[논문]메밀 속성장 유래 효소활성 우수 저영양성 균주 분리 및 특성

이성영; 김지연; 백성열; 여수환; 구본성; 박혜영; 최혜선

doi:10.9721/kjfst.2011.43.6.735

메밀 속성장 유래 효소활성 우수 저영양성 균주 분리 및 특성
Isolation and Characterization of Oligotrophic Strains with High Enzyme Activity from Buckwheat Sokseongjang 원문보기

한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology, v.43 no.6, 2011년, pp.735 - 741

이성영 (농촌진흥청 국립농업과학원 농식품자원부) , 김지연 (농촌진흥청 국립농업과학원 농식품자원부) , 백성열 (농촌진흥청 국립농업과학원 농식품자원부) , 여수환 (농촌진흥청 국립농업과학원 농식품자원부) , 구본성 (농촌진흥청 국립농업과학원 농업생명자원부) , 박혜영 (농촌진흥청 국립농업과학원 농식품자원부) , 최혜선 (농촌진흥청 국립농업과학원 농식품자원부)

초록
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메밀 속성장 유래 세포외효소(protease, amylase, cellulase, lipase, xylanase) 분비능이 우수한 균주를 분리하여 혈전 용해능, 항균 활성 및 내염성을 분석하였다. 선발된 균주 중 HJ0-3을 비롯한 13개 균주는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114보다 우수한 protease 활성을 보였다. Amylase 분비능의 경우, HJ18-4을 포함한 10개 균주는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114보다 우수한 효소 활성을 보였다. HJ11-19 등 5균주는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114보다 cellulase 분비능이 우수함을 확인할 수 있었다. 선별된 23개 균주 중에서 HJ5-21(21.12%), HJ18-4(86.11%), HJ18-9(31.16%), HJ18-13(63.80%)가 높은 혈전 용해능을 보였다. 선별된 23개 균주 중, 5개 균주(HJ18-4, HJ18-9, HJ18-13, HJ25-6, HJ25-11)는 3개 이상의 병원성 균에 대해 항균 활성을 나타내었고, 특히 HJ18-4는 모든 병원성 균에 대하여 항균활성을 나타내었으나 표준 균주 B. subtilis KACC 10114는 항균 활성이 나타나지 않았다. 메밀 속성장 유래 분리 균주 중 세포외효소 활성 및 혈전 용해능, 항균 활성이 우수한 균주 HJ18-4(AB601598)는 API kit 분석결과 B. subtilis(89.6%), 16S rDNA 염기서열 분석으로는 B. subtilis(99%)로 동정되었다. HJ18-4는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114와 마찬가지로 NaCl의 농도가 높아질수록 생육이 억제되나 5%와 10%의 NaCl 농도에서 표준 균주 B. subtilis KACC 10114 보다 HJ18-4가 우수한 생육 특성을 나타내었다. 이는 HJ18-4가 염 농도 5-10%에서 우수한 생육특성을 가짐으로써 저염 및 고염 장류 제조에 있어서 starter로 사용이 가능함을 보여주었다.

Abstract ▼ AI-Helper

Bealmijang is a short-term fermented regional product that is prepared with soybean and extra ingredients. In this study, starter strain candidates were screened from Bealmijang for fermented soybean paste products. Twenty one bacterial strains producing extracellular enzymes (amylase, cellulase, protease, xylanase and lipase) were isolated from Bealmijang, buckwheat sokseongjang. The isolates were assessed for fibrinolytic and antibacterial activities, and salt tolerance. Strain HJ18-4, identified as Bacillus subtilis (AB601598) by biochemical properties (89.6%) and 16S rDNA sequencing (100%), showed the highest enzymatic, fibrinolytic, and antibacterial activities among the isolates. Although the growth of HJ18-4 was inhibited by the increase of NaCl concentration, the growth still exceeded that of B. subtilis KACC 10114 at 5% and 10% NaCl. These results suggest that B. subtilis HJ18-4 is suitable as a starter for soybean paste manufacture.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 유용기능성 성분을 갖는 메밀과 대두를 이용하여 제조된 메밀 속성장 으로부터 발효관련 효소활성, 식중독균에 대한 항균활성 및 혈전용해능이 우수한 저영양 균주를 분리하였으며 균주의 내염성 등을 조사하였다.

제안 방법

16S rDNA 유전자 염기서열 분석은 균주의 chromosomal DNA를 GenEX genomic Sx DNA kit(GeneAll Biotechnology Co., LTD, Seoul, Korea)를 이용해 추출하였으며, 27F(5'-AGAGTTTGATCAT GGCTCAG-3')와 1492R(5'-GGATACCTTGTTACGACTT-3')primer를 이용하여 분리 균주의 16S rDNA 유전자 단편을 PCR로 증폭한 후, 염기서열을 분석하였다(SolGent Co., Ltd., Daejeon, Korea).
A agar에 1% tri-butyrin을 첨가하여 제조하였다. Amylase 분비능은 R₂A agar에 0.5% soluble starch를 첨가하였고 전배양 균주(O.D., 1.0)를 접종하여 28℃에서 18 h 배양한 후, iodine 용액으로 염색하여 starch 분해활성을 측정하였다. Cellulase와 xylanase 분비능은 R₂A agar에 각각 0.
0)를 접종하여 28℃에서 18 h 배양한 후, iodine 용액으로 염색하여 starch 분해활성을 측정하였다. Cellulase와 xylanase 분비능은 R₂A agar에 각각 0.4% carboxymethyl cellulose와 0.4% xylan을 기질로 첨가하여 제조하였다. 이에 분리 균주(O.
Protease 분비능은 R₂A agar에 1% skim milk, lipase 측정배지에는 R₂A agar에 1% tri-butyrin을 첨가하여 제조하였다. Amylase 분비능은 R₂A agar에 0.
, Daejeon, Korea). 그 결과를 NCBI GenBank database(http://ncbi.nlm.nih.gov)의 염기서열과 비교하여 계통분류학적 유연관계를 분석한 후, Clustal W와 MEGA 4.0을 사용하여 neighbor-joining 알고리즘을 바탕으로한 phylogenetic consensus tree를 작성하였으며, B. subtilis HJ18-4의 16s rDNA sequence정보를 DDBJ에 등록하였다.
배양액 5 µL 를 주입하고 37℃에서 18 h 동안 반응시킨 후, 생성된 clear zone의 면적을 측정하였다. 대조구는 정제 혈전용해효소인 plasmin(1.0 Uint/mL)을 사용하였으며, 혈전용해능식에 의해 계산하였다.
메밀 속성장 유래 분리 균주의 내염성을 규명하기 위해 NaCl 농도별 생육특성을 조사하였으며, 그 결과는 Fig 5와 같다. 5% NaCl 농도에서 24 h 배양할 경우, 표준 균주 B.
메밀 속성장 유래 세포외효소(protease, amylase, cellulase, lipase, xylanase) 분비능이 우수한 균주를 분리하여 혈전 용해능, 항균 활성 및 내염성을 분석하였다. 선발된 균주 중 HJ0-3을 비롯한 13개 균주는 표준 균주 B.
cereus KACC 10004, Staphylococcus aureus KACC 10778, Listeria monocytogenes KACC 10550, 그람 음성균 2종 Salmonella enterica KACC 11595, Escherichia coli KACC 13821 및 Candida albicans KACC 30062 등 6종을 한국농업미생물자원센터 (KACC)에서 분양 받아 사용하였다. 배양된 indicator microorganism 6종을 균일한 농도(O.D.₆₅₀, 0.4)로 BHI agar에 접종하여 plate를 제조하였다. 분리 균주를 spot하고 37℃에서 128 h 이상 배양한 후, clear zone 생성을 확인하고 면적을 측정하였다.
배양액 5 µL 를 주입하고 37℃에서 18 h 동안 반응시킨 후, 생성된 clear zone의 면적을 측정하였다.
4)로 BHI agar에 접종하여 plate를 제조하였다. 분리 균주를 spot하고 37℃에서 128 h 이상 배양한 후, clear zone 생성을 확인하고 면적을 측정하였다. 항균활성 측정은 선택배지에 96 pin replicator로 접종하여 high-throughput 방법으로 1차 스크리닝 한 후, 선발된 단일 균주에 대해 paper disc 법으로 확정 실험을 실시하였다.
, Marcy I’Etoile, France)로 분석하였다. 분리 균주를 지시약이 포함된 kit medium에 현탁하여 strip에 분주한 후 24-48 h 동안 배양하고 그 결과를 API analytical profile index로 분석하였다. 16S rDNA 유전자 염기서열 분석은 균주의 chromosomal DNA를 GenEX genomic Sx DNA kit(GeneAll Biotechnology Co.
분리 균주의 내염성은 NaCl 농도 0, 5, 10, 20%(w/w)로 제조된 Nutrient broth 50 mL에 전배양 된 분리 균주(O.D., 1.0) 500 µL를 접종 한 후, 배양(37℃, 48 h)하면서 Microlog ELISA system(Biolog Inc., Hayward, CA, USA)를 사용하여 0, 6, 12, 24, 30, 48 h에서의 흡광도(650 nm)를 측정하고 생육곡선을 작성하여 분석하였다.
분리 균주의 생화학적 특성은 API 50CHB kit(Biomereux Inc., Marcy I’Etoile, France)로 분석하였다.
4% xylan을 기질로 첨가하여 제조하였다. 이에 분리 균주(O.D., 1.0)를 접종하여 28℃에서 18 h 배양한 후, 0.1% congo red로 30 min 염색하고 1 M NaCl 용액으로 세척하여 clear zone을 관찰하였다. 효소활성 측정은 선택배지에 96 pin replicator로 접종하여 high-throughput 방법으로 1차 스크리닝 한 후, 선발된 단일 균주에 대해 확정 실험을 실시하였다.
콩은 24 h 수침 후, 고압멸균기를 이용하여 증자(121℃, 40 min)하였고 마쇄하였다. 증자콩과 메밀 가루의 배합을 달리하여 일정한 크기(400g, 지름 15 cm, 높이 3 cm)로 성형한 후, 양지에서 하루 동안 겉말림하고, 7일 동안 발효(28℃, RH 80%)시켜 속성장용 메주를 제조하였다. 메주 10 kg, 천일염 2.
분리 균주를 spot하고 37℃에서 128 h 이상 배양한 후, clear zone 생성을 확인하고 면적을 측정하였다. 항균활성 측정은 선택배지에 96 pin replicator로 접종하여 high-throughput 방법으로 1차 스크리닝 한 후, 선발된 단일 균주에 대해 paper disc 법으로 확정 실험을 실시하였다.
혈전 용해능은 Astrup과 Müllerttz(15)의 방법을 변형하여 측정하였다.
1% congo red로 30 min 염색하고 1 M NaCl 용액으로 세척하여 clear zone을 관찰하였다. 효소활성 측정은 선택배지에 96 pin replicator로 접종하여 high-throughput 방법으로 1차 스크리닝 한 후, 선발된 단일 균주에 대해 확정 실험을 실시하였다.

대상 데이터

항균활성 측정은 agar diffusion 방법과 paper disc 방법으로 측정하였다(16). Indicator microorganism으로 그람 양성균 3종 B. cereus KACC 10004, Staphylococcus aureus KACC 10778, Listeria monocytogenes KACC 10550, 그람 음성균 2종 Salmonella enterica KACC 11595, Escherichia coli KACC 13821 및 Candida albicans KACC 30062 등 6종을 한국농업미생물자원센터 (KACC)에서 분양 받아 사용하였다. 배양된 indicator microorganism 6종을 균일한 농도(O.
증자콩과 메밀 가루의 배합을 달리하여 일정한 크기(400g, 지름 15 cm, 높이 3 cm)로 성형한 후, 양지에서 하루 동안 겉말림하고, 7일 동안 발효(28℃, RH 80%)시켜 속성장용 메주를 제조하였다. 메주 10 kg, 천일염 2.5 kg, 물 15 L를 혼합한 후, 40 L 항아리(Kalsantoki, Hongsung, Korea)에서 자연 발효(25-28℃)시키면서 시료를 채취하여 실험에 사용하였다.
그리고 콩에 함유된 20%의 지방은 발효과정 중 미생물이 분비하는 lipase의 작용에 의해 linoleic acid와 같은 필수 지방산으로 분해되어 이용된다(5). 본 연구에서는 메밀 속성장으로부터 저영양 배지(R₂A)를 이용하여 colony 및 morphology에 따라 168개 균주를 선별하였고 protease, cellulose 및 amylase 등 세포 외 효소 분비능이 우수한 23개 균주를 1차 선별하였다(Table 1). 선발된 균주 중 HJ0-3을 비롯한 13개 균주는 표준 균주 B.
subtilis KACC 10114보다 cellulase 분비능이 우수함을 확인할 수 있었다. 표준균주에 대한 선발균주의 2차 검정을 통해 HJ18-4를 protease, cellulase, amylase, lipase, xylanase의 세포 외 효소 분비능 우수 균주로 선발하였다(Fig. 1). 효소 활성 우수 균주를 종균으로 사용한다면 장류 품질 향상과 기능성 증진에 도움이 될 것으로 사료된다.

이론/모형

메밀 속성장 유래 분리 균주의 항균 활성은 agar diffusion method을 이용하여 표준 균주 B. subtilis KACC 10114의 clear zone을 비교 하여 측정하였고 그 결과는 Table 3과 같다. 선별된 23개 균주 중, 5개 균주(HJ18-4, HJ18-9, HJ18-13, HJ25-6, HJ25-11)는 3개 이상의 병원성 균에 대해 항균 활성을 나타내었다.
메밀 속성장은 Choi 등(12)의 방법으로 제조되었다. 콩은 24 h 수침 후, 고압멸균기를 이용하여 증자(121℃, 40 min)하였고 마쇄하였다.
항균활성 측정은 agar diffusion 방법과 paper disc 방법으로 측정하였다(16). Indicator microorganism으로 그람 양성균 3종 B.

성능/효과

subtilis KACC 10114는 acetoin production과 gelatinase에서 양성반응을 보였다. 49개의 탄소원에 대한 이용성을 조사한 결과, HJ18-4는 xylitol을 이용하지만 KACC 10114는 이용하지 못하였으며 다른 48개의 탄소원 이용은 동일한 패턴을 보였다. API analytical profile index를 분석한 결과 표준 균주 B.
메밀 속성장 유래 분리 균주의 내염성을 규명하기 위해 NaCl 농도별 생육특성을 조사하였으며, 그 결과는 Fig 5와 같다. 5% NaCl 농도에서 24 h 배양할 경우, 표준 균주 B. subtilis KACC 10114(O.D: 0.92), HJ18-4(O.D: 1.69)의 값으로 HJ18-4의 생육 속도가 2배 이상 빠른 것으로 나타났다. 소금의 구성이온인 Na⁺와 Cl⁻이 미생물 생장에 있어 촉매 역할을 하고 적절한 농도의 소금 양은 세균 성장의 좋은 조건이 되는 것으로 판단되며, type strain 및 HJ18-4 균주 모두 12시간 이후에 대수 증식기가 유도되는 것으로 보인다.
49개의 탄소원에 대한 이용성을 조사한 결과, HJ18-4는 xylitol을 이용하지만 KACC 10114는 이용하지 못하였으며 다른 48개의 탄소원 이용은 동일한 패턴을 보였다. API analytical profile index를 분석한 결과 표준 균주 B. subtilis KACC 10114는 95.4%, HJ18-4는 89.6%의 상동성을 나타내었다. 메밀 속성장 유래 분리 균주들의 16S rDNA 유전자 염기서열 분석 결과, 모두 Bacillus(99%)와 높은 유사도를 보였으며 HJ18-4 균주는 B.
subtilis KACC 10114보다 우수한 protease 활성을 보였다. Amylase 분비능의 경우, HJ18-4을 포함한 10개 균주는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114보다 우수한 효소 활성을 보였다. HJ11-19 등 5개 균주는 표준 균주 B.
subtilis KACC 10114보다 우수한 효소 활성을 보였다. HJ11-19 등 5개 균주는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114보다 cellulase 분비능이 우수함을 확인할 수 있었다. 표준균주에 대한 선발균주의 2차 검정을 통해 HJ18-4를 protease, cellulase, amylase, lipase, xylanase의 세포 외 효소 분비능 우수 균주로 선발하였다(Fig.
subtilis(99%)로 동정되었다. HJ18-4는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114와 마찬가지로 NaCl의 농도가 높아질수록 생육이 억제되나 5%와 10%의 NaCl 농도에서 표준 균주 B. subtilis KACC 10114 보다 HJ18-4가 우수한 생육 특성을 나타내었다. 이는 HJ18-4가 염 농도 5-10%에서 우수한 생육특성을 가짐으로써 저염 및 고염 장류 제조에 있어서 starter로 사용이 가능함을 보여주었다.
subtilis KACC 10114와 가장 가까운 관계를 보였다(Fig 4). 결과적으로, HJ18-4는 동일한 결과로 동정된 다른 균주에 비해 우수한 효소활성을 보유한 것으로 보아 분리 균주별 strain specific한 특징을 가지고 있는 것으로 판단된다.
aureus와 Pseudomonas aeruginisa에 대해 높은 항균 활성이 있음이 보고되었다(21). 따라서 메밀 속성장은 항균 활성을 가진 균주와 메밀의 유용 성분이 병원성균에 대한 항균 작용에 시너지 효과를 낸 것으로 판단된다.
소금의 구성이온인 Na⁺와 Cl⁻이 미생물 생장에 있어 촉매 역할을 하고 적절한 농도의 소금 양은 세균 성장의 좋은 조건이 되는 것으로 판단되며, type strain 및 HJ18-4 균주 모두 12시간 이후에 대수 증식기가 유도되는 것으로 보인다. 또한 10% NaCl 농도에서 48 h 배양한 결과, 표준 균주 B. subtilis KACC 10114(O.D., 0.62) 및 HJ18-4(O.D., 0.72)로 나타났다. HJ18-4는 염 농도 5-10%에서 우수한 생육특성을 가지는 내염성 세균으로 판단되며, 이는 저염 및 고염 장류 제조에 있어서 starter로 사용이 가능함을 보여주었다.
subtilis와 100%의 유사성을 나타내었다. 또한 분리 균주와 Bacillus 속의 표준 균주들과의 유연관계를 비교한 결과, HJ18-4(AB601598)는 B. subtilis(GU397398), B. subtilis(GU357825), B. amyloliquefaciens(GU339230), B. subtilis KACC 10114와 가장 가까운 관계를 보였다(Fig 4). 결과적으로, HJ18-4는 동일한 결과로 동정된 다른 균주에 비해 우수한 효소활성을 보유한 것으로 보아 분리 균주별 strain specific한 특징을 가지고 있는 것으로 판단된다.
subtilis KACC 10114는 항균 활성이 나타나지 않았다. 메밀 속성장 유래 분리 균주 중 세포외효소 활성 및 혈전 용해능, 항균 활성이 우수한 균주 HJ18-4(AB601598)는 API kit 분석결과 B. subtilis(89.6%), 16S rDNA 염기서열 분석으로는 B. subtilis(99%)로 동정되었다. HJ18-4는 표준 균주 B.
6%의 상동성을 나타내었다. 메밀 속성장 유래 분리 균주들의 16S rDNA 유전자 염기서열 분석 결과, 모두 Bacillus(99%)와 높은 유사도를 보였으며 HJ18-4 균주는 B. subtilis와 100%의 유사성을 나타내었다. 또한 분리 균주와 Bacillus 속의 표준 균주들과의 유연관계를 비교한 결과, HJ18-4(AB601598)는 B.
80%)가 높은 혈전 용해능을 보였다. 분리 균주 중 우수한 혈전 용해능을 가진 4개 균주와 표준 균주 B. subtilis KACC 10114와 혈전 용해능을 비교한 결과 HJ18-4가 가장 우수한 혈전 용해능을 나타내었으며, 동일한 결과(B. subtilis)로 동정된 다른 균주와 전혀 다른 특성을 보였다(Fig. 2, 4). 전통발효식품 유래 미생물에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 된장에서 분리한 균주의 혈전용해능(5,7), 청국장에서 분리한 Bacillus spp.
효소 활성 우수 균주로 선발된 23개 균주의 혈전 용해능을 측정한 결과는 Table 2와 같다. 선발된 23개 균주 중에서 HJ5-21(21.12%), HJ18-4(86.11%), HJ18-9(31.16%) 및 HJ18-13(63.80%)가 높은 혈전 용해능을 보였다. 분리 균주 중 우수한 혈전 용해능을 가진 4개 균주와 표준 균주 B.
본 연구에서는 메밀 속성장으로부터 저영양 배지(R₂A)를 이용하여 colony 및 morphology에 따라 168개 균주를 선별하였고 protease, cellulose 및 amylase 등 세포 외 효소 분비능이 우수한 23개 균주를 1차 선별하였다(Table 1). 선발된 균주 중 HJ0-3을 비롯한 13개 균주는 표준 균주 B. subtilis KACC 10114보다 우수한 protease 활성을 보였다. Amylase 분비능의 경우, HJ18-4을 포함한 10개 균주는 표준 균주 B.
80%)가 높은 혈전 용해능을 보였다. 선별된 23개 균주 중, 5개 균주(HJ18-4, HJ18-9, HJ18-13, HJ25-6, HJ25-11)는 3개 이상의 병원성 균에 대해 항균 활성을 나타내었고, 특히 HJ18-4는 모든 병원성 균에 대하여 항균활성을 나타내었으나 표준 균주 B. subtilis KACC 10114는 항균 활성이 나타나지 않았다. 메밀 속성장 유래 분리 균주 중 세포외효소 활성 및 혈전 용해능, 항균 활성이 우수한 균주 HJ18-4(AB601598)는 API kit 분석결과 B.
subtilis KACC 10114의 clear zone을 비교 하여 측정하였고 그 결과는 Table 3과 같다. 선별된 23개 균주 중, 5개 균주(HJ18-4, HJ18-9, HJ18-13, HJ25-6, HJ25-11)는 3개 이상의 병원성 균에 대해 항균 활성을 나타내었다. 특히 HJ18-4는 모든 병원성 균에 대하여 항균활성을 나타내었으며, 표준 균주 B.
subtilis KACC 10114보다 cellulase 분비능이 우수함을 확인할 수 있었다. 선별된 23개 균주 중에서 HJ5-21(21.12%), HJ18-4(86.11%), HJ18-9(31.16%), HJ18-13(63.80%)가 높은 혈전 용해능을 보였다. 선별된 23개 균주 중, 5개 균주(HJ18-4, HJ18-9, HJ18-13, HJ25-6, HJ25-11)는 3개 이상의 병원성 균에 대해 항균 활성을 나타내었고, 특히 HJ18-4는 모든 병원성 균에 대하여 항균활성을 나타내었으나 표준 균주 B.
소금의 구성이온인 Na+와 Cl−이 미생물 생장에 있어 촉매 역할을 하고 적절한 농도의 소금 양은 세균 성장의 좋은 조건이 되는 것으로 판단되며, type strain 및 HJ18-4 균주 모두 12시간 이후에 대수 증식기가 유도되는 것으로 보인다.
subtilis KACC 10114 보다 HJ18-4가 우수한 생육 특성을 나타내었다. 이는 HJ18-4가 염 농도 5-10%에서 우수한 생육특성을 가짐으로써 저염 및 고염 장류 제조에 있어서 starter로 사용이 가능함을 보여주었다.

후속연구

저 농도 영양조건하에서 느리게 증식하는 세균이 자연계에서 다수 존재한다는 사실이 알려지면서 담수, 해수, 토양 등 자연계에 분포해 있는 저영양 세균에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 그러나 국내에서는 저영양성 세균의 기능성 물질이나 분류, 생리적 특성에 대한 연구는 미비하며(13,14), 특히 장류 유래 저영양 미생물을 분리한 보고는 전무하여 본 연구가 발효미생물 연구에 좋은 기초 자료가 될 것으로 보인다.
균주의 혈전용해 우수 균주를 능 및 면역증강 활성에 대한 연구가 보고된 바 있다(9,19). 이처럼 혈전 용해 우수 균주를 장류 제조에 있어 우수한 starter로 사용할 수 있을 것으로 사료된다.
1). 효소 활성 우수 균주를 종균으로 사용한다면 장류 품질 향상과 기능성 증진에 도움이 될 것으로 사료된다.

참고문헌 (21)

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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