본 연구는 농산물로부터 S. aureus분리에 적합한 배지를 선발하고자 난황첨가 mannitol salt agar (MSA), 난황과 tellurite과 첨가된 Barid-Parker agar (BPA), 토끼혈장이 첨가된 Barid-Parker agar (BPA+RPF), 3M petrifilm Staph Express count plates (Petriflm) 및 CHROMagar Staphylococcus aureus (CSA)의 민감도, 특이도, 손상된 세포에 대한 회복능, 농산물로부터 회수율에 대하여 비교 실험을 하였다. 민감도와 특이도를 조사하기 위하여 S. aureus 21주, Stapylococcus spp. 20주, 그 외 식중독균 33주를 각 선택배지에 접종하였으며 손상된 세포에 대한 회복능은 조사를 위하여 열($60^{\circ}C$, 90초), 산(1% lactic acid, 10분), 저온($-20^{\circ}C$, 1시간) 처리하였다. 또한 양상추, 토마토, 고추에 S. aureus를 4.0 log CFU/g농도로 접종하고 각 선택배지에 도말하였다. 민감도는 BPA+RPF(100%) = CSA(100%)=petrifilm(100%) > MSA(90.5%) > BPA(90.5%), 특이도는 BPA+RPF(100%) = CSA(100%) > MSA(84.6%) > BPA(75.0%) > petrifilm(67.3%) 순으로 나타났다. 한편, 손상된 세포의 회복능과 농산물에서 회수율은 5종의 배지에서 차이가 없었다. 따라서 농산물 중 S. aureus를 분리할 시 BPA+RPF와 CSA를 사용하는 것이 가장 효과적일 것으로 판단된다.
본 연구는 농산물로부터 S. aureus분리에 적합한 배지를 선발하고자 난황첨가 mannitol salt agar (MSA), 난황과 tellurite과 첨가된 Barid-Parker agar (BPA), 토끼혈장이 첨가된 Barid-Parker agar (BPA+RPF), 3M petrifilm Staph Express count plates (Petriflm) 및 CHROMagar Staphylococcus aureus (CSA)의 민감도, 특이도, 손상된 세포에 대한 회복능, 농산물로부터 회수율에 대하여 비교 실험을 하였다. 민감도와 특이도를 조사하기 위하여 S. aureus 21주, Stapylococcus spp. 20주, 그 외 식중독균 33주를 각 선택배지에 접종하였으며 손상된 세포에 대한 회복능은 조사를 위하여 열($60^{\circ}C$, 90초), 산(1% lactic acid, 10분), 저온($-20^{\circ}C$, 1시간) 처리하였다. 또한 양상추, 토마토, 고추에 S. aureus를 4.0 log CFU/g농도로 접종하고 각 선택배지에 도말하였다. 민감도는 BPA+RPF(100%) = CSA(100%)=petrifilm(100%) > MSA(90.5%) > BPA(90.5%), 특이도는 BPA+RPF(100%) = CSA(100%) > MSA(84.6%) > BPA(75.0%) > petrifilm(67.3%) 순으로 나타났다. 한편, 손상된 세포의 회복능과 농산물에서 회수율은 5종의 배지에서 차이가 없었다. 따라서 농산물 중 S. aureus를 분리할 시 BPA+RPF와 CSA를 사용하는 것이 가장 효과적일 것으로 판단된다.
Five kinds of selective media, such as mannitol salt agar (MSA), Baird-Parker agar (BPA), Baird-Parker supplemented with rabbit plasma fibrinogen (BPA+RPF), CHROMagar Staphylococcus aureus (CSA), and Petrifilm Staph Express count system (Petrifilm), were compared to recommend the optimum selective m...
Five kinds of selective media, such as mannitol salt agar (MSA), Baird-Parker agar (BPA), Baird-Parker supplemented with rabbit plasma fibrinogen (BPA+RPF), CHROMagar Staphylococcus aureus (CSA), and Petrifilm Staph Express count system (Petrifilm), were compared to recommend the optimum selective media for isolation of Staphylococcus aureus from agricultural products. Seventy four target and non target bacteria were inoculated on five selective media to analyze sensitivity and specificity. In the recovery test of injured S. aureus cells, S. aureus was exposed to acid (1% lactic acid for 10 min), heat ($60^{\circ}C$ for 90s), and cold ($-20^{\circ}C$ for 1h) conditions. And artificially contaminated agricultural products (iceberg lettuce, green pepper, and cherry tomato) was enumerated on five selective media. The sensitivity of BPA+RPF, CSA, Petrifilm, MSA, and BPA were 100%, 100%, 100%, 90.5%, 90.5%, respectively. In addition, the specificity of BPA+RPF, CSA, MSA, BPA and Petrifilm were 100%, 100%, 84.6%, 75.0%, 67.3%, respectively. However, no difference among five selective media was observed in recovery on injured S. aureus cell and enumeration from agricultural products. This results suggest that BPA+RPF and CSA are the optimum media for detection of S. aureus from agricultural products.
Five kinds of selective media, such as mannitol salt agar (MSA), Baird-Parker agar (BPA), Baird-Parker supplemented with rabbit plasma fibrinogen (BPA+RPF), CHROMagar Staphylococcus aureus (CSA), and Petrifilm Staph Express count system (Petrifilm), were compared to recommend the optimum selective media for isolation of Staphylococcus aureus from agricultural products. Seventy four target and non target bacteria were inoculated on five selective media to analyze sensitivity and specificity. In the recovery test of injured S. aureus cells, S. aureus was exposed to acid (1% lactic acid for 10 min), heat ($60^{\circ}C$ for 90s), and cold ($-20^{\circ}C$ for 1h) conditions. And artificially contaminated agricultural products (iceberg lettuce, green pepper, and cherry tomato) was enumerated on five selective media. The sensitivity of BPA+RPF, CSA, Petrifilm, MSA, and BPA were 100%, 100%, 100%, 90.5%, 90.5%, respectively. In addition, the specificity of BPA+RPF, CSA, MSA, BPA and Petrifilm were 100%, 100%, 84.6%, 75.0%, 67.3%, respectively. However, no difference among five selective media was observed in recovery on injured S. aureus cell and enumeration from agricultural products. This results suggest that BPA+RPF and CSA are the optimum media for detection of S. aureus from agricultural products.
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문제 정의
따라서 본 연구는 농산물 중 S. aureus의 효율적인 검출을 위하여 4종의 선택배지와 1종의 petrifilm의 민감성, 선택성, 손상된 세포에 대한 복원력 및 농산물에서 회수능을 평가하여 S. aureus의 검출법 확립의 기초자료로 활용하고자 수행하였다.
본 연구는 농산물로부터 S. aureus분리에 적합한 배지를 선발하고자 난황첨가 mannitol salt agar (MSA), 난황과 tellurite과 첨가된 Barid-Parker agar (BPA), 토끼혈장이 첨가된 Barid-Parker agar (BPA+RPF), 3M petrifilm Staph Express count plates (Petriflm) 및 CHROMagar Staphylococcus aureus (CSA)의 민감도, 특이도, 손상된 세포에 대한 회복능, 농산물로부터 회수율에 대하여 비교 실험을 하였다. 민감도와 특이도를 조사하기 위하여 S.
본 연구에서는 각종 스트레스에 노출 시킨 S. aureus의 복원력을 평가하고자 산, 열, 저온 처리 후에 각 선택배지와 TSA에 도말하여 얻어진 결과는 Table 4에서 보는 바와 같다. TSA는 세균의 생육을 억제할 수 있는 선택성 물질이 함유되어 있지 않기 때문에 이 배지를 대조군으로 사용하였으며 손상된 세포의 회복능을 S.
제안 방법
20주, 그 외 식중독균 33주를 각 선택배지에 접종하였으며 손상된 세포에 대한 회복능은 조사를 위하여 열(60℃, 90초), 산(1% lactic acid, 10분), 저온(−20℃, 1시간) 처리하였다.
4종의 선택배지와 1종의 페트리필름의 민감도와 특이도를 분석하기 위하여 각 균주를 nutrient agar (NA: Oxoid) 에 접종하고 37℃에서 24시간 배양하였다. 이후 NA에서 배양한 균주를 한 백금이 취하여 TSB 100 μl가 든 96 well plate에 현탁시킨 후 37℃에서 24시간 배양시키고 각 선택배지에 멀티채널 피펫을 사용하여 2 μl씩 접종한 다음 37℃, 24시간 배양하였다.
S. aureus를 비롯한 74균주는 난황첨가 MSA, 난황과 tellurite과 첨가된 BPA, 토끼혈장이 첨가된 BPA+RPF, CSA 및 petrifilm에 대한 민감도와 특이도를 분석하였다. Table 2에서 보는 바와 같이 민감도는 MSA(90.
aureus의 복원력을 평가하고자 산, 열, 저온 처리 후에 각 선택배지와 TSA에 도말하여 얻어진 결과는 Table 4에서 보는 바와 같다. TSA는 세균의 생육을 억제할 수 있는 선택성 물질이 함유되어 있지 않기 때문에 이 배지를 대조군으로 사용하였으며 손상된 세포의 회복능을 S. aureus용 선택배지와 통계적 유의차를 보이지 않았다.
. 각 선택배지가 농산물에서 정량적으로 S. aureus를 손실없이 분리할 수 있는 지를 평가하고자 각종 농산물에 S. aureus를 인위적으로 접종한 후 선택배지에서 회수하였다. 그 결과는 Table 5에서 보는 바와 같이 농산물 종류별 선택배지별 유의적인 차이는 없었다.
선택배지는 특이도와 더불어 농산물 생산, 유통환경으로부터 다양한 종류의 스트레스를 받은 식중독 세균을 손실 없이 검출할 수 있어야 한다. 따라서 산, 열, 저온 스트레스에 노출 시킨 후 각 선택배지에서 회복능을 조사하였으며 그 과정은 다음과 같다. 먼저 S.
또한 각 선택배지의 농산물 표면에 존재하는 균주들을 저해 혹은 구별할 수 있는지를 조사하고자 3종의 농산물(양상추, 고추, 토마토)을 증균시킨 후 각 선택배지에 도말하였다. 그 결과 Table 3에서 보는 바와 같이 BPA에서 검고 주위에 투명환(clear zone)이 나타나는 colony와 petrifilm에서 짙은 보라색을 나타내는 colony를 관찰할 수 있었다.
20주, 그 외 식중독균 33주를 각 선택배지에 접종하였으며 손상된 세포에 대한 회복능은 조사를 위하여 열(60℃, 90초), 산(1% lactic acid, 10분), 저온(−20℃, 1시간) 처리하였다. 또한 양상추, 토마토, 고추에 S. aureus를 4.0 log CFU/g농도로 접종하고 각 선택배지에 도말하였다. 민감도는 BPA+RPF(100%) = CSA(100%) = petrifilm(100%) > MSA(90.
두 농도로 희석된 균액을 1 ml씩 페트리필름에 접종하고 37℃, 24시간 배양하였다. 배양 후 colony 색깔과 형태를 중심으로 양성, 음성, 위양성, 위음성을 판정하였고 위양성, 위음성 균주에 대해서는 각각의 선택배지에서 한번 더 획선배양하여 성상을 확인하고 최종 판정하였다.
이후 0.1% PW에서 10배 단계 희석하고 각 선택배지에 200 μl씩 도말하고 37℃ 24시간 배양한 후 각 선택배지에서 총세균수와 S. aureus 의심집락을 계수하였다.
1% PW에서 10배 단계 희석하고 각 선택배지와 TSA에 200 μl씩 도말하고 37℃에서 24시간 배양하였다. 이후 각 선택배지에서 전형적인 집락을 계수하였다.
대상 데이터
aureus 21주, Stapylococcus spp. 20주, 그 외 식중독균 33주이며 이들 균주는 식품의약품안전청, 질병관리본부, 농업유전자원정보센터, 한국미생물보존센터, 한국생명자원센터에서 분양받았다(Table 1). 각 균주는 10% glycerol이 함유된 tryptic soy broth (TSB)에 현탁 후 −70℃에서 보관하며 사용하였다.
농산물 중 S. aureus의 정량적 회수율을 조사하고자 특성이 서로 다른 세가지 농산물 (양상추, 고추, 토마토)을 모델식품으로 하였다. 농산물은 수원소재의 하나로마트에서 구입하였다.
aureus의 정량적 회수율을 조사하고자 특성이 서로 다른 세가지 농산물 (양상추, 고추, 토마토)을 모델식품으로 하였다. 농산물은 수원소재의 하나로마트에서 구입하였다. 앞서 회복력 시험에서 준비된 균액을 4.
각 균주는 10% glycerol이 함유된 tryptic soy broth (TSB)에 현탁 후 −70℃에서 보관하며 사용하였다. 연구에 사용된 배지는 난황첨가 mannitol salt agar (MSA: Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England), 난황과 tellurite가 첨가된 Barid-Parker agar (BPA: Oxoid), 토끼혈장이 첨가된 Barid-Parker agar (BPA+RPF: Oxoid), 3M petrifilm Staph Express count plates (petriflm: 3M, St. Paul, MN, USA) 및 CHROMagar Staphylococcus aureus (CS: CHROMagar, Paris, France)를 사용하였다.
데이터처리
각각의 처리군이 통계적으로 유의적으로 나타나는 경우에 (p < 0.05) 평균값은 LSD test를 통하여 다중비교를 하였다.
% 특이도 =음성 × 100 / (음성 +위양성)으로 산출하였다. 또한 회복능과 회수율조사는 3반복으로 수행하였며 관찰된 실험결과는 SAS 통계 프로그램(version 9.1, SAS Institute, NC, USA)의 ANOVA test를 이용하여 분석하였다. 각각의 처리군이 통계적으로 유의적으로 나타나는 경우에 (p < 0.
성능/효과
aureus 2주는 lipase와 lecithinase 를 생성·분비하는 능력이 약하여 MSA상에서 불투명환을, BPA 상에서 투명환을 형성하지 못한 것으로 판단된다. S. aureus가 아닌 균주(53주)가 음성으로 판단되는 정도를 특이도라 하였으며 5종의 선택배지의 특이도는 MSA(84.6%), BPA(75.0%), BPA+RPF(100%), CSA(100%), Petrifilm(67.3%)로 나타났다. 5종의 배지에서 다른 식중독균은 특이도에 영향을 주지 않았지만 S.
aureus를 비롯한 74균주는 난황첨가 MSA, 난황과 tellurite과 첨가된 BPA, 토끼혈장이 첨가된 BPA+RPF, CSA 및 petrifilm에 대한 민감도와 특이도를 분석하였다. Table 2에서 보는 바와 같이 민감도는 MSA(90.5%), BPA(90.5%), BPA+RPF(100%), CSA(100%), petrifilm(100%)로 나타나 BPA+RPF, CSA, petrifilm의 민감도가 높았다. 들깻잎에서 분리된 S.
한편, 손상된 세포의 회복능과 농산물에서 회수율은 5종의 배지에서 차이가 없었다. 따라서 농산물 중 S. aureus를 분리할 시 BPA+RPF 와 CSA를 사용하는 것이 가장 효과적일 것으로 판단된다.
aureus를 색깔로 쉽게 육안으로 구별할 수 있어서 확인시험에 소요되는 인력, 시간 및 비용을 줄일 수 있다. 따라서 민감도, 특이도, 회수율 측면을 고려해 볼 때 농산물 중 S. aureus를 분리할 시 BPA+RPF 와 CSA를 사용하는 것이 가장 효과적일 것으로 판단된다. 또한 효율성이 높은 이들 배지를 식품공전에 등재시켜 제도권내로 도입한다면 보다 신속하게 S.
하지만 BPA+RPF는 coagulase 양성균주를 손쉽게 분리할 수 있는 장점이 있고, CSA는 기타 Staphylococcus spp. 속들과 S. aureus를 색깔로 쉽게 육안으로 구별할 수 있어서 확인시험에 소요되는 인력, 시간 및 비용을 줄일 수 있다. 따라서 민감도, 특이도, 회수율 측면을 고려해 볼 때 농산물 중 S.
그 결과 Table 3에서 보는 바와 같이 BPA에서 검고 주위에 투명환(clear zone)이 나타나는 colony와 petrifilm에서 짙은 보라색을 나타내는 colony를 관찰할 수 있었다. 이들 colony를 VITEK으로 동정한 결과 Staphylococcus hominis, Staphylococcus xylosus으로 확인되었다. Oh14) 등은 MSA, BPA, BPA+RPF, petrifilm에서 민감성과 선택성을 비교한 결과 민감성은 MSA(76.
후속연구
aureus를 분리할 시 BPA+RPF 와 CSA를 사용하는 것이 가장 효과적일 것으로 판단된다. 또한 효율성이 높은 이들 배지를 식품공전에 등재시켜 제도권내로 도입한다면 보다 신속하게 S. aureus에 오염된 농산물을 선별해 낼 수 있어 농식품안전관리 수준을 향상시킬 수 있을것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
과거의 식중독 발생의 원인은 무엇인가?
최근 국민들의 생활수준 향상과 건강에 대한 관심 증대로 육식보다 채식, 그리고 가공식품보다 자연 식품을 선호하고 있다. 과거의 식중독 발생은 고기류와 생선 등 단백질이 풍부한 식품에 의한 식중독이 대부분을 차지하고 있었으나 최근에는 과일과 채소 등에서 비롯된 식중독 사례가 증가하고 있다1-2). 또한 신선과채류를 통하여 발생하는 식중독은 대부분 주변의 환경으로부터 오염된 식품을 섭취함으로써 발생하는데 미생물에 의한 것이 많은 비중을 차지하고 있다고 보고되고 있다3-4).
최근에는 어떤 부류에서 식중독 발생이 증가하는가?
최근 국민들의 생활수준 향상과 건강에 대한 관심 증대로 육식보다 채식, 그리고 가공식품보다 자연 식품을 선호하고 있다. 과거의 식중독 발생은 고기류와 생선 등 단백질이 풍부한 식품에 의한 식중독이 대부분을 차지하고 있었으나 최근에는 과일과 채소 등에서 비롯된 식중독 사례가 증가하고 있다1-2). 또한 신선과채류를 통하여 발생하는 식중독은 대부분 주변의 환경으로부터 오염된 식품을 섭취함으로써 발생하는데 미생물에 의한 것이 많은 비중을 차지하고 있다고 보고되고 있다3-4).
신선과채류를 통하여 발생하는 식중독의 원인균은 무엇인가?
또한 신선과채류를 통하여 발생하는 식중독은 대부분 주변의 환경으로부터 오염된 식품을 섭취함으로써 발생하는데 미생물에 의한 것이 많은 비중을 차지하고 있다고 보고되고 있다3-4). 과일과 채소로 인한 식중독 원인균으로는 Salmonella spp., Escherichia coli O157: H7, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus등이 있다. 그 중 S.
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