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문제 정의
- cerez/s의 효율적인 관리 및 저감화를 위한 연구가 이루어 졌으나 아직 이에 대한 연구가 더 필요한 실정이라고 사료된다9). 따라서 본 연구에서는 시중에서 유통되고 있는 선식을 수거하여 제품 중의 B. cerens를 정 량함으로서 오염 수준을 파악하고자 하였으며, 선식에서 분리한 균주의 생화학적 특성을 규명하고 이에 따른 독소 형태를 파악하고자 하였다. 또한 저감화를 위한 방안의 일환으로 선식의 제조 과정에서 B.
- 선식에서 분리한 B. cerez/s의 생화학적 특성을 통해서 독소 형태를 알아보고자 하였다. Table 2와 같이 BCET- RPLA를 이용하여 enterotoxiii을 시험한 결과 총 57점 중 42점 에서 양성 (90.
제안 방법
- 0.85 % sodium chloride와 5 %(v/v) defibrinated나 oxalated blood가 함유된 Nutrient agar (Merck, Germany)에 분리 균주를 도말하여 30℃에서 48시간 배양 후 [3-hemolysis를 확인하였다'2).
- B. cere“s의 전분 가수분해를 알아보기 위하여 Nutrient agar (Merck, Germany)에 가용성 전분을 0.2%(w/v) 첨가하고 이에 분리 동정한 균주를 도말하여 3WC에서 48시간 배양하였다. Lugol's liquor를 이용하여 자란 집락 주위에 가하여 clear zone이 있는 균주를 전분 가수분해 양성으로 판정하였다4).
- 2%(w/v) 첨가하고 이에 분리 동정한 균주를 도말하여 3WC에서 48시간 배양하였다. Lugol's liquor를 이용하여 자란 집락 주위에 가하여 clear zone이 있는 균주를 전분 가수분해 양성으로 판정하였다4).
- 균질화 한 시험액을 MYP agar (Merck, Germany) 5매에 200 B씩 도말한 뒤 301에서 24시간 배양 한 후 혼탁한 환을 가지며 lecithinase# 분해한 분홍색 집락을 선별 계수하였다. 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 Nutrient agar (Merck, Germany) 에접종하고 30℃에서 24시간 배양 한 후 VITEK2 (Biome- rieux, France)를 이용하여 동정하였다. 동정이 확인된 균수에 희석배수를 곱하여 최종 집락수를 산정하였다.
- 균질화 하였다. 균질화 한 시험액을 MYP agar (Merck, Germany) 5매에 200 B씩 도말한 뒤 301에서 24시간 배양 한 후 혼탁한 환을 가지며 lecithinase# 분해한 분홍색 집락을 선별 계수하였다. 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 Nutrient agar (Merck, Germany) 에접종하고 30℃에서 24시간 배양 한 후 VITEK2 (Biome- rieux, France)를 이용하여 동정하였다.
- 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 Nutrient agar (Merck, Germany) 에접종하고 30℃에서 24시간 배양 한 후 VITEK2 (Biome- rieux, France)를 이용하여 동정하였다. 동정이 확인된 균수에 희석배수를 곱하여 최종 집락수를 산정하였다.
- cerens를 정 량함으로서 오염 수준을 파악하고자 하였으며, 선식에서 분리한 균주의 생화학적 특성을 규명하고 이에 따른 독소 형태를 파악하고자 하였다. 또한 저감화를 위한 방안의 일환으로 선식의 제조 과정에서 B. cerez/s의 열처리 과정에 대한 사멸 정도를 측정하였다.
- cereus 가 검출되지 않은 선식을 UV하에서 20분간 방치한 후 이에 일정 량의 포자를 접종하여 중분히 균질화한 다음 초기접종 균수를 확인하고 tryptic soy broth 방법과 동일한 온도와 시간 조건에 따라 저감화 시험을 하였다. 선식에 포함되어 있는 다른 균주를 고려해서 MYP (Merck, Germany) 평판을 이용하여 집락수를 산정하였다.
- 선식을 이용한 사멸률 시험은 정성 시험을 통해 B. cereus 가 검출되지 않은 선식을 UV하에서 20분간 방치한 후 이에 일정 량의 포자를 접종하여 중분히 균질화한 다음 초기접종 균수를 확인하고 tryptic soy broth 방법과 동일한 온도와 시간 조건에 따라 저감화 시험을 하였다. 선식에 포함되어 있는 다른 균주를 고려해서 MYP (Merck, Germany) 평판을 이용하여 집락수를 산정하였다.
- 배양액을 3, 000 rpm에서 20분간 원심 분리하여 상등액을 시험 용액으로 사용하였다. 시험 용액은 Bacillus cereus enterotoxin reversed passive latex agglutination(BCET-RPLA)kit (Oxoid England)를 사용하여 각각 감작 latex와 대조 latex 를 첨가하여 10분간 교반한 후, 20 ℃에서 18~20시간 방치 후 latex의 침강상을 육안으로 관찰하여 결과를 판정하였다.
대상 데이터
- 시료는 매장에서 임의적으로 곡식을 선정하여 직접 갈아서 제조한 제품을 선정하였다. B. cereus (ATCC 11778)은 한국미생물보존센터 (KCCM)에서 분양하여 사용하였다.
- 국내 시중에서 판매하고 있는 선식을 2006년 5월부터 12월까지 70점, 2007년 5월부터 12월까지 91점을 구입하여 시료로 사용하였다. 시료는 매장에서 임의적으로 곡식을 선정하여 직접 갈아서 제조한 제품을 선정하였다.
- 시료로 사용하였다. 시료는 매장에서 임의적으로 곡식을 선정하여 직접 갈아서 제조한 제품을 선정하였다. B.
이론/모형
- 만들어진 포자는 tryptic soy broth (Merck, Germany)에 접종하여 75 ℃, 80 ℃, 85 ℃, 90 ℃ 의 각 온도에서 시간대별로 water bath (Vison, Korea) 에서열처리 한 후에 바로 냉각하였다. 냉각 후 포자 시험액을일정 농도로 희석 후 Plate count agar (Merck, Germany)에 3 평판씩 분주하여 혼합희석평판배양법을 이용하였다. 시험 평판은 30℃에서 24시간 배양한 후에 집락 수를 산정하였다.
성능/효과
- 0 %였다. Emetic toxin을 가진 B. cerens로 예상되는 균주의 생화학적 특성은 enterotoxin 음성이며 starch hydrolysis 와 hemolysis 음성인 균주로'이총 57점 중 3점 (5.3 %) 이검출되었다. 이 3점의 시료의 정량 결과가 두 점의 시료는 80 CFU/g이 검출되었고 다른 한 점의 시료는 160 CFU/g 이 검출되어 Infective dose가 105-108cells/ emetic toxin에 의한 식중독이 발생하므로 상대적으로 발병률은 낮은 것으로 보였다.
- cerez/s의 생화학적 특성을 통해서 독소 형태를 알아보고자 하였다. Table 2와 같이 BCET- RPLA를 이용하여 enterotoxiii을 시험한 결과 총 57점 중 42점 에서 양성 (90.3 %)으로 대부분의 분리 균주는 entero- toxin을 생성함을 알 수 있었다. 이는 Sarrias 등이 Spanish 쌀인 곡류에 대해서 실험한 결과와 유사하였다.
- cereusA 검출되었다. 검출된 시료 57점 중에 100CFU/g 미만은 21점이고 100J, 000CFU/g 미만은 33 점, 1,000 CFU/g 이상은 3점으로 검출 되었다. 이는 박 등이 보고한 생식의 10°-103CFU/g 정도의 오염도와는 유사한 수준으로 확인되었으나 조 등'4)이 보고한 생식의 양성률 43%보다는 낮은 수치를 나타냈다.
- 이는 선식의 경우 제조 과정상 가열 처리 과정을 거치므로 생식에 비해 낮은 양성 수치를 나타나는 것으로 사료된다. 그러나 본연구에서 정량한 시료 중 3점에서 1,000CFU/g 이상이 검출되어 B. cere가 가열처리에서도 사멸하지 않음을 알 수 있었다. 또한 가열 처리 후 건조를 통해서 낮은 수분 활성도를 가지는 선식의 특성에도 불구하고 B.
- ceres에 의한 위해성이 문제시 되고 있다. 따라서 시중에서 유통되고 있는 선식에 대한 B. ceres정량을 통해오염 수준을 파악한 결과 선식 16점 중 57점 (35.4 %)에서 B. cereus가 검출되었고 검출된 시료 57점 중에 100CFU/g 미만은 21점, 100-1000CFU/g 미만은 33점, 1, 000CFU/g 이상은 3점이 검출되었다. 선식에서 분리한 B.
- cereus가 검출되었고 검출된 시료 57점 중에 100CFU/g 미만은 21점, 100-1000CFU/g 미만은 33점, 1, 000CFU/g 이상은 3점이 검출되었다. 선식에서 분리한 B. cere 의 생화학적 특성을 통해 독소 형태를 알아본 결과는 enterotoxin 양성이 93 %이며 emetic toxin 의심 균주는 5.3 %였다. 이러한 B.
- 3 %) 이검출되었다. 이 3점의 시료의 정량 결과가 두 점의 시료는 80 CFU/g이 검출되었고 다른 한 점의 시료는 160 CFU/g 이 검출되어 Infective dose가 105-108cells/ emetic toxin에 의한 식중독이 발생하므로 상대적으로 발병률은 낮은 것으로 보였다. 하지만 제조 과정에서 48℃(하로 온도가떨어지면 포자가 발아해서 B.
- 3 %였다. 이러한 B. cereus의 저감화를 위한 방안의 일환으로 선식의 제조 과정에서 B. cerei/s의 열처리 과정에 대한 사멸 정도를 측정하였다 측정한 결과 tryptic soy broth에 포자를 접종한 결과는 75, 80, 85, 90에서 40.3분, 8.8분, 3.3분, 1.1 분이였다. 용질에 따라 수분 활성도가 낮아지면 열에 대한 저항성이 높아지므로 선식에 시료에 대한 D-value를 시험 한 결과 75 ℃, 80 ℃, 85 ℃, 90P에서 37.
후속연구
- cereus는 가열 처리로서 저감화 하기 어려운 것으로 보인다. 따라서 선식을 제조 할 때 원재료에서 B. cerez/s에 대한 오염을 제거 시키는 방안을 모색하여야 할 것으로 사료된다.
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