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문제 정의
- 직접 수거하여 검사에 사용하였다. 모든 시료는 축산물의 가공기준 및 성분규격의 미생물시험을 위한 시료 채취 방법에 준하여 실시하였다.
- 철저한 위생관리가 중요하다. 이에 본 연구에서는 2010년 국내에서 제조되고 있는 조제분유, 성장기용 조제분유, 조제우유 등 조제유류 전 품목에 대하여 위해 미생물에 대한 모니터 링을 실시하였으며 , 그 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
- B. cereus 균수 측정은 10배 시험용액을 10-2,10-3까지 단계별로 희석액을 만든 후 Mannitol egg yolk polymyxin agar (BD, USA)에 단계별 희석용액 0.2 ml을 5장씩 도말하여 3(TC에서 24시간 배양 후 집락주변에 lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수하였다. 최종균 확인은 API kit (BioMerieux, France)와 Vitek II compact system (BioMerieux, France)을 이용한 생화학검사를 실시하였다.
- 증균 배양액을 Baird-Parker 배지 (Biomerieux, France)에 도말하여 37<3에서 24시간 배양하였다. Baird-Parker배지에 자란 의심집락을 선택하여 그람염색을 실시하고 혈액배지에서 B-용혈성을 확인한 후 coulase plasma rabbit with EDTA (BD, USA)로 coagulase test를 실시하여 응집이 일어나는 집락에 대하여 Vitek II compact system으로 확인하였다.
- 즉, Ent. sakazakii 균의 검출을 위하여 시료 100 g 을 900 ml의 멸균증류수에 접종하여 3SC에서 18시간 동안증균 배양 한 후 배양액 10ml를 90ml의 Enterobacteriaceae enrichment broth (Oxoid, UK)에 첨가하여 36℃에서 18시간증균 배양하였다. 증균 배양액을 Chromogenic Ent.
- 대장균군과 Ent. sakazakii 등 위해 미생물 9종에 대한 오염실태를 조사하였다. 그 결과 멸균제품인 조제우유는 일반 세균수, 대장균군을 비롯하여 Ent.
- sakazakii 제어를 위한 온도관리에 대한 보고가 있었다. 그 후 황 등(2008)7)에 의하여 국내에서 생산 유통되고 있는 영유아용 분말 조제분유의 미생물학적 품질을 평가하고, Salmonella spp, Bacillus cereus, Enterobacteriaceae 등의 위해 세균에 대한 오염 현황을 조사하였다. 그에 따른 후속 조치로 2007년에는 Ent.
- 대장균군 측정은 0.1, 0.01 및 0.001 ml의 시험용액을 각각 3개의 Brilliant green bile broth 2% (BD, USA)에 접종하여 35±1(2에서 48시간을 배양하여 발효관에 가스가 발생하는 것을 Eosin methylene blue agar (Oxoid, UK)에 계대배양하였다. 의심집락에 대하여 그람염색을 실시하여 그람음성, 무아포성 간균임을 확인한 후 대장균군수를 산정하였다.
- monocytogenese 검줄은 시료액 25 ml를 Listeria enrichment broth (BD, USA) 225 ml에 접종시 켜 35± 1(2에서 24 시간 동안 증균 배양하였다. 배양액을 Listeria selective agar base (Oxoid, UK)에 획선 접종시켜 35± r>C에서 24시간 배양하였다 의심집락에 대해서 그람염색으로 그람양성 간균을 확인하고 혈액배지에서 μ-용혈성을 확인한 후 Vitek II compact system으로 최종 확인하였다.
- sakazakii agar (Oxoid, UK)에 접종을 해서 36℃, 24시간 배양을 하였다. 의심집락에 대하여 Vitek II compact system으로 확인하였다.
- 증균된 균액을 TSC agar (Merk, Germany)에 도말하여 37P에서 18~24시간 혐기 배양하였다. 의심집락에 대하여 그람염색을 실시하고 Vitek II compact system으로 확인한 후 Table 1에서와 같은 PCR법을 실시하여 1)최종 확인하였다.
- 001 ml의 시험용액을 각각 3개의 Brilliant green bile broth 2% (BD, USA)에 접종하여 35±1(2에서 48시간을 배양하여 발효관에 가스가 발생하는 것을 Eosin methylene blue agar (Oxoid, UK)에 계대배양하였다. 의심집락에 대하여 그람염색을 실시하여 그람음성, 무아포성 간균임을 확인한 후 대장균군수를 산정하였다.
- 5 pg/ml)가 첨가된 Sorbitol MacConkey agar에 도말하여 37℃에서 24시간 배양하였다. 의심집락을 MacConkey Agar 및 EMB agar에 획선하여 24시간 배양한 후 MacConkey agai에서 lactose 분해균 및 EMB agar에서 녹색성의 금속 광택 집락에 대해 Vitek II compact system으로 대장균을 확인하고 0157 항혈청을 이용한 응집반응을 실시한 후 응집이 일어나는 균에 대해서 Jung (1998) 등)의 방법에 의한 PCR법을 실시하여 최종 확인하였다.
- cereus 균수 측정에 대한 검사는 축산물의 가공기준 및 성분규격의 미생물 시험법에 준하여 실시하였다9). 즉, 조제유류에서의 일반세균수 검사는 시험용액을 10배 단계로 희석액을 만든 후시험용액 1 ml과 각 단계별 희석액 1 ml를 세균수 건조필름 (3M Aerobic Count Plate, USA)에 접종한 후 잘 흡수시키고 35±1C에서 48시간 배양 후 생성된 붉은 집락수를 계산하였다.
- 2 ml을 5장씩 도말하여 3(TC에서 24시간 배양 후 집락주변에 lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수하였다. 최종균 확인은 API kit (BioMerieux, France)와 Vitek II compact system (BioMerieux, France)을 이용한 생화학검사를 실시하였다.
- 각각의 증균 배양액을 Salmonella chromogenic agar (Oxoid, UK), Rambach agar (Merk, Germany) 및 XLD agar (BD, USA)에 도말한 후 36±1。(3에서 20~24시간 배양하였다. 평판별로 의심되는 집락에 대하여 Triple sugar iron agar (BD, USA) 및 lysine iron agar (BD, USA) 사면배지에 천자하여 37℃, 20~24시간 배양한 후 살모넬라균으로 추정되는 균에 대하여 그람음성의 간균임을 확인하고 Vitek II compact system으로 최종 확인하였다.
대상 데이터
- 2010년 국내 4개 제조업체에서 제조한 조제분유 190개, 성장기용 조제분유 95개, 조제우유 15개 등 300개 조제 유류를 수집하여 일반세균, 대장균군 및 위해세균에 대한 오염실태를 조사하였다. 그 결과 멸균제품인 조제우유는 일반세균수, 대장균군을 포함하여 모든 검사에서 음성을 나타내었다.
- 2010년 국내에서 제조한 조제분유 190개, 성장기용 조제분유 95개, 조제우유 15개 등 300개를 수집하여 일반세균, 대장균군 오염실태를 조사하였다. 그 결과 멸균제품인 조제 우유는 일반세균수, 대장균군 모두에서 음*성을 나타내었다.
- 본 실험에 사용한 조제유류는 2010년 1월부터 6월까지 국내 4개의 제조회사에서 생산한 조제분유 190개, 성장기용 조제분유 95개, 조제우유 15개 등 300개 제품으로서 제조공장에서 직접 수거하여 검사에 사용하였다. 모든 시료는 축산물의 가공기준 및 성분규격의 미생물시험을 위한 시료 채취 방법에 준하여 실시하였다.
이론/모형
- sakazakii 등 6종 병원성 미생물에 대한 검사는 죽산물의 가공기준 및 성분규격의 미생물시험법에 준하여 실시하였다 9). 즉, Ent.
- 조제유류에서의 일반세균수, 대장균군, B. cereus 균수 측정에 대한 검사는 축산물의 가공기준 및 성분규격의 미생물 시험법에 준하여 실시하였다9). 즉, 조제유류에서의 일반세균수 검사는 시험용액을 10배 단계로 희석액을 만든 후시험용액 1 ml과 각 단계별 희석액 1 ml를 세균수 건조필름 (3M Aerobic Count Plate, USA)에 접종한 후 잘 흡수시키고 35±1C에서 48시간 배양 후 생성된 붉은 집락수를 계산하였다.
성능/효과
- aureus, L monocytogenes 4종의 식중독 유발 세균에 대한 검사에서도 모두 음성으로 나타났다. categoiy C 세균 중 B. cens는 조제분유와 성장기조제분유에서 전체 시료 중 12개 제품에서 g당 10~100의 수준의 균수가 검출되었다 (Table 4). 하지만 B.
- safaiza에대한 검사에서는 모두 불검출로 조사되었다. category C group 인 C. perfringens, E. coll 0157, S. aureus, L. monocytogenes 4종의 식중독 유발 세균에 대한 검사에서도 모두 음성으로 나타났다. category C 세균 중 B.
- 오염실태를 조사하였다. 그 결과 멸균제품인 조제 우유는 일반세균수, 대장균군 모두에서 음*성을 나타내었다. 이에 반하여 비멸균제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에서의 일반세균수는 Table 2에서와 같다.
- 조사하였다. 그 결과 멸균제품인 조제우유는 일반세균수, 대장균군을 포함하여 모든 검사에서 음성을 나타내었다. 이에 반하여 비멸균제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에서의 일반세균수는 전체 시료 중 83.
- 그리하여 본 연구에서 비멸균제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에서 일반세균수를 조사한 바, 전체 시료 중 72.6%와 79.0%가 g당 10-100 c fii 나타내었으며, 72.6%와 79% 가 g당 10~lOOcih를 나타내었으며 모든 제품이 g당 1,000 cfij 이하를 나타내었다. 대장균군에 대한 검사에서는 전체 제품 중 조제분유와 성장기용 조제분유가 각각 3건(1.
- 6%와 79% 가 g당 10~lOOcih를 나타내었으며 모든 제품이 g당 1,000 cfij 이하를 나타내었다. 대장균군에 대한 검사에서는 전체 제품 중 조제분유와 성장기용 조제분유가 각각 3건(1.6%)와 1건(1.1%)이 검출되었으며, 그 수준은 국내 권장 기준에 모두 도달되었다. 또한, 조제분유와 성장기용 조제분유에 대한 B.
- 6%로 조사되어 모든 제품이 1,000cg 이하를 나타내었다. 대장균군에 대한 검사에서는 전체 제품 중 조제분유와 성장기용조제분유가 각각 3건(1.6%)과 1건(1.1%)이 검출되었으며, 그 수준은 3.6, 3.0, 9.1, 9.1 MPN/g 으로 조사되어 국내 기준 규격(n = 5, c=l, m = 0, M=10)에 모두 적합한 것으로 나타났다. 또한, FAO/WHO에서 category A 세균으로 분류하고 있는 Salmonella spp와 Ent.
- 또한, 본 연구에서 조사된 조제분유의 미생물 품질 분석 결과는 CODEX의 일반세균수 기준2)과 전 세계에서 수집한 조제분유 82개중 일반세균수가 10, 000 cfii/g를 초과한 시료가 3%로 조사한 성적'%과 비교하면 전반적으로 미생물 품질이 양호한 것으로 나타났다. 하지만 본 조사에서 일부 제품에서 식중독 유발 세균인 FAO/WHO category C 세균 중 비록 영유아 질병 유발에 직접적으로 확인되지 않았지만 포자형성 균인 B.
- 1%)이 검출되었으며, 그 수준은 국내 권장 기준에 모두 도달되었다. 또한, 조제분유와 성장기용 조제분유에 대한 B. cereus 검사에서는 전체 시료 중 6.3%와 12.6%가 검출되었으며, 모든 제품이 국내 권장 기준인 g당 100cfa 이하에 적합한 것으로 나타났다. 이러한 결과는 황 등(2008) 이 2007년에 국내에서 유통 중인 조제분유에 대한 일반세균수 조사에서 전체 평균이 1.
- cereus 미생물 검사에서 모두 음성을 나타내었다. 비멸균 제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에 있어서는 일반세균수, 대장균군, B. cefens를 제외하고는 모든 미생물 검사에서 음성을 나타내었다. 이러한 결과는 Muytjen 등 (1988)이 조제분유 중 Ent.
- 9%로 조사되는 등 모든 제품이 g당 l, 000cfu 미만을 나타내었다. 성장기용조제분유에 있어서도 조제분유와 유사하게 전체 시료 중 79.0%가 g당 10~lOOcfh, 100~LOOOcfii가 11.6%, 불검출이 5%로 조사되었다. 대장균군에 대한 검사에서는 전체 제품 중 조제분유와 성장기용 조제분유가 각각 3건(1.
- 그 결과 멸균제품인 조제우유는 일반세균수, 대장균군을 포함하여 모든 검사에서 음성을 나타내었다. 이에 반하여 비멸균제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에서의 일반세균수는 전체 시료 중 83.9%가 검출되었다. 조제분유는 전체 시료 중 72.
- ceres는 조제분유와 성장기 조제분유에서 전체 시료 중 12개 제품에서 g당 10-100 cfii 의 수준의 균수가 검출되었다. 이와 같이 조제유류의 오염지표 세균 및 위해세균에 대한 검사에서 모두 국내 기준에 적합한 것으로 조사되었다.
- 9%가 검출되었다. 조제분유는 전체 시료 중 72.6%가 g당 10~lOOcfii를, 100-1, 000 cfu7]- 7.9%로 조사되었으며, 성장기용 조제분유는 전체 시료 중 79.0%가 g당 1~lOOcfii를, 100-1,000 cfo 가 11.6%로 조사되어 모든 제품이 1,000cg 이하를 나타내었다. 대장균군에 대한 검사에서는 전체 제품 중 조제분유와 성장기용조제분유가 각각 3건(1.
- 이에 반하여 비멸균제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에서의 일반세균수는 Table 2에서와 같다. 즉 조제분유는 전체 시료 중 72.6%가 g당 10-100cfuS, 불검출이 19.5%, 100~1,000 cfb가 7.9%로 조사되는 등 모든 제품이 g당 l, 000cfu 미만을 나타내었다. 성장기용조제분유에 있어서도 조제분유와 유사하게 전체 시료 중 79.
후속연구
- a* 가 국내 관리 기준치인 g당 lOOcfu 이하에 근접하는 시료가 확인되어 이에 대한 좀 더 적극적이고 체계적인 대책 마련이 있어야 할 것으로 사료된다. 이와 더불어 향후에 CODEX에서 제조공정의 위생 수준을 검증하기 위한 지표로 새롭게 설정된 조제분유에서 의장 내 세균의 국내 검출율 파악 및 감소방안을 마련되어야 할 것으로 사료된다.
- 품질이 양호한 것으로 나타났다. 하지만 본 조사에서 일부 제품에서 식중독 유발 세균인 FAO/WHO category C 세균 중 비록 영유아 질병 유발에 직접적으로 확인되지 않았지만 포자형성 균인 B. a* 가 국내 관리 기준치인 g당 lOOcfu 이하에 근접하는 시료가 확인되어 이에 대한 좀 더 적극적이고 체계적인 대책 마련이 있어야 할 것으로 사료된다. 이와 더불어 향후에 CODEX에서 제조공정의 위생 수준을 검증하기 위한 지표로 새롭게 설정된 조제분유에서 의장 내 세균의 국내 검출율 파악 및 감소방안을 마련되어야 할 것으로 사료된다.
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