본 연구는 간암세포주인 HepG2 cell line에서 녹차씨박 추출물을 에탄올, 석유 에테르, 에틸 아세테이트, 부탄올의 순으로 분획 및 열수 추출물을 조제하여 암세포 증식 억제능을 확인한 후 에탄올 추출물을 선정하여 항종양 및 항염증효과를 생화학적, 분자적 방법으로 분석하였다. 녹차씨박 에탄올 추출물(DGTSE)의 polyphenol 함량을 HPLC로 분석한 결과 EGC($1039.1{\pm}15.26\;{\mu}g/g$)> tannic acid($683.5{\pm}17.61\;{\mu}g/g$)> EC($62.4{\pm}5.00\;{\mu}g/g$)> ECG($24.4{\pm}7.81\;{\mu}g/g$)> EGCG($20.9{\pm}0.96\;{\mu}g/g$)> gallic acid($2.4{\pm}0.68\;{\mu}g/g$)의 순이었으나 caffeic acid는 검출되지 않았다. DGTSE의 농도가 $10\;{\mu}g$/mL 이상에서는 84.13%의 세포 증식 억제능($IC_{50}$: $6.58\;{\mu}g$/mL)을 보여 간암세포의 증식을 효과적으로 억제하였고 제1상효소계인 CYP1A1와 CYP1A2의 발현을 농도 의존적으로 감소시키는 것으로 나타났다. QR 활성은 DGTSE을 $20\;{\mu}g$/mL 농도로 처리 시 대조군에 비해 2.6배 증가하였으며 reporter gene activity로 측정한 ARE 활성은 1.94배로 각각 증가하였다. DGTSE의 처리는 염증생성 인자인 PGE2의 생성과 TNF-${\alpha}$의 단백질 발현은 유의적으로 저해하였으며 cytokine 반응, 염증, 세포성장조절과 같은 다양한 단계에 참여하는 전사인자인 NF${\kappa}$B의 핵으로의 translocation을 억제하였다. 이상의 결과에서 DGTSE은 간암세포인 HepG2 세포계에서 암세포 증식 억제능을 가지며 해독효소인 QR, ARE의 활성을 증진시키고 NF${\kappa}$B의 translocation을 방해하고 TNF-${\alpha}$의 단백질 발현과 $PGE_2$의 생성을 억제하여 암세포의 증식을 억제하였다. 따라서 녹차씨박 추출물에 함유된 암세포 증식효과를 나타내는 생리활성 물질들에 대한 연구가 앞으로 진행되어야 할 것으로 사료된다.
본 연구는 간암세포주인 HepG2 cell line에서 녹차씨박 추출물을 에탄올, 석유 에테르, 에틸 아세테이트, 부탄올의 순으로 분획 및 열수 추출물을 조제하여 암세포 증식 억제능을 확인한 후 에탄올 추출물을 선정하여 항종양 및 항염증효과를 생화학적, 분자적 방법으로 분석하였다. 녹차씨박 에탄올 추출물(DGTSE)의 polyphenol 함량을 HPLC로 분석한 결과 EGC($1039.1{\pm}15.26\;{\mu}g/g$)> tannic acid($683.5{\pm}17.61\;{\mu}g/g$)> EC($62.4{\pm}5.00\;{\mu}g/g$)> ECG($24.4{\pm}7.81\;{\mu}g/g$)> EGCG($20.9{\pm}0.96\;{\mu}g/g$)> gallic acid($2.4{\pm}0.68\;{\mu}g/g$)의 순이었으나 caffeic acid는 검출되지 않았다. DGTSE의 농도가 $10\;{\mu}g$/mL 이상에서는 84.13%의 세포 증식 억제능($IC_{50}$: $6.58\;{\mu}g$/mL)을 보여 간암세포의 증식을 효과적으로 억제하였고 제1상효소계인 CYP1A1와 CYP1A2의 발현을 농도 의존적으로 감소시키는 것으로 나타났다. QR 활성은 DGTSE을 $20\;{\mu}g$/mL 농도로 처리 시 대조군에 비해 2.6배 증가하였으며 reporter gene activity로 측정한 ARE 활성은 1.94배로 각각 증가하였다. DGTSE의 처리는 염증생성 인자인 PGE2의 생성과 TNF-${\alpha}$의 단백질 발현은 유의적으로 저해하였으며 cytokine 반응, 염증, 세포성장조절과 같은 다양한 단계에 참여하는 전사인자인 NF${\kappa}$B의 핵으로의 translocation을 억제하였다. 이상의 결과에서 DGTSE은 간암세포인 HepG2 세포계에서 암세포 증식 억제능을 가지며 해독효소인 QR, ARE의 활성을 증진시키고 NF${\kappa}$B의 translocation을 방해하고 TNF-${\alpha}$의 단백질 발현과 $PGE_2$의 생성을 억제하여 암세포의 증식을 억제하였다. 따라서 녹차씨박 추출물에 함유된 암세포 증식효과를 나타내는 생리활성 물질들에 대한 연구가 앞으로 진행되어야 할 것으로 사료된다.
Defatted green tea seed was extracted with 100% ethanol for 4 hr and then fractionated with petroleum ether, ethyl acetate and butanol. The ethanol and butanol extracts showed greater increases in antiproliferation potential against liver cancer cells than petroleum ether, ethyl acetate, $H_2O$...
Defatted green tea seed was extracted with 100% ethanol for 4 hr and then fractionated with petroleum ether, ethyl acetate and butanol. The ethanol and butanol extracts showed greater increases in antiproliferation potential against liver cancer cells than petroleum ether, ethyl acetate, $H_2O$, and hot water extracts did. Thus, this study was carried out to investigate the anti-proliferative actions of defatted green tea seed ethanol extract (DGTSE) in HepG2 cancer cells. The DGTSE contained catechins including EGC ($1039.1{\pm}15.2\;g/g$), tannic acid ($683.5{\pm}17.61\;{\mu}g/g$), EC ($62.4{\pm}5.00\;{\mu}g/g$), ECG ($24.4{\pm}7.81\;{\mu}g/g$), EGCG ($20.9{\pm}0.96\;{\mu}g/g$) and gallic acid ($2.4{\pm}0.68\;{\mu}g/g$), but caffeic acid was not detected when analyzed by HPLC. The anti-proliferation effect of DGTSE toward HepG2 cells was 83.13% when treated at $10\;{\mu}g$/mL, of DGTSE, offering an $IC_{50}$ of $6.58\;{\mu}g$/mL. DGTSE decreased CYP1A1 and CYP1A2 protein expressions in a dose-dependent manner. Quinone reductase and antioxidant response element (ARE)-luciferase activities were increased about 2.6 and 1.94-fold at a concentration of $20\;{\mu}g$/mL compared to a control group, respectively. Enhancement of phase II enzyme activity by DGTSE was shown to be mediated via interaction with ARE sequences in genes encoding the phase enzymes. DGTSE significantly (p<0.05) suppressed prostaglandin $E_2$ level, tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) protein expressions, and NF${\kappa}$B translocation, but did not affected nitric oxide production. From the above results, it is concluded that DGTSE may ameliorate tumor and inflammatory reactions through the elevation of phase II enzyme activities and suppression of NF${\kappa}$B translocation and TNF-${\alpha}$ protein expressions, which support the cancer cell anti-proliferative effects of DGTSE in HepG2 cells.
Defatted green tea seed was extracted with 100% ethanol for 4 hr and then fractionated with petroleum ether, ethyl acetate and butanol. The ethanol and butanol extracts showed greater increases in antiproliferation potential against liver cancer cells than petroleum ether, ethyl acetate, $H_2O$, and hot water extracts did. Thus, this study was carried out to investigate the anti-proliferative actions of defatted green tea seed ethanol extract (DGTSE) in HepG2 cancer cells. The DGTSE contained catechins including EGC ($1039.1{\pm}15.2\;g/g$), tannic acid ($683.5{\pm}17.61\;{\mu}g/g$), EC ($62.4{\pm}5.00\;{\mu}g/g$), ECG ($24.4{\pm}7.81\;{\mu}g/g$), EGCG ($20.9{\pm}0.96\;{\mu}g/g$) and gallic acid ($2.4{\pm}0.68\;{\mu}g/g$), but caffeic acid was not detected when analyzed by HPLC. The anti-proliferation effect of DGTSE toward HepG2 cells was 83.13% when treated at $10\;{\mu}g$/mL, of DGTSE, offering an $IC_{50}$ of $6.58\;{\mu}g$/mL. DGTSE decreased CYP1A1 and CYP1A2 protein expressions in a dose-dependent manner. Quinone reductase and antioxidant response element (ARE)-luciferase activities were increased about 2.6 and 1.94-fold at a concentration of $20\;{\mu}g$/mL compared to a control group, respectively. Enhancement of phase II enzyme activity by DGTSE was shown to be mediated via interaction with ARE sequences in genes encoding the phase enzymes. DGTSE significantly (p<0.05) suppressed prostaglandin $E_2$ level, tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) protein expressions, and NF${\kappa}$B translocation, but did not affected nitric oxide production. From the above results, it is concluded that DGTSE may ameliorate tumor and inflammatory reactions through the elevation of phase II enzyme activities and suppression of NF${\kappa}$B translocation and TNF-${\alpha}$ protein expressions, which support the cancer cell anti-proliferative effects of DGTSE in HepG2 cells.
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문제 정의
따라서 본 연구는 간암세포주인 HepG2 cell line에서 탈지한 녹차씨박 분획 추출물의 증식억제 효과를 비교하고 암세포 증식억제효과가 뛰어나고 수율이 높은 녹차씨박 에탄올 추출물의 암세포 증식 억제효과와 그 기전에 대해 연구하였다.
가설 설정
(A) Level of TNF-α was measured by western blot analysis and actin was used as an internal control. (B) All signals were normalized to protein levels of the control protein, actin, and expressed as a ratio. The data shown are representative of triplicate experiments.
제안 방법
1×106개의 세포를 culture dish(φ 100 mm)에 분주하여 24시간 preincubation 후 α-MEM을 제거하고 새로운 배지에 각 시료를 첨가하여 48시간 배양하였다.
cell/well로 분주한 다음, 24시간 동안 preincubation하고 녹차씨박 추출물을 농도별로 투여하였다. 48시간 배양한 다음, 3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 방법으로 세포생존율을 측정하였다. 즉, 1 mg/mL의 농도가 되도록 조정하여 4시간 동안 배양하여 여기에 dimethylsulfoxide(DMSO) 100 μL를 첨가하여 세포에서 formazan dye를 용해시켜낸 다음 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
1% Tween20)로 3번 헹군 후 alkaline phosphatase로 결합된 goat anti-mouse immuno-globulin G 이차항체를 blocking 용액에 1:2,000으로 희석하여 1시간 동안 실온에 방치하였다. Blot은 5-bromo-4- chloro-3-indolyl phosphate/nitroblue tetrazolium color development substrate(Promega)로 발색시키거나 X-ray 필름(Amersham HyperfilmTM ECL)에 20X LumiGLO(R) 시약과 20X Peroxide(Cell Signaling Technology)로 발광시켜 현상하였다. 내부 표준물질로는 actin을 사용하여 quantity one software(Bio-Rad Laboratories, Inc.
PGE2와 TNF-α 생성 억제능은 각각 ELISA assay kit(R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 분석하였다.
6배 정도 증가하는 것으로 나타났다. QR 유도는 제2상 효소계의 promotor region에서 antioxidant response element(ARE) sequence에 의해 조절되므로 DGTSE의 ARE-mediated gene expression에 대한 효과를 HepG2 cell의 세포질에 있는 luciferase reporter gene의 활성을 통해 확인하였다. Fig.
84%였다. 녹차씨박 분획추출물 조제는 건고시킨 에탄올 추출물 10 g을 증류수 500 mL을 가해 용해시킨 후 석유에테르(PE) 500 mL을 가하여 혼합한 후 PE층인 위층을 회수하였으며 같은 방법으로 2회 반복 추출하였다(PE층). 남은 물 층에 에틸아세테이트(EtOAC 층), 부탄올(BuOH층)을 순차적으로 가하여 동일한 방법으로 각각 2회 반복 추출하였으며 남은 물 층은 H2O층으로 사용하였다.
9) 30 μL를 첨가한다음 잘 혼합하고 원심분리(15,000×g, 30 분)한 후 상등액을 취해 핵 추출물로 사용하였다. 단백질의 발현은 phosphop65 rabbit mAb(Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA)를 사용하여 위의 방법과 동일한 방법으로 확인하였다.
따라서 본 연구에서는 간암세포 HepG2 세포에 대한 암세포 증식 억제능이 높고 기능성식품으로 활용 가능한 용매 추출물인 EtOH 추출물을 선정하여 다음 실험을 실시하였다.
본 연구는 간암세포주인 HepG2 cell line에서 녹차씨박 추출물을 에탄올, 석유 에테르, 에틸 아세테이트, 부탄올의 순으로 분획 및 열수 추출물을 조제하여 암세포 증식 억제능을 확인한 후 에탄올 추출물을 선정하여 항종양 및 항염증효과를 생화학적, 분자적 방법으로 분석하였다. 녹차씨박 에탄올 추출물(DGTSE)의 polyphenol 함량을 HPLC로 분석한 결과 EGC(1039.
상등액 200 μL에 250 mM tris-HCl(pH 7.4), 70 mg bovine serum albumin, 0.1% Tween 20, 500 μM FAD, 2 mM NADH를 첨가한 다음, 기질인 2,6-dichlorophenolindophenol(DCPIP)이 단백질 mg당 1분 동안 산화되는 정도를 600 nm에서 측정하였다.
세포 배양 시 세포분주 12～24시간 동안 preincubation한 후 α-MEM 배지를 제거하고 새로운 배지(10% FBS 무첨가)에 녹차씨박 추출물을 첨가하여 48시간 배양하였다.
열수추출물은 녹차씨박(DGTS) 분말의 10배의 증류수를 가해 100±5°C에서 4시간 동안 환류 추출 후 원심분리(1,500 rpm, 15분)하여 동결 건조하였다.
일차항체로 CYP 450 1A1(CYP1A1)과 CYP 450 1A2(CYP1A2, rabbit polyclonal antibody, Abcam, Cambridge, England)를, polyclonal rabbit TNF-α antibody(Cell Signaling Technology, Boston, MA, USA)를 1:1,000으로 blocking 용액에 희석하여 하룻밤 방치하여, TBS/T(Tris buffered saline-Tween; 200 mM Tris, 1.37 M NaCl, pH 7.6, 0.1% Tween20)로 3번 헹군 후 alkaline phosphatase로 결합된 goat anti-mouse immuno-globulin G 이차항체를 blocking 용액에 1:2,000으로 희석하여 1시간 동안 실온에 방치하였다.
cell로 분주하여, 24시간 preincubation한 다음, 각 추출물을 각각의 농도로 처리하여 48시간 배양한 후 세포를 수집하여 luciferase 활성을 Promega E4030방법(Madison, WI, USA)에 따라 측정하였다. 즉, 수집한 시료를 loMax 20/20 luminometer(Promega)를 통하여 분석하였다. 시료의 단백질 함량은 Bradford 법(16)에 따라 분석하였다.
대상 데이터
, Acton, MA, USA)로 여과하여 이것을 HPLC 용 시료로 이용하였다. Catechin류로는 (-)-epigallocatechingallate(EGCG), (-)-epigallo-catechin(EGC), (-)-epicatechingallate(ECG), (-)-epicatechin(EC), tannic acid, gallic acid, caffeic acid를 표준물질로 사용하였으며 HPLC의 분석조건은 Table 2와 같다.
남은 물 층에 에틸아세테이트(EtOAC 층), 부탄올(BuOH층)을 순차적으로 가하여 동일한 방법으로 각각 2회 반복 추출하였으며 남은 물 층은 H2O층으로 사용하였다. H2O층은 동결 건조하였으며 나머지 모든 층은 건고시켜 본 실험의 시료로 사용하였다. 각각의 회수율은 에탄올 추출물 10 g당 PE층 0.
HepG2 cell line은 ATCC에서 구입하였으며 세포 배양은 α-MEM(10% FBS 첨가)배지를 사용하여 CO2 incubator에서 37°C, 5% CO2의 조건하에서 하였다.
녹차씨(green tea seed, GTS)는 외껍질과 속껍질을 각각 제거하여 깨끗하게 세척한 후 50±5°C에서 3일간 열풍 건조하여 40 mesh로 분쇄한 후 사용하였다.
통계분석은 SPSS software(Version 15.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 사용하여 분석하였으며 모든 결과는 mean±SE로 표시하였고 one-way ANOVA와 Duncan's multiple range test로 각 군 간의 유의성을 p<0.05 수준에서 검정하였다.
이론/모형
ARE-Luciferase assay: Culture plate(φ 60 mm)당 1×105 cell로 분주하여, 24시간 preincubation한 다음, 각 추출물을 각각의 농도로 처리하여 48시간 배양한 후 세포를 수집하여 luciferase 활성을 Promega E4030방법(Madison, WI, USA)에 따라 측정하였다.
HepG2 세포에서 녹차씨박 에탄올 추출물이 CYP 450과 TNF-α 단백질 발현에 미치는 효과를 western blot으로 확인하였다.
NAD(P)H:quinone reductase activity: QR활성은 Benson 등의 방법(15)에 따라 수행하였다. 1×106개의 세포를 culture dish(φ 100 mm)에 분주하여 24시간 preincubation 후 α-MEM을 제거하고 새로운 배지에 각 시료를 첨가하여 48시간 배양하였다.
NO 생성량은 Green 등의 방법(17)으로 NO 생성의 지표인 nitrite 양으로 확인하였다. 배지 상등액 100 μL에 1% sulphanilamide(in 5% phosphoric acid) 50 μL와 0.
1% Tween 20, 500 μM FAD, 2 mM NADH를 첨가한 다음, 기질인 2,6-dichlorophenolindophenol(DCPIP)이 단백질 mg당 1분 동안 산화되는 정도를 600 nm에서 측정하였다. 단백질 정량은 Bradford 법(16)으로 하였다.
즉, 수집한 시료를 loMax 20/20 luminometer(Promega)를 통하여 분석하였다. 시료의 단백질 함량은 Bradford 법(16)에 따라 분석하였다.
성능/효과
3에서 보는 바와 같다. DGTSE은 CYP1A1과 CYP1A2의 발현을 현저하게 감소시키는 것으로 나타났다. CYP1A1 family는 구조적으로 관련된 이성체 CYP1A1와 CYP1A2로 구성되어 있으며 대사적으로 세포의 nucleophilies와 궁극적으로 발암물질과 상호작용할 수 있는 반응성이 큰 중간 매개물들을 형성하기 위해 많은 발암전구 물질을 활성화시킨다.
DGTSE은 PGE2 생성을 유발시키지 않았으며 NO와 TNF-α의 생성에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
DGTSE의 농도가 10 μg/mL 이상에서는 84.13%의 세포 증식 억제능(IC50: 6.58 μg/mL)을 보여 간암세포의 증식을 효과적으로 억제하였고 제1상효소계인 CYP1A1와 CYP1A2의 발현을 농도 의존적으로 감소시키는 것으로 나타났다.
DGTSE의 농도가 2.5 μg/mL에서는 31.33%, 5 μg/mL에서는 67.6%, 10 μg/mL 이상에서는 84.13%의 세포 증식 억제능을 보여 DGTSE이 농도 의존적으로 간암세포 증식을 효과적으로 억제하는 것으로 나타났다.
DGTSE의 처리는 염증생성 인자인 PGE2의 생성과 TNF-α의 단백질 발현은 유의적으로 저해하였으며 cytokine 반응, 염증, 세포성장조절과 같은 다양한 단계에 참여하는 전사인자인 NFκB의 핵으로의 translocation을 억제하였다.
7에서 보는 바와 같다. DGTSE이 핵에서 p65의 농도를 농도 의존적으로 감소시키는 것을 확인할 수 있었다.
HPLC를 사용하여 분석한 녹차씨박 에탄올 추출물(DGTSE)의 polyphenol 함량은 Table 3에서 보는 바와 같이 EGC(1039.1±15.26 μg/g)> tannic acid(683.5±17.61 μg/g)> EC(62.4±5.00 μg/g)> ECG(24.4±7.81 μg/g)> EGCG(20.9±0.96 μg/g)> gallic acid(2.4±0.68 μg/g)의 순으로 검출되었으며 caffeic acid는 검출되지 않았다.
QR 활성은 DGTSE을 20 μg/mL 농도로 처리 시 대조군에 비해 2.6배 증가하였으며 reporter gene activity로 측정한 ARE 활성은 1.94배로 각각 증가하였다.
QR 활성은 Fig. 4에서 보는 바와 같이 HepG2 세포에서의 DGTSE을 20 μg/mL 농도로 처리 시 대조군에 비해 2.6배 정도 증가하는 것으로 나타났다.
에탄올 추출물은 DGTS 분말의 10배의 주정을 가해 80±5°C에서 4시간 동안 환류 추출하여 감압여과한 후 evaporator를 사용하여 건고하였다. 녹차씨박 에탄올 추출물과 열수추출물의 회수율은 각각 19.94%와 36.84%였다. 녹차씨박 분획추출물 조제는 건고시킨 에탄올 추출물 10 g을 증류수 500 mL을 가해 용해시킨 후 석유에테르(PE) 500 mL을 가하여 혼합한 후 PE층인 위층을 회수하였으며 같은 방법으로 2회 반복 추출하였다(PE층).
녹차씨박 추출물의 간암세포 억제능과 IC50 값은 Fig. 1과 Table 1에서 보듯이 BuOH층이 3.54 μg으로 가장 낮은 값을 보여 암세포 억제효과가 가장 높은 것으로 나타났으며 그 다음이 에탄올 추출물(6.58 μg), EtOAC층(18.29 μg), H2O층(44.37 μg), PE층(120.77 μg)의 순으로 나타나 PE층에서 암세포 증식 억제능이 가장 낮은 것으로 나타났다.
따라서 DGTSE이 간암세포인 HepG2 세포에서 NFκB의 down-regulation에 의해 염증생성 전사자인 TNF-α의 유전자 발현과 PGE2 생성을 저해하는 것으로 사료된다.
따라서 본 연구에서 DGTSE은 제2상효소계를 활성화시켜 항종양 효과를 가지는 것으로 보인다.
본 연구에서는 DGTSE에는 모든 종류의 catechin들이 함유되어 있는 것을 확인할 수 있었으며 녹차씨 기름을 추출한 후의 부산물로써 얻어진 녹차씨박에서 얻어지는 점과 많은 양을 얻을 수 있는 점을 고려할 때 경제성이 있는 자원이라할 수 있다.
본 연구에서의 결과에서도 극성 용매 추출물인 에탄올과 부탄올 및 열수 추출물에서 HepG2 생육 억제능이 높아(Table 1에 제시함) 유사한 결과를 보였으며 DGTSE은 간 암세포의 생육을 저해하여 항종양 활성을 가질 것으로 사료된다.
DGTSE의 처리는 염증생성 인자인 PGE2의 생성과 TNF-α의 단백질 발현은 유의적으로 저해하였으며 cytokine 반응, 염증, 세포성장조절과 같은 다양한 단계에 참여하는 전사인자인 NFκB의 핵으로의 translocation을 억제하였다. 이상의 결과에서 DGTSE은 간암세포인 HepG2 세포계에서 암세포 증식 억제능을 가지며 해독효소인 QR, ARE의 활성을 증진시키고 NFκB의 translocation을 방해하고 TNF-α의 단백질 발현과 PGE2의 생성을 억제하여 암세포의 증식을 억제하였다. 따라서 녹차씨박 추출물에 함유된 암세포 증식효과를 나타내는 생리활성 물질들에 대한 연구가 앞으로 진행되어야 할 것으로 사료된다.
즉, 종자 추출물 500 μg/mL을 처리 시 자궁암 세포인 human endomaterial adenocarcinoma(HEC-1B) 종양 세포주를 제외한 피부암세포(Farrow), 후두암세포(HEP-2), 난소암 세포(SK-OV-3)의 종양 세포주에서 약 90% 이상의 증식억제효과를 보였다.
후속연구
TNF-α의 분리에는 IL-6 등 여러 인자들이 관여하는 것으로 알려져 있으며(23) 본 연구에서 TNF-α의 분리와 단백질 발현이 다소 차이를 나타내는 것은 더 연구가 진행되어야 힐 것으로 보인다.
그러므로 NFκB 활성 억제를 통해 염증성 매개물을 감소시키면 암세포의 증식 억제효과를 통한 발암효과를 기대할 수 있을 것으로 보인다.
또한, 중국과 대만에서는 오래 전부터 녹차씨를 고급식용유의 원료로 사용되고 있으며 식용유지 자급율이 낮은 우리나라에서도 식용유지 자원으로서의 가능성이 매우 높은 자원이다(10). 녹차씨유를 추출한 후 부산물로 생산되는 녹차씨박의 유효한 생리활성 효과를 확인하면 기능성 소재로서의 그 이용 가치가 높을 것으로 사료된다.
이상의 결과에서 DGTSE은 간암세포인 HepG2 세포계에서 암세포 증식 억제능을 가지며 해독효소인 QR, ARE의 활성을 증진시키고 NFκB의 translocation을 방해하고 TNF-α의 단백질 발현과 PGE2의 생성을 억제하여 암세포의 증식을 억제하였다. 따라서 녹차씨박 추출물에 함유된 암세포 증식효과를 나타내는 생리활성 물질들에 대한 연구가 앞으로 진행되어야 할 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
식사와 대사과정에서 생성되는 활성 산소종는 어떤 문제를 야기하는가?
생체에서 활성산소의 반응생성물이 증가됨으로써 동맥경화, 만성 염증성 질환, 암과 같은 성인병 및 노화가 일어나는 것으로 알려져 있으며 암세포의 증식은 산화적 손상이나 염증반응이 관련되어 있다. 식사와 대사과정에서 생성되는 활성 산소종은 산화적 스트레스를 유발하고 발암의 개시와 직접적으로 관련되는 돌연변이를 유발시킨다. 산화작용은 생체에서 끊임없이 일어나는데 호흡에 산소를 이용하는 생물체로서 산화적 스트레스에 대한 노출은 불가피하다(1).
암 예방물질은 어떻게 암 발생을 억제하는가?
산화작용은 생체에서 끊임없이 일어나는데 호흡에 산소를 이용하는 생물체로서 산화적 스트레스에 대한 노출은 불가피하다(1). 암 예방물질(chemopreventive agent)은 최종 발암대사물질 활성을 줄이거나 형성을 차단하고 또한 표적조직에서 발암물질의 활성을 감소시킴으로써 암 발생을 억제할 수 있다(2,3). 체내에서 발암물질의 대사에 관여하는 효소계는 제1상효소계와 제2상효소계로 나누어지며 제1상효소계로는 aryl hydrocarbon hydroxylase와 cytochrome P450(CYP) family가 있으며 제2상효소계에는 NAD(P)H-quinone reductase(QR), heme oxygenase-1(HO-1), glutathione S-transferase(GST), UDP-glucuronyl transferase 등이 있다.
사람의 CYP1A2는 무엇을 대사하는가?
사람의 CYP1A2는 간에 존재하는 주요한 CYPs의 하나로 간의 총 P450 단백질 함량의 약 15% 존재한다. Clozapine, tacrine, theophylline와 같은 임상적 약물 및 benzo[a]pyrene, 방향족아민류의 발암물질과 스테로이드와 같은 여러 가지 중요한 내부 혼합물의 다수를 대사한다. CYP1A2는 1차적으로 AhR에 의해 조절되며 ligand binding과 nuclear translocation 은 AhR-mediated transactivation을 통해 유도된다.
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