였다. 그 결과, 생약복합물 HIM-Ie 농도 100, 200, 400 ug/mL에서 각각 24.3, 43.4, 72.5%의 DPPH 라디칼 소거활성을 보였으 며(Fig. 5A), 시험관 내에서 수산화 라디칼( ・OH)에 의한 지 질과산화에 대해서는 63.9, 73.5, 86.6%의 억제효과를 보였다 (Fig. 5B). 구성 생약 중에서는 백작약이 가장 높은 항산화 효과를 보임으로써 유효 물질로 작용하는 것으로 나타났다.
- 소장움 생존 증가 효과 : 본 생약복합물 HIM-I 및 구성 생약이 대표적 재생조직의 하나인 소장움 생존에 미치는 영향을 검 증하였다. 그 결과, 정 상대조군의 공장단면 주변부의 움수는 평균 157개였으며, 방사선 조사(12 Gy) 대조군에서는 21 개로 급격히 감소하였다. 생약복합물 HIM■[ 병 행 투여 군에서는 방사선 조사 대조군에 비해 소장움 생존 수가 1.
- 보혈 한약처 방제 6종의 효과를 검색 하여 보고한 바 있다(30-34). 그 결과를 요약하면, 방사선 조사 동물모델에서 재 생조직 방어 에는 사물탕, 보중익 기 탕 순으로, 조혈계 방 어 에는 보중익기탕, 사물탕 순으로 높은 효과를 보였다. 한편, 저자 등은 방사선 장해로부터 생체를 방호하고 회복시키기 위해서는 일차적으로 조직의 방어 뿐만 아니라 이 차적 으로 재 생조직 특히 면역조혈계의 회복 촉진이 필수적이라고 생각하였다.
- 본 연구에서 기존 6가지 처방제의 면역세포 활성화 효과를 검색한 결과 모두 높은 효과를 나타내지 않았다. 따라서, 처방제의 구성 생약 각각의 효과검증 결과를 바탕으로 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조혈계 회복 증진 효과 -HIM-1를 동시에 높게 나타내는 새로운 생약조합을 도출하였다. 즉, 당귀, 천궁, 백작약을 동일 무게 비율로 혼합하여 열수 추 출한 것을 새로운 생약복합물 HIM-I으로 개발하였으며 그 효과를 검정하였다.
- 이상의 결과로 보아, 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조 혈 활성화 및 회복에 유효하게 작용하는 물질이 각각 서로 다르며 , 본 생 약복합물 HIM-Ie 이 3가지 항목을 모두 충족 시키는 생약복합물이라고 생각되었다. 또한, 방사선에 의한 산화적 손상이 주 요인이 되는 동물모델에서 생체방호에 유 효한 HIM-Ie 최근 생체의 퇴 행성 질환의 주 원인이 산화적 손상이라고 밝혀지고 있는 관점에서 관련 질환의 예방 및 회복에도 유용할 것으로 생각되었다.
- 본 생약복합물 HIM-Ie 면역세포 활성 화에서는 상기한 한약처방제보다 월등하게 높은 효과를 보 였으며, 조혈계 촉진효과도 높은 것으로 나타났다. 또한, 재 생조직 및 면역조혈계의 방어 측면에서도 사물탕 및 보중익 기탕과 같은 높은 효과를 보였다. 한편, 시험관 내에서 높은 항산화 효과를 나타내는 것으로 보아, 이 항산화 작용이 방 사선 손상에 대한 방어효과의 작용기전 중의 하나로 생각되었다.
- 즉, 당귀, 천궁, 백작약을 동일 무게 비율로 혼합하여 열수 추 출한 것을 새로운 생약복합물 HIM-I으로 개발하였으며 그 효과를 검정하였다. 본 생약복합물 HIM-Ie 면역세포 활성 화에서는 상기한 한약처방제보다 월등하게 높은 효과를 보 였으며, 조혈계 촉진효과도 높은 것으로 나타났다. 또한, 재 생조직 및 면역조혈계의 방어 측면에서도 사물탕 및 보중익 기탕과 같은 높은 효과를 보였다.
- 보혈 한약처방제의 방어효과를 검 색하여, 재생조 직 방어에는 사물탕 및 보중익기탕이, 조혈계 방어에는 보 중익 기 탕 및 사물탕이 높은 효과를 나타내는 것으로 보고된 바 있다. 본 연구에서 기존 6가지 처방제의 면역세포 활성화 효과를 검색한 결과 모두 높은 효과를 나타내지 않았다. 따라서, 처방제의 구성 생약 각각의 효과검증 결과를 바탕으로 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조혈계 회복 증진 효과 -HIM-1를 동시에 높게 나타내는 새로운 생약조합을 도출하였다.
- 시험관 내에서 시료가 림프구를 자극하여 증식시키는 정도를 측정한 결과, 생약복합물 HIM-I 처리군에서 2일 및 3일 배 양 후에 [3H]-TdR 흡수 정도(cpm)가 음성 대조군에 비해 현저하게 증가되었다(Fig. 2A). 이는 한약처방제 6종 중 가장 높은 효과를 보인 보중익기탕보다 3배 이상 높은 수준이었다.
- 특히 , HIM-I의 항산화 효과는 방사선에 의한 생 체손상의 많은 부분이 물 분자로부터 생성된 라디칼에 의한 산화적 손상이 라는 점에서 그 작용기전의 일부를 해석하는 것이 될 것이다. 이상의 결과로 보아, 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조 혈 활성화 및 회복에 유효하게 작용하는 물질이 각각 서로 다르며 , 본 생 약복합물 HIM-Ie 이 3가지 항목을 모두 충족 시키는 생약복합물이라고 생각되었다. 또한, 방사선에 의한 산화적 손상이 주 요인이 되는 동물모델에서 생체방호에 유 효한 HIM-Ie 최근 생체의 퇴 행성 질환의 주 원인이 산화적 손상이라고 밝혀지고 있는 관점에서 관련 질환의 예방 및 회복에도 유용할 것으로 생각되었다.
후속연구
- 한편, 시험관 내에서 높은 항산화 효과를 나타내는 것으로 보아, 이 항산화 작용이 방 사선 손상에 대한 방어효과의 작용기전 중의 하나로 생각되었다. 이상의 결과로 보아, 생약복합물 HIMTe 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조혈계 회복 증진 효과를 동시에 나 타냄으로써 방사선뿐만 아니라 여러가지 원인으로부터 생 체를 방호하고 회복시키는데 유용할 것으로 생각된다.
- 구성 생약 중에서는 백작약이 가장 높은 항산화 효과를 보임으로써 유효 물질로 작용하는 것으로 나타났다. 특히 , HIM-I의 항산화 효과는 방사선에 의한 생 체손상의 많은 부분이 물 분자로부터 생성된 라디칼에 의한 산화적 손상이 라는 점에서 그 작용기전의 일부를 해석하는 것이 될 것이다. 이상의 결과로 보아, 재생조직 방어, 조혈계 방어, 면역조 혈 활성화 및 회복에 유효하게 작용하는 물질이 각각 서로 다르며 , 본 생 약복합물 HIM-Ie 이 3가지 항목을 모두 충족 시키는 생약복합물이라고 생각되었다.
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