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문제 정의
- ^\(Dioscorea batatas 이하 Ym)는Dioscoreacea과, Dioscorea속에 속하는 다년생 덩굴식물로서 마에 관한 연구로는 콜레스테롤 저 하작용6)마 점 질물의 중금속 제 거능과 혈 압 상승호르몬인 안지오텐신 변환효소(angiotensin converting enzyme) 저히] 효과7) 등의 보고가있었다. 마를 이용한 구강위생에 미치는 바를 관찰한 연구가 미흡하여 본 연구에서는 마를 대상으로 보편적인 추출법인 methanol에 추출한 다음 좀더 우수한 항균활성 물질을 찾고자 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 등의 용매 분획별 추출물로서 항균력을 조사하여 보고하고자 한다.
제안 방법
- 마 헥산 추출물의 s. vmtms에 대한 생육 저해작용은 BHI broth에 초기 균수가 약 106 CFU/ml가 되도록 조정하여 측정하였다. 마 헥산 추출물을 0.
- 0625 mg/ml까지 연속적으로 단계 희석하였다. 균 배양액을 McFarland No. 0.5 농도가 되게 희석한 후 다시 100배 희석한 균액을 각 well에 분주하여 박테리아는 37℃ 배양기에서, 균의 증식이 없는농도를 최소성장억제농도로 하였다.
- 이 를 동결건조 후 dry keeper에 보관하여 사용하였으며, 메탄올 추출물의 용매분획은 항균성 검색에서 항균활성이 높게 나타난 마추출물을이 methanol 추출물에 일정 량의 증류수를 가하여 현탁 시킨 후 증류수와 동량의 n-hexane을 가하여 진탕하고 방치한 다음 분획 후 농축하여 n-hexane 분획을 얻었다. 남아있는 수용성 층을 이와 같은 방법으로 chloroform, ethyl acetate및 n-butanol을 첨가하여 순차 분획한 후 농축하여 각각 chloroform 분획, ethyl acetate 분획 및 n-butanol 분획을 얻었고 남은 수용성 층은 농축하여 물 분획으로 하였다. 위 시료들은 동결건조 후 dry keeper에 보관하여 사용하였다.
- 마 추출물의 용매 분획별 구강병 원인균에 대한 항균력을 조사하였다. 마의 메탄올 추출물을 용매 분획별로 항균력을 조사한 결과, 마 헥산 추출물은 3균주와 비교한 결과 특이적으로 S.
- vmtms에 대한 생육 저해작용은 BHI broth에 초기 균수가 약 106 CFU/ml가 되도록 조정하여 측정하였다. 마 헥산 추출물을 0.1, 0.25, 0.5 mg/ml의 농도로 첨가 후 37℃ , CO2 배양기에 24시간 배양하면서 일정량의 배양액을 Mitis Salivarius agar(l% potassium tellurite, 0.2 unit bacitracin) 에 접 종하여 배양시간에 따른 생균수를 측정하였다.
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1.3 시료의 추출 및 분획
분쇄한 각 시료에 10배량 (w/v) 의 80% methanol을 가하여 24시간씩 3회 정치하여 추출하고, 추출액 은 여 과지 (Adventec toyo2, Toyo Roshi Kaisha, Japan)를 사용하여 2회 감압 여과하고 rotary vacuum evaporators 농축하였다
. 이 를 동결건조 후 dry keeper에 보관하여 사용하였으며, 메탄올 추출물의 용매분획은 항균성 검색에서 항균활성이 높게 나타난 마추출물을이 methanol 추출물에 일정 량의 증류수를 가하여 현탁 시킨 후 증류수와 동량의 n-hexane을 가하여 진탕하고 방치한 다음 분획 후 농축하여 n-hexane 분획을 얻었다.
대상 데이터
- ) 제품을 사용하였다. Potassium tellurite, bacitracin 등은 Sigma사(U.S.A.) 제품을 사용하였다.
- 시료의 추출 및 분획에 사용된 용매로써 methanol, n-hexane 등은 J. T. Baker사 (U.S.A.)의 특급시약을 사용하였으며, hemin, vitamin Kx 등은 Sigma사(U.S.A.), Brain Heart Infusion broth, Brain Heart Infusion agar, Mitis Salivarius agar, Muller Hinton broth, Muller Hinton agar, Trypticase Soy broth, Trypticase Soy agar, hemin, menadione 등은 Difco사 (U.S.A.) 제품을 사용하였다. Potassium tellurite, bacitracin 등은 Sigma사(U.
- 실험에 사용한 기기로는 CO2 incubator(Sanyo, MCO-17 AIC, Japan), anaerobic chamber (Thermo, Forma Scientific Co., U.S.A), ELISA reader (Molecular Device, SpecTRA MAX 340, Austria), high speed centrifuge 등이었고, 그 외 실험실에서 사용하는 일반기구들을 사용하였다.
- 이 실험에 사용한 균주들은 S. mutans KCTC 5316, P. gingivalis KCTC 5352, S. aureus KCTC 1927로 한국생명공학연구소로부터 분양받아 사용하였다.
- 이 실험에서 사용한 마는 대구 약령시 약재상에서 건조상태의 것을 구입하여 사용하였다
데이터처리
- 01 을 사용하여 Levene 통계량을 이용하여 등분산에 대한 검정 한 다음, 등분산이 인정되면 각 실험군에 대한 다중검증을 위해 일원분산분석법(one-way ANOVA)으로 검정하였다. 또한 분산분석결과 군간 유의한 차이가 있을 경우 유의수준은 a = 0.05 에서 Duncan's multiple range test 로 사후검정하였다.
- 모든 실험은 3회 반복하였으며, 자료의 분석과 통계처리는 SAS 8.01 을 사용하여 Levene 통계량을 이용하여 등분산에 대한 검정 한 다음, 등분산이 인정되면 각 실험군에 대한 다중검증을 위해 일원분산분석법(one-way ANOVA)으로 검정하였다. 또한 분산분석결과 군간 유의한 차이가 있을 경우 유의수준은 a = 0.
이론/모형
- 마 헥산 추출물의 최소성장억제농도(minimal inhibitory concentration ; MIC)를 측정하기 위해 액체배지희석법을8) 이용하였다. 96-microw-ellplate에 broth를 분주한 후 시료 최고농도 16 mg/ml에서 최저농도 0.
- 시료의 항균성 검색 은 paper disk(∅6mm)를 이용한 agar diffusion법 (국립보건원 1985)으로실험하였다. Agar plate에 미리 배 양한 균 배 양액을 McFarland No.
성능/효과
- 항균력을 조사하였다. 마의 메탄올 추출물을 용매 분획별로 항균력을 조사한 결과, 마 헥산 추출물은 3균주와 비교한 결과 특이적으로 S. "whms에서만 항균력 이 있었고 P. gingivalis, S. aureus 2균주에 대해 항균력 이 나타나지 않았다. S.
- 05). 0.25 mg/ml의 농도에서는 3시간 동안 균수가 초기와 유사하였으나, 6시간 이후부터 시간이 지남에 따라 통계적으로 유의하게 감소되었고 24시간 이후 완전 사멸하였다 (pE0.05). 또한 0.
- 05). 12시간부터 모든 군에서 유의한 차이를 보여, 농도의존적 유의한 생균감소를 보았으며, 24시간 이후에는 0.1 mg/ml과 비교한 결과 0.25와 0.5 mg/ml에서 완전사멸을 보여 농도의존적 시간 의존적으로 생균감소를 보여 통계학적 유의성을 나타내었다(pE0.05). 이 실험의 결과, 0.
- 2>및<그림 1>과 같다. S. mutams에는 특이적으로 마의 헥산분획 추출물에서 항균력이 가장 우수하였으나 P. gingivalis, S. aureus 2종에 서는 항균력이 없었다. 분획별로는 헥산에서 가장항균력 이 강하였으며 S.
- 05). 또한 0.5 mg/ml의 농도에서는 3시간부터 감소하기 시작하여 24시간 이후 완전사멸하여 시간이 지남에 따라 통계적으로 유의하게 감소됨을 보였다. 마의 헥산 추출물의 농도가 증가함에 따라 농도 의존적으로 S.
- mutnns의 생균수를 측정한 결과는<그림 2>와 같다. 마 헥산 추출물을 첨가하지 않은 배지의 대조군에는 3시간 이후부터 급격히 균수가 증가하기 시작하여 6시간부터 통계적으로 유의하게 증가하였다(pE0.05). 한편, 마 헥산 추출물을 0.
- 마 헥산 추출물의 S. vwtms에 대한 최소성장 억제농도(minima] inhibitory concentration; MIC)를 측정한 결과 마가 0.25 mg/ml 나타났다. 오미 자의 헥 산 추출물에서 S.
- 1>과 같다. 마는 S. mutanse 대해 강한 항균성 이 나타났으며 P. gingivalis, S. aureus 2종의 균주에 대해 항균성이 나타나지 않았다.
- 25 mg/ml이었다. 마의 헥산 추출물의 S. m/sis 에 대한 시간, 농도별 생균수를 비교해본 결과 6시간 이후 0.1, 0.25, 0.5 mg/ml 모두에서 대조군과 비교하여 유의하게 감소하였고 24시간 이후 0.1 mg/ml과 비교 시 0.25, 0.5 mg/ml에서 각각 통계적으로 유의하게 감소됨을 확인하였다.
- 5 mg/ml의 농도에서는 3시간부터 감소하기 시작하여 24시간 이후 완전사멸하여 시간이 지남에 따라 통계적으로 유의하게 감소됨을 보였다. 마의 헥산 추출물의 농도가 증가함에 따라 농도 의존적으로 S. mutans 의 생균수가 감소되었다. 통계학적인 분석결과, 시간의존적 농도별 생균수는 1시간까지는 유의성이 없었으나 3시간 이후부터는 0.
- aureus 2종에 서는 항균력이 없었다. 분획별로는 헥산에서 가장항균력 이 강하였으며 S. muhms에 가장 항균력이 우수하였다. 전형오는9)오미자의 헥산 추출물이 S.
- 05). 이 실험의 결과, 0.25 mg/ml 농도에서 24시간 이후 균이완전 사멸한 것은 최소성장억제 농도 (MIC) 가 0.25 mg/ml인 것과 일치하였다.
- mutans 의 생균수가 감소되었다. 통계학적인 분석결과, 시간의존적 농도별 생균수는 1시간까지는 유의성이 없었으나 3시간 이후부터는 0.5 mg/ml에서만 유의하게 감소되었으며, 6시간 이후 0.1, 0.25, 0.5 mg/ml 모두에서 대조군과 비교하여 유의하게 감소되었다(pE0.05). 12시간부터 모든 군에서 유의한 차이를 보여, 농도의존적 유의한 생균감소를 보았으며, 24시간 이후에는 0.
후속연구
- mutams에 성장억제효과가 나타났다고 보고하였다. 이와 같은 선행연구에서는 마보다 모두 낮은 농도에서도 성장억제를 보인 것으로 보아 이들은 순수 물질을 분리하여 측정한 결과이므로 마 또한 순수 물질을 분리, 동정하여 실험한다면 더 낮은 농도에서도 성장억제력을 얻을 수 있을 것으로 생각된다.
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