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문제 정의
- NO 생성량을 측정함으로서 면역에 대한 효능을 확인해보고자 하였다. 실험의 결과는 Fig.
- 상기와 같은 활성 실험 결과에서 유산균 발효를 통한 아로니아 추출물의 효능이 왜 좋은가에 대한 설명 및 입증하기 위하여 아로니아의 지표물질 함량에 대한 일반 추출법과 발효 추출의 상관관계를 알아보고자 하였다. 아로니아 시료와 아로니아에 함유되어있다고 알려진 cya-gal을 standard로 하여 HPLC 분석을 하고 (Marie et al.
- 염증 생성에 주 원인이 되는 PGE2 생성량을 확인함으로서 아로니아의 염증억제에 대한 효능을 확인해보고자 실시하였다. 그 결과는 Fig.
- 이 점에 착안하여 본 연구에서는 항산화, 항염증효능에 대해 효능이 있다고 알려진 아로니아를 종래 공정법인 열수 추출물과 에탄올 추출물 중 실험을 통하여 효율이 더 좋게 확인된 에탄올 추출물을 발효시킴으로서 기존의 보고되지 못했던 발효 아로니아의 항염에 대한 효과를 확인하여 유산균 발효 아로니아에 대한 항염증 효능의 증진을 확인하고 향장소재로서의 이용가치를 검증하기 위해 실험을 진행하였다.
- , 2012). 이처럼 기존에 알려진 아로니아의 효능을 바탕으로 하여 기존에 아로니아의 발효에 대한 연구가 매우 적기 때문에, 유산균을 이용한 아로니아의 발효를 이용한 항염증에 대한 효능 증진을 통하여 향장제품 소재 개발의 폭을 넓히기 위한 연구를 진행하였다.
제안 방법
- 2 × 106 cells/㎖ 만큼 96-well plate에 주입한 뒤 24시간 배양하였다. 24시간 후 아로니아 추출물 시료를 0.5 ㎎/㎖의 농도로 처리한 뒤 추가로 시료에 LPS (Lipopolysaccharide)를 처리하여 각 well에 200 ㎕가 되도록 하고, 시료에 LPS를 처리한 군과 처리하지 않은 군을 나누어 샘플처리 한 뒤 24시간 동안 다시 배양하였다. 24시간 뒤 샘플의 상층액 50 ㎕를 취하여 새로운 96-well plate에 옮기고 난 뒤 Griess 시약 50 ㎕를 첨가하고 15분 간 반응하였다.
- Cytokine 생성량은 IL-6 (Interleukin-6), TNF-α (Tumor necrosis factor-alpha)의 정량 kit를 통하여 측정하였다.
- 8 ㎖/ min하고, 칼럼의 온도는 30℃로 유지하였다. HPLC의 크로마토그램은 520 ㎚의 파장에서 측정하여 비교분석하였다.
- 3에 나타내었다. NO는 사이토 카인 및 LPS 같은 내독소에 의해 생성되며, 염증 유발로 인하여 생성된 NO 생성량을 확인함으로서 아로니아 샘플의 항염증의 효과를 알아보았다. 실험은 LPS 처리군과 무처리군으로 나누어 진행하여 그 결과 값을 확인하였다.
- TNF-α 역시 kit 실험 전까지 IL-6와 동일한 샘플처리를 한후 동일한 회사의 kit인 Quantikine ELISA Mouse TNF-α kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 TNF-α의 양을 확인하였다.
- 항산화능이 높을수록 색은 진하며 흡광값은 높게 나타난다. 단일물질인 cyanidin-galactoside (cya-gal)의 경우 0.02 ㎎/㎖의 농도로 진행하였으며, 아로니아 1g당 20 ㎎의 안토시아닌이 함량 되어있다고 보고한 선행 연구를 참고하여 1.0 ㎎/㎖농도의 추출물과 비교하기 위하여 농도를 설정하였다 (Jan and Aneta, 2005). 아로니아 시료와 대표적인 항산화물질인 ascorbic acid을 비교하였을 때, ascorbic acid는 0.
- NO는 사이토 카인 및 LPS 같은 내독소에 의해 생성되며, 염증 유발로 인하여 생성된 NO 생성량을 확인함으로서 아로니아 샘플의 항염증의 효과를 알아보았다. 실험은 LPS 처리군과 무처리군으로 나누어 진행하여 그 결과 값을 확인하였다. Cya-gal의 경우 LPS 처리시 9.
- 상기와 같은 활성 실험 결과에서 유산균 발효를 통한 아로니아 추출물의 효능이 왜 좋은가에 대한 설명 및 입증하기 위하여 아로니아의 지표물질 함량에 대한 일반 추출법과 발효 추출의 상관관계를 알아보고자 하였다. 아로니아 시료와 아로니아에 함유되어있다고 알려진 cya-gal을 standard로 하여 HPLC 분석을 하고 (Marie et al., 2013), 그에 대한 결과를 Fig. 6와 Table 1에 나타내었다. 그 결과 일반적인 추출법 중 아로니아 열수 추출물에 비해 70% 에탄올 추출물의 cya-gal 의 함량이 14배 높게 나온 것을 확인할 수 있었다.
- 시료 제조에 사용된 아로니아는 2013년도 산 단양군에서 채취한 아로니아를 사용하였다. 아로니아 시료의 추출은 열수, 에탄올, 발효 추출 3가지 추출방법으로 각각 수직 환류냉각기가 설치되어있는 둥근바닥 플라스크를 사용하여 수행하였다. 열수추출물은 1 ℓ의 증류수에 아로니아 열매 100 g을 사용하여 100℃의 조건에서 24시간 추출하였고, 에탄올 추출물 또한 동일한 조건에서 용매를 70% 에탄올로 하여 80℃에서 24시간 추출하였다.
- 아로니아 추출물의 항산화 효능을 평가하기 위하여 샘플의 농도별로 측정하였으며, Fig. 1에 그 결과를 확인하였다. 항산화능이 높을수록 색은 진하며 흡광값은 높게 나타난다.
- 아로니아의 열수 추출물, 70%에탄올 추출물, 발효시킨 열수 추출물 그리고 발효 70% 에탄올 추출물로 HPLC 측정을 실시하였으며, 샘플은 1000 ppm의 농도로 하였고 standard 안토시아닌 (cyanidin-3-galactoside, chromadex, Irvine, CA, USA)은 100 ppm 으로 분석하여 비교하였다. 조건은 아로니아의 안토시아닌함량에 대한 연구에서 참고하였다 (Marie B et al.
- 발효 추출물의 경우 아로니아 100 g을 유산균 Lactobacillus rhamnosus에 7일 동안 37℃, 90 rpm에서 배양하였으며, 배양한 뒤 상기와 마찬가지로 70% 에탄올 추출 후 아로니아 추출액을 감압여과기를 사용하여 여과하였다. 여과 후에 회전식 감압농축기 (EYELA N-1000, Tokyo Rikakikai Co., Tokyo, Japan)로 농축한 후, 동결건조기 (PVTFA 10AT, ILSHINBioBase, Dongducheon, Korea)에 72시간동안 동결건조하여 분말로 만들어 실험을 진행하였다.
- , 2008; Oren-shamir and Levi-nissim, 1997), 보다 높은 온도에서 추출한 열수추출물의경우 안토시아닌의 한 종류인 standard 물질의 파괴 및 변성으로 인하여 수용성인 안토시아닌이라 하더라도 그 함량이 매우 미미하게 관찰된 것으로 확인되며, 70% 에탄올 추출물은 물과 에탄올이 같이 있을뿐더러 열수 추출물보다 저온에서 추출하기 때문에 상대적으로 안토시아닌의 파괴 및 변성이 덜 일어났기 때문에 안토시아닌의 손실이 적어 standard의 함량이 더 높은 것으로 사료된다. 열수 추출물보다는 에탄올 추출물의 안토시아닌 함량이 더 많아 유산균을 통한 발효를 에탄올 추출물로 실시함으로서 발효 추출물에 대한 안토시아닌의 함량을 확인하였다. Fig.
- 아로니아 시료의 추출은 열수, 에탄올, 발효 추출 3가지 추출방법으로 각각 수직 환류냉각기가 설치되어있는 둥근바닥 플라스크를 사용하여 수행하였다. 열수추출물은 1 ℓ의 증류수에 아로니아 열매 100 g을 사용하여 100℃의 조건에서 24시간 추출하였고, 에탄올 추출물 또한 동일한 조건에서 용매를 70% 에탄올로 하여 80℃에서 24시간 추출하였다. 발효 추출물의 경우 아로니아 100 g을 유산균 Lactobacillus rhamnosus에 7일 동안 37℃, 90 rpm에서 배양하였으며, 배양한 뒤 상기와 마찬가지로 70% 에탄올 추출 후 아로니아 추출액을 감압여과기를 사용하여 여과하였다.
- 6 ㎜)을 사용하였다. 이동상은 (A)HCOOH-H2O (1 : 9), (B)HCOOH-MeOH-H2O (1 : 5 : 4)의 비율로 하여 (A) 100%에서 시간은 0~2분, (A) 30%, (B) 70%에서 220분 구간, (B) 100%에서 20 ~ 22분 구간 그리고 (A) 100%에서 22 ~ 24분 구간을 측정하였다. 모든 시료는 0.
- 피부면역에 대한 활성평가를 하기에 앞서, 아로니아 시료의 세포독성을 확인하기 위하여 MTT 용액을 이용한 세포 독성을 측정하였다. 세포 독성평가의 결과로 cya-gal은 5.
대상 데이터
- Nitric Oxide 생성량 측정은 RAW 264.7 세포를 사용하였다. 세포를 1.
- 고성능 액체크로마토그래피 (Aglient 1260 series, Aglient, Santa Clara, CA, USA)를 사용하였으며, 칼럼은 Jupiter 5u C18 3000A (150 × 4.6 ㎜)을 사용하였다.
- 7과 Jurkat T 세포, HDF (Human dermal fibroblasts) 세포는 한국세포주은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 동결 된 것으로 구입하였다. 구입한 세포는 DMEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA)배지에 10% fetal bovine serum (Gibco, Carlsbad, CA, USA)을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하였다. 그 밖에 사용된 모든 시약들은 Sigma-Aldrich (St.
- 구입한 세포는 DMEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA)배지에 10% fetal bovine serum (Gibco, Carlsbad, CA, USA)을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하였다. 그 밖에 사용된 모든 시약들은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)을 통하여 구입, 사용하였다.
- 시료 제조에 사용된 아로니아는 2013년도 산 단양군에서 채취한 아로니아를 사용하였다. 아로니아 시료의 추출은 열수, 에탄올, 발효 추출 3가지 추출방법으로 각각 수직 환류냉각기가 설치되어있는 둥근바닥 플라스크를 사용하여 수행하였다.
- 쥐의 대식세포인 RAW 264.7과 Jurkat T 세포, HDF (Human dermal fibroblasts) 세포는 한국세포주은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 동결 된 것으로 구입하였다. 구입한 세포는 DMEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA)배지에 10% fetal bovine serum (Gibco, Carlsbad, CA, USA)을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하였다.
데이터처리
- 모든 실험의 데이터 통계처리는 3회 반복하였으며, 실험값의 통계는 SPSS 프로그램을 통하여 Duncan’s Multiple Range Test (DMRT) 방법으로 처리하였다.
이론/모형
- 아로니아의 열수 추출물, 70%에탄올 추출물, 발효시킨 열수 추출물 그리고 발효 70% 에탄올 추출물로 HPLC 측정을 실시하였으며, 샘플은 1000 ppm의 농도로 하였고 standard 안토시아닌 (cyanidin-3-galactoside, chromadex, Irvine, CA, USA)은 100 ppm 으로 분석하여 비교하였다. 조건은 아로니아의 안토시아닌함량에 대한 연구에서 참고하였다 (Marie B et al., 2013). 고성능 액체크로마토그래피 (Aglient 1260 series, Aglient, Santa Clara, CA, USA)를 사용하였으며, 칼럼은 Jupiter 5u C18 3000A (150 × 4.
- 환원력 측정은 Oyaizu 방법 (1986)을 참고하였다. 0.
성능/효과
- NO생성과 마찬가지로 발효를 실시하였을 때 그 생성량이 점차 낮아지는 것을 알 수 있었다. 0.25 ~ 0.75 ㎎/㎖의 농도에서는 에탄올 추출물과 발효 에탄올 추출물의 생성량이 유의적인 차이를 나타내지 않았으나, 가장 높은 1.0 ㎎/㎖의 농도에서 발효시킨 에탄올 추출물의 PGE2 생성량이 다른 추출물과 비교하여 확연하게 낮은 생성량을 나타내었다. 발효 에탄올 추출물에서 가장 낮게 측정된 PGE2생성량은 152 pg/㎖ 로 측정되었고 이 값은 같은 발효를 통한 황금 추출물에 대한 항염증 연구에서 측정되었던 PGE2생성량 392 pg/㎖과 비교하여 (Choi et al.
- 열수 추출물보다는 에탄올 추출물의 안토시아닌 함량이 더 많아 유산균을 통한 발효를 에탄올 추출물로 실시함으로서 발효 추출물에 대한 안토시아닌의 함량을 확인하였다. Fig. 6의 (D)와 Table 1에서 타겟물질로 한 지표물질인 발효 에탄올 추출물의 안토시아닌 cya-gal의 함량이 증가하는 것을 확인하였고, 그 외에 물질에 대한 피크를 살펴보면 일반 에탄올 추출물과 비교하였을 때 그 크기가 감소하는 피크를 확인하였다. 이와 반대로 지표물질 안토시아닌과 마찬가지로 증가하는 피크 또한 확인하였으며 16분 직후에서는 에탄올 추출물에서 볼 수 없었던 피크 또한 새롭게 나타난 것을 확인할 수 있었다.
- , 2008; Orenshamir and Levi-nissim, 1997), 이에 더해 발효 에탄올 추출물의 안토시아닌 함량 증진을 확인하였다. HPLC chromatogram 에서 일부 피크에서 마찬가지로 일반 에탄올 추출물보다 발효에탄올 추출물에서 증가하는 피크를 볼 수 있었으나 반대로 감소하는 피크의 물질 또한 존재함을 확인하였다. 발효를 실시함으로서 안토시아닌의 함량 증가를 도모할 수 있으며, 항염증 효능이 증진됨을 확인하였다.
- 5에 나타내었다. IL-6의 생성량은 발효 전보다 발효 후에 IL-6의 생성량이 저감되는 것을 확인할 수 있었으며 발효한 70% 에탄올 추출물에서 가장 낮은 IL-6의 생성량을 확인할 수 있었다. 단일물질인 cya-gal은 에탄올 추출물보다는 다소 높은 생성량을 나타내었다.
- 6와 Table 1에 나타내었다. 그 결과 일반적인 추출법 중 아로니아 열수 추출물에 비해 70% 에탄올 추출물의 cya-gal 의 함량이 14배 높게 나온 것을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과는 안토시아닌의 열에 대한 변성 및 파괴에 대한 선행연구를 참고하여 (Choung et al.
- 735의 흡광도를 보였다. 낮은 농도에서는 추출방법별 샘플간의 유의적인 차이가 확인되지 않았으나, 농도가 증가할수록 그 차이가 증가함을 확인하였다. 상기와 같은 결과를 보면 일반적인 종래 추출법 중 에탄올 추출물의 항산화 효능이 더 높게 측정되었고, 이러한 에탄올 추출물에 유산균을 통한 발효를 실시함으로서 에탄올 추출물에 비해 더욱 증진된 항산화 효능을 확인하였으며, 발효 추출물의 환원력은 같은 안토시아닌이 함유된 복분자 연구에서의 환원력과 비교하였을 때 (Park et al.
- 4에 나타내었다. 단일물질인 cya-gal은 0.02 ㎎/㎖의 농도에서 대부분의 아로니아 시료 0.5 ~ 0.75 ㎎/㎖농도의 PGE2 생성량을 보였으며, 모든 샘플에 대하여 농도에따라 PGE2의 생성량이 감소하는 것을 확인할 수 있다. NO생성과 마찬가지로 발효를 실시하였을 때 그 생성량이 점차 낮아지는 것을 알 수 있었다.
- 5 pg/㎖의 생성량을 보여 일반 에탄올 추출물보다 낮은 생성량이 확인되었으며, 이를 통해 발효공정을 실시함으로서 염증을 억제하는 효능이 증진된 것을 확인하였다. 두 사이토카인에 대하여 에탄올 추출물의 사이토카인 억제활성이 뛰어났으며, 더 좋은 효능을 보인 에탄올 추출물을 이용하여 유산균 발효를 실시하였을 때, 그 효과가 더욱 증진된 것을 확인하였다.
- , 2013), 적은 생성량으로 보아 유산균을 통하여 발효된 아로니아 시료는 NO생성억제에 대한 효능이 있음을 확인할 수 있었다. 또한 유산균을 통한 발효를 실시함으로서 기존의 추출물보다 NO 생성에 대한 억제능이 증진된 것을 알 수 있다.
- 0 ㎎/㎖의 농도에서 발효시킨 에탄올 추출물의 PGE2 생성량이 다른 추출물과 비교하여 확연하게 낮은 생성량을 나타내었다. 발효 에탄올 추출물에서 가장 낮게 측정된 PGE2생성량은 152 pg/㎖ 로 측정되었고 이 값은 같은 발효를 통한 황금 추출물에 대한 항염증 연구에서 측정되었던 PGE2생성량 392 pg/㎖과 비교하여 (Choi et al., 2013), 상당히 낮은 값을 확인하였고 이와 같은 PGE2의 생성량을 확인함으로서 항염증에 대한 효능 역시 뛰어나며 발효공정을 실시하였을 때 그 값이 증진됨을 확인하였다.
- HPLC chromatogram 에서 일부 피크에서 마찬가지로 일반 에탄올 추출물보다 발효에탄올 추출물에서 증가하는 피크를 볼 수 있었으나 반대로 감소하는 피크의 물질 또한 존재함을 확인하였다. 발효를 실시함으로서 안토시아닌의 함량 증가를 도모할 수 있으며, 항염증 효능이 증진됨을 확인하였다. 상기와 같은 결과를 통하여 발효한 아로니아 추출물은 염증에 대한 억제 기능이 증진됨을 확인하여 아토피, 여드름 등 염증관련 피부민감성 질환에 대한 제품의 소재로서 각광받아 향장산업에 크게 기여할 수 있을 것으로 보인다.
- 발효한 에탄올 추출물이 일반 추출물보다 세포독성이 높긴 하나 이 값은 세포실험을 진행함에 있어 독성이 실험에 영향을 끼칠 만큼 높지 않은 것으로 판단하였다. 기타 다른 향장 연구가 보고된 더덕에 대한 선행연구와 비교하였을 때 20%미만의 독성을 가지는 것으로 보아 (Kim et al.
- 상기와 같은 결과 값은 면역효능이 있다고 보고된 지치의 논문에서 같은 조건하에 NO생성량이 10.5 μM인 것을 확인하였을 때 (Seo et al., 2013), 적은 생성량으로 보아 유산균을 통하여 발효 된 아로니아 시료는 NO생성억제에 대한 효능이 있음을 확인할 수 있었다.
- 낮은 농도에서는 추출방법별 샘플간의 유의적인 차이가 확인되지 않았으나, 농도가 증가할수록 그 차이가 증가함을 확인하였다. 상기와 같은 결과를 보면 일반적인 종래 추출법 중 에탄올 추출물의 항산화 효능이 더 높게 측정되었고, 이러한 에탄올 추출물에 유산균을 통한 발효를 실시함으로서 에탄올 추출물에 비해 더욱 증진된 항산화 효능을 확인하였으며, 발효 추출물의 환원력은 같은 안토시아닌이 함유된 복분자 연구에서의 환원력과 비교하였을 때 (Park et al., 2014), 항산화능이 훨씬 더 뛰어난 것을 확인하였다.
- 피부면역에 대한 활성평가를 하기에 앞서, 아로니아 시료의 세포독성을 확인하기 위하여 MTT 용액을 이용한 세포 독성을 측정하였다. 세포 독성평가의 결과로 cya-gal은 5.15%만큼의 독성을 보였으며, 아로니아 시료 중 가장 독성이 높은 추출물은 발효를 통한 70% 에탄올 추출물로 1.0 ㎎/㎖의 농도에서 12.06%의 독성이 확인되었다. 뒤를 이어 70% 에탄올 추출물이 8.
- 아로니아 추출물을 이용한 각 활성실험에서 발효 에탄올 추출물의 항염증에 대한 활성이 두드러지게 나타난 것을 확인할 수 있었다. 실험결과에서 cya-gal만으로도 항염증에 대한 효능을 확인하여 HPLC의 측정결과와 활성실험결과를 비교하면 추출별 아로니아 시료의 cya-gal의 함량이 증가할수록 항염증에 대한 효능이 증진됨을 확인하였다. 아로니아를 발효함으로서 항염증 효능이 증가하였으나, 사용한 유산균 lactobacillus rhamnosus 자체의 항염증에 대한 효과가 있어 (Lin et al.
- 단일물질인 cya-gal은 에탄올 추출물보다는 다소 높은 생성량을 나타내었다. 아로니아 시료는 에탄올 추출물을 이용하여 발효를 실시하였을 때, 발효 70% 에탄올 추출물은 3.5 pg/㎖의 생성량을 보여 아로니아를 발효 함으로서 IL-6생성량이 저감되어 항염증에 대한 효과를 향상시킬 수 있는 것을 확인하였다. TNF-α 생성량 역시 확인하여 Table 2에 나타내었다.
- 아로니아 추출물을 이용한 각 활성실험에서 발효 에탄올 추출물의 항염증에 대한 활성이 두드러지게 나타난 것을 확인할 수 있었다. 실험결과에서 cya-gal만으로도 항염증에 대한 효능을 확인하여 HPLC의 측정결과와 활성실험결과를 비교하면 추출별 아로니아 시료의 cya-gal의 함량이 증가할수록 항염증에 대한 효능이 증진됨을 확인하였다.
- , 2010), 이것에 대한 연구가 더욱 필요할 것을 보인다. 아로니아에 함유된 안토시아닌 cya-gal을 기준 물질로 하여 추출법별 안토시아닌 함량을 측정하였을 때, 열수 보다 에탄올 추출물의 함량이 높게 측정되었다. 이는 열에 따른 안토시아닌의 변성 및 파괴 그리고 함량에 대한 선행연구를 확인하였을 때 열수 추출물의 고온으로 인한 안토시아닌의 변성 및 파괴로 확인되며 (Choung et al.
- 역시 IL-6와 마찬가지로 에탄올 추출물을 발효하여 TNF-α의 생성 저해 정도를 확인하였을 때, 발효 70% 에탄올 추출물이 865.5 pg/㎖의 생성량을 보여 일반 에탄올 추출물보다 낮은 생성량이 확인되었으며, 이를 통해 발효공정을 실시함으로서 염증을 억제하는 효능이 증진 된 것을 확인 하였다.
- 또한, 안토시아닌의 함량 증가는 유산균 발효를 실시함으로서 낮아진 pH가 안토시아닌의 안정성에 영향을 준 것으로 사료된다 (Hwang and Ki, 2013). 이를 토대로 확인하였을 때 상기의 HPLC 결과에 대하여 발효를 통하여 cya-gal의 함량이 증가하였으며, 증가된 안토시아닌의 함량은 앞서 진행한 항염증의 효능 결과에 영향을 미쳤을 것으로 사료된다.
- 2 ㎎/㎖농도의 ascorbic acid보다 농도는 10배 낮지만 절반에 가까운 흡광값으로 보아 단일물질의 환원력을 확인할 수 있다. 이에 반해 아로니아 시료의 흡광값을 살펴보면 가장 높게 확인된 흡광도가 1.0 ㎎/㎖의 농도에서 발효 아로 니아 70% 에탄올 추출물이 0.832로 측정되었으며, 70% 에탄올 추출물이 0.735의 흡광도를 보였다. 낮은 농도에서는 추출방법별 샘플간의 유의적인 차이가 확인되지 않았으나, 농도가 증가할수록 그 차이가 증가함을 확인하였다.
- 6의 (D)와 Table 1에서 타겟물질로 한 지표물질인 발효 에탄올 추출물의 안토시아닌 cya-gal의 함량이 증가하는 것을 확인하였고, 그 외에 물질에 대한 피크를 살펴보면 일반 에탄올 추출물과 비교하였을 때 그 크기가 감소하는 피크를 확인하였다. 이와 반대로 지표물질 안토시아닌과 마찬가지로 증가하는 피크 또한 확인하였으며 16분 직후에서는 에탄올 추출물에서 볼 수 없었던 피크 또한 새롭게 나타난 것을 확인할 수 있었다. Table 1에서 지표물질인 cya-gal 의 함량을 비교하면 발효한 에탄올 추출물은 기존의 에탄올 추출물보다 많은 4.
후속연구
- 발효를 실시함으로서 안토시아닌의 함량 증가를 도모할 수 있으며, 항염증 효능이 증진됨을 확인하였다. 상기와 같은 결과를 통하여 발효한 아로니아 추출물은 염증에 대한 억제 기능이 증진됨을 확인하여 아토피, 여드름 등 염증관련 피부민감성 질환에 대한 제품의 소재로서 각광받아 향장산업에 크게 기여할 수 있을 것으로 보인다.
- 실험결과에서 cya-gal만으로도 항염증에 대한 효능을 확인하여 HPLC의 측정결과와 활성실험결과를 비교하면 추출별 아로니아 시료의 cya-gal의 함량이 증가할수록 항염증에 대한 효능이 증진됨을 확인하였다. 아로니아를 발효함으로서 항염증 효능이 증가하였으나, 사용한 유산균 lactobacillus rhamnosus 자체의 항염증에 대한 효과가 있어 (Lin et al., 2009; Donato et al., 2010), 이것에 대한 연구가 더욱 필요할 것을 보인다. 아로니아에 함유된 안토시아닌 cya-gal을 기준 물질로 하여 추출법별 안토시아닌 함량을 측정하였을 때, 열수 보다 에탄올 추출물의 함량이 높게 측정되었다.
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