브로콜리를 포함한 십자화과 식물에서 glucoraphanin의 가수분해를 통해 생성되는 isothiocyanate의 일종인 sulforaphane은 역학적 조사를 포함한 다양한 선행 연구에서 강력한 암예방 효과를 가지는 것으로 알려져 있다. 항암효과에 관한 최근 연구 결과에 따르면 sulforaphane은 다양한 인체암세포의 증식을 억제하고 apoptosis를 유발할 수 있는 것으로 알려지고 있으나, 정확한 분자생물학적 기전은 밝혀져 있지 않은 상태이다. 본 연구에서는 sulforaphane의 항암작용 기전을 조사하기 위하여 HepG2 인체간암세포의 증식에 미치는 sulforaphane의 영 향을 조사하였다. Sulforaphane의 처리에 의한 HepG2 세포의 증식억제 및 형태적 변형은 세포주기 G2/M arrest 및 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다. RT-PCR 및 Western blot 분석 결과, sulforaphane 처리에 의하여 cyclin A 및 cyclin B1, Cdc2의 발현이 단백질 수준에서 선택적으로 저하되었으며, 종양억제 유전자p53 및 Cdk inhibitor p21의 발현은 전사 및 번역 수준에서 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 증가되었다. Sulforaphane의 항암 기전을 규명하기 위해서는 더 많은 연구가 부가적으로 필요하겠지만, 본 연구의 결과들에 의하면 sulforaphane은 강력한 인체암세포의 증식 억제 및 항암작용이 있을 것을 시사하여 준다고 할 수 있다.
브로콜리를 포함한 십자화과 식물에서 glucoraphanin의 가수분해를 통해 생성되는 isothiocyanate의 일종인 sulforaphane은 역학적 조사를 포함한 다양한 선행 연구에서 강력한 암예방 효과를 가지는 것으로 알려져 있다. 항암효과에 관한 최근 연구 결과에 따르면 sulforaphane은 다양한 인체암세포의 증식을 억제하고 apoptosis를 유발할 수 있는 것으로 알려지고 있으나, 정확한 분자생물학적 기전은 밝혀져 있지 않은 상태이다. 본 연구에서는 sulforaphane의 항암작용 기전을 조사하기 위하여 HepG2 인체간암세포의 증식에 미치는 sulforaphane의 영 향을 조사하였다. Sulforaphane의 처리에 의한 HepG2 세포의 증식억제 및 형태적 변형은 세포주기 G2/M arrest 및 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다. RT-PCR 및 Western blot 분석 결과, sulforaphane 처리에 의하여 cyclin A 및 cyclin B1, Cdc2의 발현이 단백질 수준에서 선택적으로 저하되었으며, 종양억제 유전자 p53 및 Cdk inhibitor p21의 발현은 전사 및 번역 수준에서 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 증가되었다. Sulforaphane의 항암 기전을 규명하기 위해서는 더 많은 연구가 부가적으로 필요하겠지만, 본 연구의 결과들에 의하면 sulforaphane은 강력한 인체암세포의 증식 억제 및 항암작용이 있을 것을 시사하여 준다고 할 수 있다.
Sulforaphane, an isothiocyanate derived from hydrolysis of glucoraphanin in broccoli and other cruciferous vegetables, was shown to induce phase II detoxification enzymes and inhibit chemically induced mammary tumors in rodents. Recently, sulforaphane is known to induce cell cycle arrest and apoptos...
Sulforaphane, an isothiocyanate derived from hydrolysis of glucoraphanin in broccoli and other cruciferous vegetables, was shown to induce phase II detoxification enzymes and inhibit chemically induced mammary tumors in rodents. Recently, sulforaphane is known to induce cell cycle arrest and apoptosis in human canter cells, however its molecular mechanisms are poorly understood. In tile present study, we demonstrated that sulforaphane acted to inhibit proliferation and induce morphological changes of human hepatocarcinoma HepG2 cells. Treatment of HepG2 cells with $10{\mu}M\;or\;15{\mu}M$ sulforaphane resulted in significant G2/M cell cycle arrest as determined by DNA flow cytometry. Moreover, $20{\mu}M$ sulforaphane significantly induced the population of sub-G1 cells suggesting that sulforaphane induced apoptosis. This anti-proliferative effect of sulforaphane was accompanied by a marked inhibition of ryclin A, cyclin 31 and Cdc2 protein. However, the levels of tumor suppressor p53 and Cdk inhibitor p21 mRNA and protein expression were significantly increased by sulforaphane treatment in a concentration-dependent manner. Although further studies are needed, the present work suggests that sulforaphane may be a potential rhemoprevetiveichemotherapeucc agent for the treatment of human cancer cells.
Sulforaphane, an isothiocyanate derived from hydrolysis of glucoraphanin in broccoli and other cruciferous vegetables, was shown to induce phase II detoxification enzymes and inhibit chemically induced mammary tumors in rodents. Recently, sulforaphane is known to induce cell cycle arrest and apoptosis in human canter cells, however its molecular mechanisms are poorly understood. In tile present study, we demonstrated that sulforaphane acted to inhibit proliferation and induce morphological changes of human hepatocarcinoma HepG2 cells. Treatment of HepG2 cells with $10{\mu}M\;or\;15{\mu}M$ sulforaphane resulted in significant G2/M cell cycle arrest as determined by DNA flow cytometry. Moreover, $20{\mu}M$ sulforaphane significantly induced the population of sub-G1 cells suggesting that sulforaphane induced apoptosis. This anti-proliferative effect of sulforaphane was accompanied by a marked inhibition of ryclin A, cyclin 31 and Cdc2 protein. However, the levels of tumor suppressor p53 and Cdk inhibitor p21 mRNA and protein expression were significantly increased by sulforaphane treatment in a concentration-dependent manner. Although further studies are needed, the present work suggests that sulforaphane may be a potential rhemoprevetiveichemotherapeucc agent for the treatment of human cancer cells.
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문제 정의
세포주기 조절의 관점에서 암세포는 세포주기의 비정상화에 기인된 질병으로 정의 될 수 있으며, 특정 시기의 세포주기 억제는 세포주기 조절 양성인자의 발현 저하 또는 음성 조절 인자의 과발현에 의한 것으로 요약될 수 있다[6, 24]. 따라서 sulforaphane의 처리에 의한 HepG2 간암세포의 성장억제가 세포주기 특정 시기의 교란과 연관성을 지니는지의 여부를 조사하기 위하여 세포주기 분포에 미치는 sulforaphane의 영향을 조사하였다. 이를 위하여 정상 및 다양한 농도의 sulforaphane0] 처리된 배지에서 48시간 배양한 후 flow cytometer를 이용하여 분석한 결과는 Fig.
그러나 CIP/KIP 군에 속하는 pl6의 경우 일반적으로 G1 기 arrest에만 관여하는 것으로 알려져 있으며, p27 역시 G1 기 anest에 중요하지만 부분적으로 G2/M기 arrest 에도 관여할 수 있는 것으로 보고되어지고 있다[6, 1 이. 따라서 본 연구에서는 sulforaphane처리에 의한 인체 간암 세포의 G2/M기의 억제 유발에 종양 억제 유전자 p53 및 p21 그리고 p27과 같은 Cdk inhibitors들의 관련 여부를 조사하였다. Fig.
본 연구에서는 sulforaphane의 항암 기전에 관한 연구가 거의 이루어져 있지 않은 인체 간암세포를 대상으로 sulfor- aphane에 의한 간암세포의 성장에 미치는 영향을 세포주기 조절인자를 중심으로 조사하였다.
항암효과에 관한 최근 연구 결과에 따르면 sulforaphanee 다양한 인체암세포의 증식을 억제하고 apoptosis를 유발할 수 있는 것으로 알려지고 있으나, 정확한 분자생물학적 기전은 밝혀져 있지 않은 상태이다. 본 연구에서는 sulforaphane의 항암작용기전을 조사하기 위하여 HepG2 인체간암세포의 증식에 미치는 sulforaphane의 영향을 조사하였다. Sulforaphane의 처리에 의한 HepG2 세포의 증식억제 및 형태적 변형은 세포주기 G2/M arrest 및 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다.
제안 방법
HepG2 세포의 증식에 미치는 sulforaphane의 영향을 조사하기 위하여 준비된 HepG2 세포에 48시간 동안 sulfor- aphane을 적정 농도로 희석하여 처리한 후, MTT assay를 실시하였으며, 그 결과를 Fig. 1A에 나타내었다. Fig.
이때 housekeeping 유전자인 glycer- aldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)를 internal control로 사용하였다. 각 PCR 산물들을 1% agarose gel을 이용하여 전기영동하고 ethidium bromide (EtBrz Sigma)를이용하여 염색한 후 ultra violet (UV)하에서 확인하였다.
그 후, 배 지를 제거 하고 tetrazolium bromide salt (MTT, Amresco, Solon, Ohio, USA) 시약을 0.5 mg/mL 농도가 되게 성장배지로 희석하여 분주하고 3시간 동안 배양 후 MTT 시약을 제거하고 DMSO를 첨가하여 well에 생성된 for- mazin을 모두 녹인 후 ELISA reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 540 nm에서 흡광도를 측정하여 정상 배지에서 배양된 암세포와 sulforaphane이 처리된 배지에서 배양된 세포들의 성장률을 비교하였다. 세포형태 변화 관찰을 위해서는 세포배양용 petridish에 세포를 24시간 동안 안 정화 시 킨 다음 sulforaphane을 농도별로 처 리하여 48시간 동안 배양한 후, 도립 현미경하에서 각 농도에 따른 형태의 변화를 관찰하였다.
1% Tween 20 in PBS)에 4℃에서 1 시간 이상 배양하면서 비특이적인 단백질들에 대한 blockin응을 실시하였다. 그리고 특정 단백질에 대한 항체를 mem- brane에 적용시켜 항원 항체 반응을 일으킨 후, PBS-T로 씻어내고 특정 항체에 대한 이차 항체 반응을 실시한 후 enhanced chemiluminoesence (ECL) 용액 (Amersham Life Science Corp., Arlington Heights, IL, USA)을 적용시킨 다음 X-ray film에 감광시켜 특정 단백질의 양을 분석하였다. 본 실험에 사용된 항체들은 Santa Cruz Biotechnology Inc.
, Carlsbad, CA, USA)를 4 ℃ 에서 1시간 동안 처리하여 total RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정량한 후, oligo dT primer와 AMV reverse transcriptase (RT)를 이용하여 2 ㎍의 RNA에서 single stranded cDNA를 합성하였다. 이 cDNA를 template로 사용하여 관찰대상 유전자(Table 1)를 polymerase chain reaction (PCR) 방법으로 증폭하였다.
분리된 단백질을 함유한 acrylamide gel을 nitro- celhilose membrane (Schleicher and Schuell, Keene, NH, USA)으로 electroblotting에 의해 전이시킨 후, 10% skim milk를 함유한 PBS-T (0.1% Tween 20 in PBS)에 4℃에서 1 시간 이상 배양하면서 비특이적인 단백질들에 대한 blockin응을 실시하였다. 그리고 특정 단백질에 대한 항체를 mem- brane에 적용시켜 항원 항체 반응을 일으킨 후, PBS-T로 씻어내고 특정 항체에 대한 이차 항체 반응을 실시한 후 enhanced chemiluminoesence (ECL) 용액 (Amersham Life Science Corp.
세포주기의 분포도에 미치는 sulforaphane의 영향을 조사하기 위하여 Cycle TEST PLUS kit (Becton Dickinson, San Jose, CAZ USA)를 사용하였으며, 정상 및 sulforaphane0] 함유된 배지에서 48시간 배양된 암세포들을 buffer solution을 이용하여 두세 번 씻어내고, Cycle TEST PLUS solution A 및 B를 상온에서 각각 10분씩 처리한 후 Cycle TEST PLUS solution C를 처리하여 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 이를 nylon mesh로 세포를 하나씩으로 분리시킨 후 DNA flow cytometry (Becton Dickinson; San Jose, CAZ USA) 에 적용시켜 형광반응에 따른 histogram을 ModiFit LT (Becton Dickinson) 프로그램으로 분석하였다.
5 mg/mL 농도가 되게 성장배지로 희석하여 분주하고 3시간 동안 배양 후 MTT 시약을 제거하고 DMSO를 첨가하여 well에 생성된 for- mazin을 모두 녹인 후 ELISA reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 540 nm에서 흡광도를 측정하여 정상 배지에서 배양된 암세포와 sulforaphane이 처리된 배지에서 배양된 세포들의 성장률을 비교하였다. 세포형태 변화 관찰을 위해서는 세포배양용 petridish에 세포를 24시간 동안 안 정화 시 킨 다음 sulforaphane을 농도별로 처 리하여 48시간 동안 배양한 후, 도립 현미경하에서 각 농도에 따른 형태의 변화를 관찰하였다.
이상의 결과들은 인체 유방암세포, 전립선암세포, 대장암세포, 췌장암세포 및 악성 백혈구 등에서 관찰된 최근의 선행연구들에서 관찰된 경우와 유사한 경향성을 보여주는것으뢰2, 14, 18, 20, 22, 25], sulforaphanee 간암세포에서도 다른 암세포에서처럼 비슷한 증식억제 효능이 있음을 알 수 있었다. 아울러 sulforaphane의 처리가 HepG2 세포의 형태에 어떠한 영향을 주는 지에 대해 알아보기 위하여 여러 농도의 sulforaphane을 48시간동안 처리 후 도립 현미경을 이용하여 세포의 형태를 관찰한 결과는 Fig. IB에 나타낸 바와 같다. 즉 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 현저한 세포 밀도의 감소 현상과 형태적인 변화를 관찰할 수 있으며, sulforaphane 2] 처리 농도 증가에 따라 세포막의 shrinkage 및 blebbing 현상도 관찰할 수 있었고, 처리농도가 높은 경우 cell elongation을 포함하는 dendrite-like structure?} 관찰되었다.
이를 nylon mesh로 세포를 하나씩으로 분리시킨 후 DNA flow cytometry (Becton Dickinson; San Jose, CAZ USA) 에 적용시켜 형광반응에 따른 histogram을 ModiFit LT (Becton Dickinson) 프로그램으로 분석하였다.
대상 데이터
본 실험에 사용된, sulfsaphanee Sigma Chemical Co. (St. Luis, MO, USA)에서 구입하였으며 10 mM의 농도로 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma)에 용해하여 -20℃ 에 보관하여 사용하였고, 매회 처리 전 배지에 희석 후 사용하였다. 실험에 사용한 간암 세포주인HepG2는 한국세포주은행에서구입하여 사용하였으며, 세포의 배양을 위해 90%의Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)과 10% 우태 아혈청 (fetal bovine serum, FBS, Gibco BRL), 1%의 penicillin 및 streptomycin (Gibco BRL) 등이 포함된 배지를 사용하여 배양하였다.
특히 sulforaphane 처리에 따른 Cdc2의 인산화 증가현상은 인체암세포에서 뿐만 아니라 쥐의 유방암세포에서도 관찰된 현상이다[13]. 본 연구에서는 세포주기의 G2/M.기의 전이 조절에 중요한 유전자들의 단백질 발현이 sulforaphane의 처리에 따라 대부분 감소되었는데, 특히 cyclin A 및 BLe 세포주기 조절인자 중 half-life가 짧은 단백질군에 해당되기 때문에 sulforaphane 처리에 따른 post-translational 수준에서 더 조절 받을 것으로 생각되어진다.
Luis, MO, USA)에서 구입하였으며 10 mM의 농도로 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma)에 용해하여 -20℃ 에 보관하여 사용하였고, 매회 처리 전 배지에 희석 후 사용하였다. 실험에 사용한 간암 세포주인HepG2는 한국세포주은행에서구입하여 사용하였으며, 세포의 배양을 위해 90%의Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)과 10% 우태 아혈청 (fetal bovine serum, FBS, Gibco BRL), 1%의 penicillin 및 streptomycin (Gibco BRL) 등이 포함된 배지를 사용하여 배양하였다. 세포는 37℃Z 5% CO2 조건하에서 배양하였고, 세포의 증식에 따른 과밀도 현상을 해소하기 위해 적정시간 배양 후 0.
이론/모형
분리된 RNA를 정량한 후, oligo dT primer와 AMV reverse transcriptase (RT)를 이용하여 2 ㎍의 RNA에서 single stranded cDNA를 합성하였다. 이 cDNA를 template로 사용하여 관찰대상 유전자(Table 1)를 polymerase chain reaction (PCR) 방법으로 증폭하였다. 이때 housekeeping 유전자인 glycer- aldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)를 internal control로 사용하였다.
성능/효과
Sulforaphane의 처리에 의한 HepG2 세포의 증식억제 및 형태적 변형은 세포주기 G2/M arrest 및 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다. RT-PCR 및 Western blot 분석 결과, sulforaphane 처 리에 의하여 cyclin A 및 cyclin Bl, Cdc2의 발현 이 단백질 수준에서 선택적으로 저하되었으며, 종양억제 유전자 P53 및 Cdk inhibitor p21의 발현은 전사 및 번역 수준에서 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 증가되었다. Sulforaphane의 항암 기전을 규명하기 위해서는 더 많은 연구가 부가적으로 필요하겠지만, 본 연구의 결과들에 의하면 sulforaphanee 강력한 인체암세포의 증식 억제 및 항암작용이 있을 것을 시사하여 준다고 할 수 있다.
본 연구에서는 sulforaphane의 항암작용기전을 조사하기 위하여 HepG2 인체간암세포의 증식에 미치는 sulforaphane의 영향을 조사하였다. Sulforaphane의 처리에 의한 HepG2 세포의 증식억제 및 형태적 변형은 세포주기 G2/M arrest 및 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다. RT-PCR 및 Western blot 분석 결과, sulforaphane 처 리에 의하여 cyclin A 및 cyclin Bl, Cdc2의 발현 이 단백질 수준에서 선택적으로 저하되었으며, 종양억제 유전자 P53 및 Cdk inhibitor p21의 발현은 전사 및 번역 수준에서 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 증가되었다.
2A 및 B에 나타낸 바와 같다. 결과에서 알 수 있듯이 sulforaphane이 함유되지 않은 정상 배지에서 자란 암세포의 경우 Gl, S 및 G2/M기에 해당되는 세포의 빈도는 약 62.03%, 23.69% 및 13.41% 정도였다. 그리고 5 pM 처리 군의 경우 G1 기, S7] 및 G2/M기의 빈도는 대조군과 유사하였으나, 10 pM 처리군에서는 G1 및 G2/M기가 다소 증가 (71.
즉 10 11M 처리군의 경우 대조군에 비하여 30% 이상 세포증식이 억제되었으며, 20 uM 처리 군에서는 약 80% 정도의 세포증식 억제현상을 관찰할 수 있었다. 그리고 30 pM 처리군에서는 생존율이 10% 이하로 나타나 HepG2 세포가 정상적인 생존을 하지 못하였음을 알 수 있었다. 이상의 결과들은 인체 유방암세포, 전립선암세포, 대장암세포, 췌장암세포 및 악성 백혈구 등에서 관찰된 최근의 선행연구들에서 관찰된 경우와 유사한 경향성을 보여주는것으뢰2, 14, 18, 20, 22, 25], sulforaphanee 간암세포에서도 다른 암세포에서처럼 비슷한 증식억제 효능이 있음을 알 수 있었다.
41% 정도였다. 그리고 5 pM 처리 군의 경우 G1 기, S7] 및 G2/M기의 빈도는 대조군과 유사하였으나, 10 pM 처리군에서는 G1 및 G2/M기가 다소 증가 (71.62% 및 15.90%)되는 경향성을 보여주었으며, 상대적으로 S기에 속하는 세포의 빈도(10.30%)는 감소되었다. 그러나 15 pM 처리군에서는 G2/M기에 속하는 세포의 빈도가 대조군에 비하여 약 2배 정도 증가(26.
62%)로 세포주기 특이적인 교란 현상을 관찰할 수가 없었다. 따라서 sub-G1 기에 속한 세포를 제외한 나머지 세포들을 고려할 경우, sulforaphane 의 처리에 따라 G1 기에 속하는 세포의 빈도는 감소된 반면, G2/M기에 속하는 암세포의 빈도가 상대적으로 증가하였음을 알 수 있었고, sulforaphane 처리에 따른 HepG2 세포의 증식억제는 세포주기 G2/M arrest와 연관된 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다. HepG2 간암 세포에서 관찰된 이러한 현상은 췌장암세포, 유방암세포, 대장암세포, 전립선암세포, 흑색종세포 등에서 나타난 결과와 매우 유사하였다 [14, 20, 22, 25].
그리고 30 pM 처리군에서는 생존율이 10% 이하로 나타나 HepG2 세포가 정상적인 생존을 하지 못하였음을 알 수 있었다. 이상의 결과들은 인체 유방암세포, 전립선암세포, 대장암세포, 췌장암세포 및 악성 백혈구 등에서 관찰된 최근의 선행연구들에서 관찰된 경우와 유사한 경향성을 보여주는것으뢰2, 14, 18, 20, 22, 25], sulforaphanee 간암세포에서도 다른 암세포에서처럼 비슷한 증식억제 효능이 있음을 알 수 있었다. 아울러 sulforaphane의 처리가 HepG2 세포의 형태에 어떠한 영향을 주는 지에 대해 알아보기 위하여 여러 농도의 sulforaphane을 48시간동안 처리 후 도립 현미경을 이용하여 세포의 형태를 관찰한 결과는 Fig.
1A에 나타낸 바와 같이 48시간 동안 정상 배지에서 자란 HepG2 세포에 비하여 sulforaphane0] 함유된 배지에서는 sulfor- aphane의 첨가 농도 의존적으로 세포의 증식이 매우 감소되었음을 알 수 있었다. 즉 10 11M 처리군의 경우 대조군에 비하여 30% 이상 세포증식이 억제되었으며, 20 uM 처리 군에서는 약 80% 정도의 세포증식 억제현상을 관찰할 수 있었다. 그리고 30 pM 처리군에서는 생존율이 10% 이하로 나타나 HepG2 세포가 정상적인 생존을 하지 못하였음을 알 수 있었다.
IB에 나타낸 바와 같다. 즉 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 현저한 세포 밀도의 감소 현상과 형태적인 변화를 관찰할 수 있으며, sulforaphane 2] 처리 농도 증가에 따라 세포막의 shrinkage 및 blebbing 현상도 관찰할 수 있었고, 처리농도가 높은 경우 cell elongation을 포함하는 dendrite-like structure?} 관찰되었다. 이러한 sulforaphane 처리 농도 의존적인 형태적 변화와 밀도의 감소는 Fig.
87%). 즉 sulforaphane 처리 농도의 증가에 따라 DNA 합성 기에 해당되는 S기 의 감소가 상대적으로 감소되 었으며, G2/M arrest 가능성을 보여주었다. 그러나 20 pM 처리군에서는 apoptosis 유발에 해당되는 sub-Gl기의 급격한 증가(54.
후속연구
RT-PCR 및 Western blot 분석 결과, sulforaphane 처 리에 의하여 cyclin A 및 cyclin Bl, Cdc2의 발현 이 단백질 수준에서 선택적으로 저하되었으며, 종양억제 유전자 P53 및 Cdk inhibitor p21의 발현은 전사 및 번역 수준에서 sulforaphane 처리 농도 의존적으로 증가되었다. Sulforaphane의 항암 기전을 규명하기 위해서는 더 많은 연구가 부가적으로 필요하겠지만, 본 연구의 결과들에 의하면 sulforaphanee 강력한 인체암세포의 증식 억제 및 항암작용이 있을 것을 시사하여 준다고 할 수 있다.
그러나 p27의 경우 sulforaphane 처리에 따라 약간의 변화를 보였으나, sulfor- aphane 처리 농도 증가에 따른 발현 증가 현상이 뚜렷하게 관찰되지 않았다. 비록 본 연구의 결과로만 sulforaphane에 의한 p21의 발현이 전사 활성 수준에서 조절된다고 결론을지울 수는 없으나, sulforaphane 처리에 의한 p53이 발현 증가는 최소한 세포증식 억제 또는 apoptosis 유발에 어느 정도 기여할 것으로 추정되며 이에 관한 추가적인 연구의 실시가 요구되어진다. 아울러 sulforaphane 처리 의하여 발현이증가된 p21 단백질은 cyclin/Cdk compmex 형성의 방해 요소로 작용하여 그들의 kinase 활성을 억제할 것이며, 이로 인한 세포주기의 진행이 부분적으로 억제되었을 것으로 추정된다.
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