ADA는 밀가루 개량제로 사용기준이 설정되어 있는 식품첨가물이나 이의 사용량과 잔류량을 확인할 수 있는 시험분석법이 확립되어 있지 않은 상태임으로 사전 사후 안전관리를 위해서 ADA를 밀가루 및 빵류에서 분석 가능한 방법을 확립하고자 하였다. 식품 중 ADA의 분석을 위하여 컬럼, 이동상 조건, 전처리 조건, 기기조건 등을 검토하여 HPLC를 이용한 분석법을 확립하였으며, 개발된 분석법의 회수율, 분석법의 유효성 검증 등을 검토하였다. 회수율은 91.93~97.54%로 양호하였으며, 검출한계(LOD)는 0.02 mg/L의 농도이었고, 정량한계(LOQ)는 0.05mg/L의 농도이었다. 확립된 분석법에 의해 밀가루 등 51건, 빵류 59건에 대하여 ADA 함량을 분석한 결과 밀가루 1건에서 0.95 mg/kg의 농도로 검출되었으나 (검출율 : 2%), 빵류에서는 검출되지 않았다. 검출된 ADA의 양은 사용기준인 밀가루 1 kg당 45 mg에 비하여 매우 낮은 값을 나타내었다. 본 연구를 통하여 확립된 식품 중 ADA의 사후관리에 기여할 것으로 본다.
ADA는 밀가루 개량제로 사용기준이 설정되어 있는 식품첨가물이나 이의 사용량과 잔류량을 확인할 수 있는 시험분석법이 확립되어 있지 않은 상태임으로 사전 사후 안전관리를 위해서 ADA를 밀가루 및 빵류에서 분석 가능한 방법을 확립하고자 하였다. 식품 중 ADA의 분석을 위하여 컬럼, 이동상 조건, 전처리 조건, 기기조건 등을 검토하여 HPLC를 이용한 분석법을 확립하였으며, 개발된 분석법의 회수율, 분석법의 유효성 검증 등을 검토하였다. 회수율은 91.93~97.54%로 양호하였으며, 검출한계(LOD)는 0.02 mg/L의 농도이었고, 정량한계(LOQ)는 0.05mg/L의 농도이었다. 확립된 분석법에 의해 밀가루 등 51건, 빵류 59건에 대하여 ADA 함량을 분석한 결과 밀가루 1건에서 0.95 mg/kg의 농도로 검출되었으나 (검출율 : 2%), 빵류에서는 검출되지 않았다. 검출된 ADA의 양은 사용기준인 밀가루 1 kg당 45 mg에 비하여 매우 낮은 값을 나타내었다. 본 연구를 통하여 확립된 식품 중 ADA의 사후관리에 기여할 것으로 본다.
This study was conducted to establish a method to analyze azodicarbonamide (ADA) in wheat flour. A new method using high performance liquid chromatography (HPLC) was developed for the determination of ADA in wheat flour. The recovery rate was 91.93~97.54%. The limit of detection for ADA was 0.02 mg/...
This study was conducted to establish a method to analyze azodicarbonamide (ADA) in wheat flour. A new method using high performance liquid chromatography (HPLC) was developed for the determination of ADA in wheat flour. The recovery rate was 91.93~97.54%. The limit of detection for ADA was 0.02 mg/kg and the limit of quantification was 0.05 mg/kg. The monitoring results for ADA contents using the established methods showed that it was detected as the low value of 0.95 mg/kg in one of 51 flour samples (detection rate : 2%), but not detected in 59 bakery samples. The detected ADA level was suitable to its usage standard, compared to the standard (45 mg/kg). Although the detection rate was very low, the established analytical method of ADA will contribute to the management of ADA in processed foods such as wheat flour and bakery.
This study was conducted to establish a method to analyze azodicarbonamide (ADA) in wheat flour. A new method using high performance liquid chromatography (HPLC) was developed for the determination of ADA in wheat flour. The recovery rate was 91.93~97.54%. The limit of detection for ADA was 0.02 mg/kg and the limit of quantification was 0.05 mg/kg. The monitoring results for ADA contents using the established methods showed that it was detected as the low value of 0.95 mg/kg in one of 51 flour samples (detection rate : 2%), but not detected in 59 bakery samples. The detected ADA level was suitable to its usage standard, compared to the standard (45 mg/kg). Although the detection rate was very low, the established analytical method of ADA will contribute to the management of ADA in processed foods such as wheat flour and bakery.
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문제 정의
따.라서, 본 연구에서는 식품 중 ADA의 사용량을 측정하기 위하여 ADA를 분해하는 hidrazine을 사용하여 전처리를 하지 않고 밀가루에서 분석 가능한 방법을 확립하고자 하였다. 또한, 확, 립된 분석법을 이용하여 국내 유통 밀가루 및 빵류에 대해 함유량을 분석하였디-.
제안 방법
재현성에 문제가 없었으며 , 기본 용.리액。, 丄" : 용리가 ;, py K 제거하기 위하여 아세토니트릴로 기울기용리를 하였다. 위 이동상 조건에서 측정한 RT=5.
ADA을 분석하기 위해 사용된 HPLC 장비는 HPLC-PDA system (Beckmann Coutler, Germany)이었으며, UV 스펙트럼 측정을 위해서는 8453 지외/가시분광광도계 (Agilent Techno logies, Palo Alto, CA, USA)를 사용하였다. 밀가루 중 ADA 분석에 대한 크로마토그래피 분리를 위한 HPLC 분석조건은 다음과 같다.
ADA의 분석을 위하여 설정된 전처리 조건의 확인을 위하여 밀가부에 대하여 회수율을 즉정한 결과는 Table 3괴 길다 ADA는 현행 식품첨가물공전의 사용기준에 밀가루에 사용하도록 규정되어 있어 밀가루를 대상으로 회수율을 측정하였다. 밀가루에 ADA 표준물질을 최종농도가 10, 20, 50 mg/L가 되도록 첨 가하여 회 수율을 검 토한 결과, 회 수율은 90% 이상을 보여 양호하였디-.
ADA의 분석을 위한 추출조건은 Fig. 1와 같디' 시료에 물을 가하고 수욕에서 가이 i 아 이 용액을 원심분리 하여 얻은 상등액을 취하고 물을 가한 액을 HPLC 분석용 시료로 사용하였다、시료전처리에는 증류수, dimethyl formamide, diniethylfbrmaniide-물 혼합용매, 이세톤 등을 검토하였으며, 추출효율에서는 차이를 보이지 않아 최종적으로 증류수를사용하였斗. 검체를 튜브에 정밀히 취하고 추출한 후.
라서, 본 연구에서는 식품 중 ADA의 사용량을 측정하기 위하여 ADA를 분해하는 hidrazine을 사용하여 전처리를 하지 않고 밀가루에서 분석 가능한 방법을 확립하고자 하였다. 또한, 확, 립된 분석법을 이용하여 국내 유통 밀가루 및 빵류에 대해 함유량을 분석하였디-.
반복실험간에 정밀성을 확인하기 위하여 ADA의 표준용액을 10회 제조하여 피크 면적 및 RT를 비교 분석하였다. 10mg/b의 농도가 되도록 ADA 시료를 반복 제조하여 분석한 결과, peak의 면적 및 RT의 상대표준편차 (%RSD)는각각 1.
. 분석하여 표준용액의 성분과 머무름 시간이 일치하는 피크의 면적값을 해당표준물질의 검량선에 대입하여 농도를 구한 다음, 아래의 식에 대입하여 산출하였다.
3인 아조디카르본아미드의 흡수스팩트럼은 Fig, 2와 깉.으며 , 245 nm 및 425 nm 흡수봉우리를 나타내 었으며 일차적으로 245 nm 및 425 nm를 분석 파장으로 하였으며 , 흡광계수가 높아 감도가 좋은 245 nm를 주분석파장으로 하여 정량분석을 실시하였다. 확립된 HPLC 분석조건은 다음 Table 1과 같다.
최종적으로 획랍한 분석법을 ICH Guide line Q2B에서 제시 하는 방법觸을 근■거 로 하, 여 특이 성 (specificity), 직 선성 (linearity), 회수율' 검출한계 (LOD) 및 정량한계 (LOQ) 등으로 유효성 검증을 실시하였다’ 회수율은 밀가루에 ADA 를 최종농도 10, 20, 5()mg/L가 되도록 첨가하고 검토한 전처리 빙, 법을 이용하여 시료의 회수율을 시험하였다.
대상 데이터
밀가루 중 ADA 분석에 대한 크로마토그래피 분리를 위한 HPLC 분석조건은 다음과 같다. Column은 Imta虹 Unison US-C]8 (4.6 x 250 mm, 5 仰i)을 사용하였으며, column temperatures 40°C 이었디-. 샘플의 injection volume은 iOpiL이었다.
분석에 사용된 밀가루 시료는 대부분 국산 제품으로 ADA 를 모두 함유하고 있지 않았다. 이는 실질적으로 ADA가 밀가루 개량제 보다는 빵 제조시의 반죽의 물리적 성질을 좋게 하기 위 한 반죽개량제로 사용되 기 때 문으로 예 상되 며 , 빵에서 보다 많은 검출률을 나타낼 것으로 예상되어진다.
분석하였다. 10mg/b의 농도가 되도록 ADA 시료를 반복 제조하여 분석한 결과, peak의 면적 및 RT의 상대표준편차 (%RSD)는각각 1.85%, 0.17%로 모두 2% 미만으로 반복실험간 오차가 낮은 것으로 나타났다 (Table 2).
ADA의 RT 5.4 min에서 7개 농도범위로 표준용액을 3회 제조하여 각각의 검 량선을 작성 흔! 결과 ADA는 0.05-25 mg/L 의 범위 내에서 농도와 반응값의 상관계수가 1.0으로 매우 양호한 직선성을 나타내었다. 범위는 특정 실험방법의 측정범위를 말하는 것으로 정밀성과 정확성을 나타내며, 직선성이 유지되는 범위를 말힌디.
ADA는 극성이 비교적 큰 물질이나 Osbome磚의연구결과를 참고로 역싱계 컬럼인 (丄 컬럼을 검토한 결.과, 분리능, 피크의 대칭성 등의 분리성능 면에서 우수한 결과를 나타내었고., 실제 분석시에는 Imtakt Unison US-CI8 (5 pm, 4.
나타내었다. 밀가루 중 ADA의 함량 분석 결과 밀가루및 밀가루가 주원료인 튀김가루 51건 중 1건에서 ADA가검출되었으니-(검출율 : 2%), 빵류에서는 검출되지 않았다. 현행 식품첨가물공전의 사용기준에서 ADA는 밀가루 1kg 당 45 mg 미만으로 사용 가능하므로 밀가루에서 검출된 ADA의 양은 사용기준에 적합하였다.
밀가루에 ADA 표준물질을 최종농도가 10, 20, 50 mg/L가 되도록 첨 가하여 회 수율을 검 토한 결과, 회 수율은 90% 이상을 보여 양호하였디-.
2, 3). 이상 의결과 ADA이 검출되는 시간대에서 해당 피크가, 특이한 방해성분 없이 검출됨을 확인하였다.
특이성 (specificity)은 존'재할 것으로 예상되는 다른 물질의 영향을 받지 않고 목적 성분을 분석할 수 있는지를 검증하는 항목으로 표준용액과 시험용액 중 ADA의 RT를 비교 분석한 결과, RT 5.4min대에 분리됨을 흐}인하였으며 (Fig. 2, 3), ADA 표준물질의 최대홉^수파장은 245nm로서 시험용액 중 동-일한 RT를 가지는 ADA와 PDA (마ioto Diode Array) spectrum이 일치함을 확인히였다 (Fig. 2, 3). 이상 의결과 ADA이 검출되는 시간대에서 해당 피크가, 특이한 방해성분 없이 검출됨을 확인하였다.
확립된 분석조건으로 표준품을 대상으로 S/N비 (signal to noise ration)를 3으로 하여 ADA의 검출한계를 측정한 결과 (Table 4) 0.02 mg/L의 농도까지도 ADA는 base-line 잡음과 구별이 됨을 확인할 수 있었다. 또한, 정 량한계 (limit of quantification, LOQ)를 측정 한 결고卜 (Fig.
후속연구
현행 식품첨가물공전의 사용기준에서 ADA는 밀가루 1kg 당 45 mg 미만으로 사용 가능하므로 밀가루에서 검출된 ADA의 양은 사용기준에 적합하였다. 그러나 ADA의 안정성을 고려한다면 실제 사용한 ADA의 함량은 검출량 보다 높았을 것으로 판단되며, 보관 유통과정 중 biurea 등으로 분해가 일어나 검출된 양이 적었을 것으로 사료된다.
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