This study was carried out to search the natural antioxidants from the 36 medicinal plants. $IC_{50}$ values of linoleic acid peroxidation inhibition to the BHA, BHT and ${\alpha}-tocopherol$ showed $7.2{\mu}g/ml$, $7.3{\mu}g/ml$, and $26.6{\mu}g/ml$<...
This study was carried out to search the natural antioxidants from the 36 medicinal plants. $IC_{50}$ values of linoleic acid peroxidation inhibition to the BHA, BHT and ${\alpha}-tocopherol$ showed $7.2{\mu}g/ml$, $7.3{\mu}g/ml$, and $26.6{\mu}g/ml$, but hexane extract of Zingiber officinale showed $13.2{\mu}g/ml$, EtOAc extracts of Phellinus linteus, Morus alba, Zingiber officinale and butanol extract of Diospyros kaki showed $15.9{\mu}g/ml$, $16.9{\mu}g/ml$, $20.1{\mu}g/ml$, and $21.5{\mu}g/ml$ respectively. $IC_{50}$ values of DPPH radical scavenging activity of BHA, BHT and $\alpha$-tocopherol showed $14.9{\sim}27.7{\mu}g/ml$, but EtOAc extract of Paeonia suffruticosa showed the lowest $6.5{\mu}g/ml$ than those of other extracts, EtOAc extracts of Camellia sinensis, Salvia miltiorrhiz, and Phellinus linteus showed $8.0{\mu}g/ml$, $11.5{\mu}g/ml$, and $13.0{\mu}g/ml$ respectively.
This study was carried out to search the natural antioxidants from the 36 medicinal plants. $IC_{50}$ values of linoleic acid peroxidation inhibition to the BHA, BHT and ${\alpha}-tocopherol$ showed $7.2{\mu}g/ml$, $7.3{\mu}g/ml$, and $26.6{\mu}g/ml$, but hexane extract of Zingiber officinale showed $13.2{\mu}g/ml$, EtOAc extracts of Phellinus linteus, Morus alba, Zingiber officinale and butanol extract of Diospyros kaki showed $15.9{\mu}g/ml$, $16.9{\mu}g/ml$, $20.1{\mu}g/ml$, and $21.5{\mu}g/ml$ respectively. $IC_{50}$ values of DPPH radical scavenging activity of BHA, BHT and $\alpha$-tocopherol showed $14.9{\sim}27.7{\mu}g/ml$, but EtOAc extract of Paeonia suffruticosa showed the lowest $6.5{\mu}g/ml$ than those of other extracts, EtOAc extracts of Camellia sinensis, Salvia miltiorrhiz, and Phellinus linteus showed $8.0{\mu}g/ml$, $11.5{\mu}g/ml$, and $13.0{\mu}g/ml$ respectively.
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문제 정의
본 연구는 천연 항산화제를 찾아내기 위해 36종의 약용식물 분획물 144개를 대상으로 항산화활성을 측정 비교하였다. 지질과산화 억제 효과는 1.
본 연구에서는 보다 안전하고 기존의 천연 항산화제의 단점을 보완할 수 있는 새로운 천연 항산화제를 개발하기 위하여 약용식물 32종과 약용버섯 4종의 methanol 주줄물의 hexane, ethyl acetate, butanol, 물 분획물을 대상으로 항산화력을 비교 조사하였다.
제안 방법
0 ml에 용해하여 사용하였다. 각 시료 용액 100 μ1를 시험관에 첨가 한 후 ethanol 4.0 ml을 넣고 2×10-1M DPPH용액 1.0 ml을 가한 후 vortex mixer로 교반하였고, 실온에서 30분간 반응시키고 517nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거능(%)을 나타내었으며, 분획물의 활성 정도를 정확하게 파악하기 위하여 IC50 값은 DPPH radical 소거능(%)이 75% 이상인 것을 대상으로 구하였다. 대조구는 시료 대신에 ethanol 100 μl을 취하여 실험 하였으며, positive controle BHA, BHT, a-tocopherol을 사용하여 활성을 비교하였고, 각 실험은 3회 반복하여 실시하였다.
1 ml)와 혼합하여 3분이 지난 후에 500nm에서 흡광도를 측정하여 산화 양상을 관찰하였다. 결과는 5일째의 흡광도를 기준으로 하여 지질 과산화 억제활성(%)을 나타내었으며, 분획물의 활성 정도를 정확하게 파악하기 위하여 지질과산화 억제활성 90% 이상인 것을 대상으로 IC50값을 구하였다. 대조구는 시료대신ethanol를 첨가하였으며, positive controle BHA, BHT, a-tocopherol을 사용하여 활성을 비교하였고, 각 실험은 3회 반복하여 실시하였다.
0 ml을 가한 후 vortex mixer로 교반하였고, 실온에서 30분간 반응시키고 517nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거능(%)을 나타내었으며, 분획물의 활성 정도를 정확하게 파악하기 위하여 IC50 값은 DPPH radical 소거능(%)이 75% 이상인 것을 대상으로 구하였다. 대조구는 시료 대신에 ethanol 100 μl을 취하여 실험 하였으며, positive controle BHA, BHT, a-tocopherol을 사용하여 활성을 비교하였고, 각 실험은 3회 반복하여 실시하였다.
결과는 5일째의 흡광도를 기준으로 하여 지질 과산화 억제활성(%)을 나타내었으며, 분획물의 활성 정도를 정확하게 파악하기 위하여 지질과산화 억제활성 90% 이상인 것을 대상으로 IC50값을 구하였다. 대조구는 시료대신ethanol를 첨가하였으며, positive controle BHA, BHT, a-tocopherol을 사용하여 활성을 비교하였고, 각 실험은 3회 반복하여 실시하였다.
대한 억제활성 검정은 Inatani⑹ 등의 방법에 따라 실시하였다. 시료(1.0 mg)와 ethanol( 1.0 ml> 혼합하고, ethanol 에 녹인 2.51% linoleic acid(2.0 ml), 0.05 M phosphate buffer(pH 7.0, 4.0 ml), 증류수(1.9 ml), ethanol(1.0 ml) 및 10% tween 20(0.1 ml)을 첨가하여 40℃의 암소에 방치하였다. 이 반응액을 매 24시간마다 0.
1 ml)을 첨가하여 40℃의 암소에 방치하였다. 이 반응액을 매 24시간마다 0.1 ml을 취해 75%ethanol(9.7 ml), 30% ammonium thiocyanate(0.1 ml), 3.5% HC1에 녹인 0.02 M ferrous chloride(0.1 ml)와 혼합하여 3분이 지난 후에 500nm에서 흡광도를 측정하여 산화 양상을 관찰하였다. 결과는 5일째의 흡광도를 기준으로 하여 지질 과산화 억제활성(%)을 나타내었으며, 분획물의 활성 정도를 정확하게 파악하기 위하여 지질과산화 억제활성 90% 이상인 것을 대상으로 IC50값을 구하였다.
대상 데이터
본 실험에 사용된 약용식물 및 약용버섯은 총36종으로 익산 소재 원광대학교 자연식물원에서 채집하였거나 한약재상에서 구입하여 동정한 것으로 음건한 후 잘게 썰어서 1.0 kg씩을 실온에서 methanol에 3일 동안 침지한 후 여과하여 40℃에서 rotary vacuum evaporator (Eyela, Japan)로 감압농축 하였으며, methanol 추출물을 증류수에 현탁 시 킨 다음 hexane, ethyl acetate, butanol의 순으로 3회 용매분획을 실시하여 각각의 분획물을 얻었다.
추출물 조제에 사용된 methanol 1급 시약을 사용하였으며 분석에 사용된 DPPH(l, l-diphenylpiciyl- 2-hydrazyl), linoleic acid, ammonium thiocyanate, a- tocopherol, BHA(butylated hydroxy anisole), BHT(butylated hydroxytokse)는 Sigma 제품을 그리고 기타 시약은 Junsei 사의 특급 제품을 사용하였다. 흡광도 측정은 spectronic 21D spectrophotometer(Milton Roy, USA)를 사용하였다.
이론/모형
linoleic acid의 지 질과 산화에 대한 억제활성 검정은 Inatani⑹ 등의 방법에 따라 실시하였다. 시료(1.
성능/효과
75% 이상의 DPPH radical 소거능을 보인 17개의 분획물들에 대한 활성을 정확하게 파악하기 위하여 IC50 값을 측정한 결과는 Table Ⅲ과 같은데, 모란 EtOAc 가용부의 IC50 값이 6.5 mg/ml로 가장 낮은 값을 보여 활성이 가장 좋았으며, 녹차 EtOAc 8.0 mg/ml, 단삼 EtOAc 11.5 mg/ml, 상황버섯 EtOAc 가용부는 13.0 mg/ml로 a-tocopherol 14.9 mg/ml보다 낮은 IC50 값을 나타내어 매우 좋은 활성을 보였고, 가죽나무 EtOAc 가용부 등 6개의 분획물도 30.0 mg/ml 미만으로 BHA 20.5 mg/ml, BHT 27.7 mg/ml과 비슷한 활성을 나타내었으며, 녹차 butanol 가용부 등 7개의 분획물은 75.0 mg/ml 미만의 활성을 보였다.
5 μg/ml을 나타냈다. DPPH radical 소거능은 BHA, BHT, a-tocopherol의 IC50 값 14.9~27.7 ㎍/ml에 대하여 모란 EtOAc 가용부가 IC50 값 6.5 ㎍/ml로 가장 낮은 값을 보였으며, 녹차EtOAc 8.0 |ig/ml, 단삼 EtOAc 11.5(ig/ml, 상황버 섯 EtOAc 13.0 |ig/ml 나타내었다.
4% 보다는 높은 지질과산화 억제활성을 나타내었다. 가죽나무 EtOAc 가용부를 비롯한 36개의 분획물이 90.0%이상의 활성을 보여 a-tocopherol 보다 높거나 비슷한 활성을 보였으며, 마황 hexane 가용부 등 23개의 분획물은 80.0% 이상의 활성을 그리고 녹차 butanol 가용부 등 22개의 분획물은 50.0% 이상의 활성을 나타내었다. 나머지 분획물은 50.
0% 이상의 활성을 나타내었다. 각 항산화활성에 대한 IC50 값을 측정한 결과 지질과산화억제 활성은 BHA, BHT, a-tocopherol의 IC50 값 7.2~26.6 ㎍/ml에 대하여 생강 hexane 가용부의 IC50값이 13.2(ig/ml로 가장 낮았으며, 상황버섯 EtOAc 15.9 |ig/ml, 상백피 EtOAc 16.9(ig/ml, 생강 EtOAc 20.1 pig/ml, 감나무 butanol 21.5 μg/ml을 나타냈다. DPPH radical 소거능은 BHA, BHT, a-tocopherol의 IC50 값 14.
같다. 단삼 EtOAc 가용부가 91.9%로 가장 높게 나타났으며, 인동덩굴 EtOAc 90.7%, 스테비 아 EtOAc 87.1%, 오이풀 EtOAc 85.8%, 모란 EtOAc 85.3%, 녹차 butanol 가용부 등 8개의 분획물도 80.0% 이상의 활성을 보여 a-tocopherol 79.6%, BHA 76.5%, BHT 71.5% 보다 높은 활성을 나타내었다. 오동나무 EtOAc 가용부 등 5개의 분획물은 75.
KM, 값을 측정한 결과는 Table II와 같다. 지질과산화 억제 활성의 IC50 값은 생강 hexane 가용부가 13.2 ㎍/ml로 가장 낮았으며, 상황버 섯 EtOAc 15.9/zg/mX, 뽕나무 EtOAc 16.9 |ig/ml, 생 강 EtOAc 20.1(ig/ml, 감나무 21.5 μg/ml로 BHA 7.2 (ig/ml, BHT 7.3 ㎍/ml보다는 높았지 만 a- tocopherol 26.3 pig/ml 보다는 IC50 값이 낮아 활성이 높게 나타났고, 녹차 hexane 가용부 등 6개의 분획물이 50.0㎍/ ml 미만에서 높은 활성을 보였다. 천궁 hexane 가용부 등 10개의 분획물이 100.
지질과산화 억제 효과는 1.0mg/ml의 농도에서 생강 hexane 가용부 등 44개 분획물이 90.0% 이상의 활성을 보였고, DPPH radical 소거능은 단삼 EtOAc 가용 부 등 17개 분획물이 75.0% 이상의 활성을 나타내었다. 각 항산화활성에 대한 IC50 값을 측정한 결과 지질과산화억제 활성은 BHA, BHT, a-tocopherol의 IC50 값 7.
후속연구
본 실험에 사용된 추출물은 분리정제되지 않은 조 추출물로서 추출물에 포함된 수많은 물질 중 어떤 특정 성분이 항산화 효과를 나타내었는지를 알기 위해서 분리정제가 필요하며, 분리정제된 물질을 사용하면 더욱 낮은 농도에서 강력한 항산화 효과를 나타낼 수 있는 천연 항산화제로 사용 가능할 것으로 보인다.
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