각종 버섯에서 항혈전 활성균주를 선별하기 위해 보관 균주 50여종과 임업협동조합에서 분양 받은 20여종의 균주를 대상으로 항혈전 활성을 검색한 결과, 항혈전 활성이 167 sec를 나타낸 상황버섯(Phellinus linteus)을 선별하였다. 본 균주가 생산하는 항혈전 활성의 본체를 파악하기 위해 pronase 처리와 periodate 산화를 행한 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P. linteus가 생산하는 항혈전 활성의 본체는 다당에 기인되는 것으로 추정되었다. 항혈전 생산을 위한 최적 배양조건은 soluble starch 3.0%, peptone 0.1%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.1%, 초기 pH 7.0, 배양온도 $30^{\circ}C$ 및 교반속도 150 rpm이었다. 상기의 최적 배양조건에서 jar fermentor로 10일 배양하였을 때 390 sec의 항혈전 활성과 7.5 mg/mL의 균사체 생육을 나타내었다.
각종 버섯에서 항혈전 활성균주를 선별하기 위해 보관 균주 50여종과 임업협동조합에서 분양 받은 20여종의 균주를 대상으로 항혈전 활성을 검색한 결과, 항혈전 활성이 167 sec를 나타낸 상황버섯(Phellinus linteus)을 선별하였다. 본 균주가 생산하는 항혈전 활성의 본체를 파악하기 위해 pronase 처리와 periodate 산화를 행한 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P. linteus가 생산하는 항혈전 활성의 본체는 다당에 기인되는 것으로 추정되었다. 항혈전 생산을 위한 최적 배양조건은 soluble starch 3.0%, peptone 0.1%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.1%, 초기 pH 7.0, 배양온도 $30^{\circ}C$ 및 교반속도 150 rpm이었다. 상기의 최적 배양조건에서 jar fermentor로 10일 배양하였을 때 390 sec의 항혈전 활성과 7.5 mg/mL의 균사체 생육을 나타내었다.
To produce the functional food materials, 50 kinds of the mycelial extracts from edible mushroom were examined for anticoagulant activity and Phellinus linteus showed the highest activity through the activated partial thromboplastin test (aPTT). The maximum production of anticoagulant activity and t...
To produce the functional food materials, 50 kinds of the mycelial extracts from edible mushroom were examined for anticoagulant activity and Phellinus linteus showed the highest activity through the activated partial thromboplastin test (aPTT). The maximum production of anticoagulant activity and the mycelial growth was observed in culture medium containing soluble starch 3.0%, peptone 0.1%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O^{\circ}C$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.1% and in the culture conditions controlled at initial pH 7.0, $30^{\circ}C$ and 150 rpm by the rotary shaker. In addition, the maximum production of mycelial dry weight was 7.5 mg/mL after 10 days under the optimal conditions, and anticoagulant activity was reached to 390 sec in 5 L-jar fermentor.
To produce the functional food materials, 50 kinds of the mycelial extracts from edible mushroom were examined for anticoagulant activity and Phellinus linteus showed the highest activity through the activated partial thromboplastin test (aPTT). The maximum production of anticoagulant activity and the mycelial growth was observed in culture medium containing soluble starch 3.0%, peptone 0.1%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O^{\circ}C$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.1% and in the culture conditions controlled at initial pH 7.0, $30^{\circ}C$ and 150 rpm by the rotary shaker. In addition, the maximum production of mycelial dry weight was 7.5 mg/mL after 10 days under the optimal conditions, and anticoagulant activity was reached to 390 sec in 5 L-jar fermentor.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
따라서 본 연구에서는 상황버섯으로부터 항혈전 물질과 균사체를 생산하기 위하여 액체 배양의 최적 생산조건을 검토하고자 한다.
본 균주의 항혈전 활성 및 균사체 생육과 관련된 환경 인자인 pH, 배양온도를 최적화한 배지를 사용하여 검토하였다. pH를 3~9로 달리하여 조사한 결과 pH 7에서 380 sec의 항혈전 활성과 6.
제안 방법
균사체량 측정은 103~105oC의 건조기에서 미리 건조한 유리섬유(Whatman G/FB, Maidstone, England)에 배양된 시료 10 mL를 여과하여 2시간 건조시킨 후, desiccator에서 방냉 후의 무게와 여과 전의 유리섬유 무게의 차이로 측정한 다음 건조 균사체량 (mg/mL)으로 환산하였다.
C에서 25일간 배양하였다. 배양후, 균사체 생산과 항혈전 활성이 뛰어난 균주를 1차적으로 선별하고 이 선별균주를 상기의 배양조건에서 배양을 하여 배양 상등액이 제거된 균사체를 대상으로 항혈전 활성이 뛰어난 균주를 최종균주로 하였다.
본 균주가 생산하는 항혈전 활성의 본체를 파악하기 위해 열수 추출물을 pronase 처리와 periodate 산화를 행한 후, 항혈전 활성을 측정하였다(Fig. 1). 그 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P.
선별균주 P. linteus의 항혈전 활성과 균사체 생육에 미치는 탄소원의 영향을 검토하기 위해 PDB 배지에 탄소원 3.0% 첨가하여 30oC, 120 rpm의 조건에서 7일간 배양한 후, 균사체 열수추출물에 대한 항혈전 활성을 조사하였다(Fig. 2). 그 결과 soluble starch가 320 sec의 가장 높은 항혈전 활성과 균사체 생육(6.
시료를 함유한 100 µL의 혈장(platelet pool plasma)을 aPTT 진단시약 100 µL와 혼합한 후 37oC에서 3분간 예열한 다음 37oC에서 미리 예열된 20 mM CaCl2 100 µL를 가한 후 blood coagulation analyzer (BC 2210, (주)京都第一科學, Japan)를 사용하여 응고가 될 때까지의 시간을 기록하였으며 대조구는 순수한 혈장 100 µL를 이용하여 응고시간을 측정하였다.
5, 10 mL) 에 용해시킨 후, 50 mM NaIO4 5 mL를 가하여 4oC의 암실에서 3일간 산화시켰다. 이 반응액에 ethylene glycol 5 mL를 가해 1시간 동안 실온에 방치한 후, 투석하여 NaBH4 20 mg 을 가해 1시간 교반시켰으며 0.1 M acetic acid로 중화한 후, 투석 및 동결건조하여 항혈전 활성을 검토하였다(Yamada et al, 1984).
종균 생산을 위한 배지는 PDA (potato dextrose agar, Difco, Sparks, MD)로 하였으며 배양접시 중심부에 버섯 균주를 접종하여 30oC, 7일간 배양한 후, 콜크보오러(지름8 mm)로 배지상의 균사를 punching하여 제조된 disk 5개를 종균으로 사용하였다.
항혈전 생산균주를 선별하기 위하여 보관균주 30여종과 임업협동조합에서 분양 받은 20여종의 균주를 PDB 배지에서 25oC, 25일간 배양하여 얻어진 균사체를 열수추출한 후 항혈전 활성을 측정하였다(Table 1). 각각의 항혈전 생산균주 중, P.
항혈전 활성과 균사체 생육에 미치는 무기염류와 금속이온의 영향을 검토하기 위해 각각을 0.1%의 농도에서 상기에서 검토한 최적배지에 첨가하였다. 그 결과 Fig.
대상 데이터
42)로 여과시킨 후, 증류수로 3회 세척하고 동결건조를 하였다. 동결건조된 균사체를 aluminium oxide와 함께 막자사발에 넣어 분쇄하고 열수추출을 4시간동안 행한 후, 원심분리(5,000 rpm, 30분, 한일과학산업(주), 인천)하여 얻어진 상등액을 동결건조하여 균사체의 열수추출물을 항혈전 활성의 시료로 이용하였다.
항혈전 활성균주를 선별하기 위해 보관균주(고려대학교 생명공학연구소) 30여종과 양주 임업협동조합(양주시, 경기도)에서 분양 받은 20여종의 균주를 대상으로 PDB (potato dextrose broth) 배지에 25oC에서 25일간 배양하였다. 배양후, 균사체 생산과 항혈전 활성이 뛰어난 균주를 1차적으로 선별하고 이 선별균주를 상기의 배양조건에서 배양을 하여 배양 상등액이 제거된 균사체를 대상으로 항혈전 활성이 뛰어난 균주를 최종균주로 하였다.
이론/모형
항혈전 활성은 혈장 응고 활성 측정법(Activated partial thromboplastin time, aPTT)을 이용하여 측정하였다. 시료를 함유한 100 µL의 혈장(platelet pool plasma)을 aPTT 진단시약 100 µL와 혼합한 후 37oC에서 3분간 예열한 다음 37oC에서 미리 예열된 20 mM CaCl2 100 µL를 가한 후 blood coagulation analyzer (BC 2210, (주)京都第一科學, Japan)를 사용하여 응고가 될 때까지의 시간을 기록하였으며 대조구는 순수한 혈장 100 µL를 이용하여 응고시간을 측정하였다.
성능/효과
항혈전 활성은 peptone, ammonium sulfate, sodium nitrate 순으로 균사체 생육은 peptone, ammonium chloride, sodium nitrate의 순으로 활성이 높았다. 0.1% peptone을 첨가하였을 때 가장 높은 항혈전 활성(350 sec)과 균사체 생육 (6.2 mg/mL)을 나타내었으며 이의 결과는 Song et al (1995)이 보고한 P. linteus의 생육조건에서 peptone의 결과와 일치함을 알 수 있었다.
C, 25일간 배양하여 얻어진 균사체를 열수추출한 후 항혈전 활성을 측정하였다(Table 1). 각각의 항혈전 생산균주 중, P. linteus가 항혈전 활성이 167 sec로 다른 균주와 비교하여 볼 때 가장 뛰어난 것을 알 수 있었으며 최종균주로 선정되었다.
각종 버섯에서 항혈전 활성균주를 선별하기 위해 보관 균주 50여종과 임업협동조합에서 분양 받은 20여종의 균주를 대상으로 항혈전 활성을 검색한 결과, 항혈전 활성이 167 sec를 나타낸 상황버섯(Phellinus linteus)을 선별하였다. 본 균주가 생산하는 항혈전 활성의 본체를 파악하기 위해 pronase 처리와 periodate 산화를 행한 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P.
1%의 농도에서 상기에서 검토한 최적배지에 첨가하였다. 그 결과 Fig. 4에서와같이 Mg2+, Fe2+및 Zn2+등의 첨가 시 항혈전 활성과 균사체 생육이 상승하였으나 Ca2+, Cu2+ 및 Mn2+에서는 균사체 생육이 감소하는 경향을 나타내었다. Mg2+ 첨가 시에는 항혈전 활성이 380 sec, 균사체 생육이 7.
1). 그 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P. linteus가 생산하는 항혈전 활성의 본체는 다당에 기인되는 것으로 추정되었다.
2). 그 결과 soluble starch가 320 sec의 가장 높은 항혈전 활성과 균사체 생육(6.2 mg/mL)을 보였으며 단당류와 함께 다당류에서 항혈전 활성과 균사체 생육이 높게 나타낸 것을 알 수 있었다. 이는 P.
각종 버섯에서 항혈전 활성균주를 선별하기 위해 보관 균주 50여종과 임업협동조합에서 분양 받은 20여종의 균주를 대상으로 항혈전 활성을 검색한 결과, 항혈전 활성이 167 sec를 나타낸 상황버섯(Phellinus linteus)을 선별하였다. 본 균주가 생산하는 항혈전 활성의 본체를 파악하기 위해 pronase 처리와 periodate 산화를 행한 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P. linteus가 생산하는 항혈전 활성의 본체는 다당에기인되는 것으로 추정되었다. 항혈전 생산을 위한 최적 배양조건은 soluble starch 3.
이상의 검토 결과들로부터 P. linteus의 항혈전 생산의 배지조건을 soluble starch 3.0%, peptone 0.1%, MgSO4·7H2O 0.1%, K2HPO4 0.1%, pH 7.0으로 최적화시킬 수 있었다.
(1996)은 버섯의 경우 무기염류 중에서 K2HPO4의 결핍은 균사체 생육에 치명적이라고 보고하였다. 이에 K2HPO4 농도를 0.05~0.2%로 달리하여 항혈전 활성과 균사체 생육을 살펴본 결과(Fig. 5) 0.1% 첨가 시에 가장 높은 항혈전 활성(390 sec)과 균사체 생육 (8.5 mg/mL)을 보였다.
3과 같다. 항혈전 활성은 peptone, ammonium sulfate, sodium nitrate 순으로 균사체 생육은 peptone, ammonium chloride, sodium nitrate의 순으로 활성이 높았다. 0.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
순환기계 질환의 원인은 무엇인가?
현대인의 사망률 중 혈관 장애에 의한 순환기계 질환으로 사망자가 많은 수를 차지하고 있다. 이러한 순환기계 질환은 혈류부전, 혈관상해, 고혈압 등으로 나타나는데 이는 혈관 내에서 생성된 혈전이 원인이다. 혈전은 정맥 및 동맥에서 혈액의 순환을 방해하여 조직으로의 영양공급 및 산소공급을 차단함으로써 뇌출혈, 뇌혈전, 심부전, 심근경색, 동맥경화 등의 질환을 일으킨다(윤 등, 1986).
항혈전제에는 무엇이 있는가?
이에 따라 성인병의 중요한 치료제로서 혈전형성을 방지하고 생성된 혈전을 용해하는 용해제에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다(김 등, 1990; 윤 등, 1993; 윤 등, 1995; 백 등, 1995). 현재 항혈전제로는 유기 합성 제재인 coumarin과 warfarin, 소의 심장이나 돼지의 소장에서 추출한 heparin, 거머리에서 분리한 hirudin 등이 알려져 있다. Coumarin은 생체 투입 후 8~12시간이 지나서 항혈전 활성을 나타내며 소화관에서 쉽게 흡수되므로 내복용 항혈전제로 이용되고 있다.
항혈전 활성을 나타내는 항혈전제들이 가지고 있는 결점은 무엇인가?
Hirudin은 직접적으로 thrombin에만 작용하여 항혈전 활성을 나타내는 단백질이다. 이러한 항혈전제들은 반감기가 1~2시간으로 매우 짧고 장기적으로 사용할 때 혈소판 감소, 출혈, 골다공증의 부작용이 나타나고 분자량이 크고 극성이어서 세포막 통과가 불량하여 소화관에서 흡수되지 않으므로 주로 정맥내 혹은 피하주사를 해야 한다는 결점을 가지고 있다(김 등, 1992; 김 등, 1993; 김영식, 1990).
Choi, J. H., Ha, T. M., Kim, Y. H. and Rho, Y. D. 1996. Studies on the main factors affecting the mycelial growth of Phellinus linteus. Kor J Mycol 24:214-222.
Ikekawa, J., Nakamishi, M., Uehara, N., Chihara, G. and Fukuoka, F. 1968. Antitumor action of some basidiomycetes especially Phellinus lintenus. Gann 59:155-157.
Kim, G. Y., Han, M. G., Song, Y. S., Shin, Y. I., Lee, H. J., Moon, D. O., Lee, C. M., Kwak, J. Y., Bae, Y. S., Lee, J. D. and Park, Y. M. 2004. Proteoglycan isolated from Phellinus linteus induces toll-like recepteors 2- and 4-mediated maturation of murine dendritic cells via activation of ERK, p38, and NF-kappaB. Biol Pharm Bull 27:1656-1662.
Kim, G. Y., Oh, Y. H. and Park, Y. M. 2003. Acidic polysaccharide isolated from Phellinus linteus induces nitric oxide-mediated tumoreicidal activity of macrophage through protein tyrosine kinase and protein kinase C. Biochem Biophys Res Commum 309:399-407.
Song, K. S., Cho, S. M., Lee, J. H., Kim, H. M., Han, S. B., Ko, K. S. and Yoo, I. D. 1995. B-lymphocyte stimulating polysaccharide from Phellinus linteus. Chem Pharm Bull 43:2105-2110.
Yamada, H., Kiyohara, H., Cyong, J. C., Kojima, Y., Kumazawa, Y. and Otsuka, Y. 1984. Studies of polysaccharide from Angleica acutiloba. part I. Fractionation and biological properties of polysaccharides. Planta Med 50:163-167.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.