이론/모형

• 균주의 2차 선별을 위해 1차 선별된 효모를 대상으로 TLC 분석을 시행하였으며, Amarowicz 등[17]의 방법을 참고하였다. TLC에서 확인된 band

  성능/효과

  • 또한, 균체가 증식됨에 따라 pH는 6에서 5까지 감소하였다. 5% 아로니아 추출물을 첨가했을 때 K. servazzii MTY2의 최적 발효조건을 실험한 결과, 탄소원 경우 glucose 10% (w/v) 첨가 시 균체의 생육이 가장 높았으며, 10% (w/v) glucose 고정으로 질소원 실험 결과 3% (w/v) tryptone 첨가시 균체 생육이 높았다. 마지막으로 glucose 10% (w/v)와 tryptone 3% (w/v)를 고정으로 하고 무기염류 실험 결과 sodium chloride 0.
  • servazzii MTY2로 명명하였다. K. servazzii MTY2의 생육은 배양 3시간 이후부터 급격하게 증가하였으며, 9시간에 최대 증식을 나타내었다. 또한, 균체가 증식됨에 따라 pH는 6에서 5까지 감소하였다.
  • 젓갈에서 분리한 효모를 이용하여 아로니아의 탄닌 성분 저감화에 대해 조사하였다. TLC 실험을 통하여 최종 선별된 MTY2 균주는 18S rDNA sequence에 의해 Kazachstania servazzii으로 동정되어 K. servazzii MTY2로 명명하였다. K.
  • 후)염기 서열을">염기서열을 NCBI에서 BLASTN 프로그램을 이용하여 GenBank의 18S rDNA sequence와 비교한 결과, Kazachstania속과 가장 높은 상동성을 나타내었다. 각 Kazachstania 유전자에 속하는 종들과 염기서열의 상동성을 비교한 결과, Kazachstania servazzii와 99% 상동성을 나타내어 본 선정균주를 최종적으로 K. servazzii MTY2라 명명하였다.
  • 5). 따라서 K. servazzii MTY2 균주가 위 조건에서 탄닌 성분을 저감화하는 것으로 판단되었다. Tryptone 3% (w/v) 농도로 배양된 반응물의 경우 탄소원과 마찬가지로 질소원에서도 10분에 (+)-catechin peak가 확인되었지만, (-)-epicatechin peak는 작은 면적으로 검출되었다.
  • 또한 탄소원, 질소원, 무기염류 각각의 균체 생장이 가장 잘된 배양액을 수포화-n-butanol로 추출, 농축하여 HPLC 분석을 한 결과 (+)-catechin peak는 모든 조건에서 꾸준히 존재하였지만, (-)-epicatechin peak는 glucose 10% (w/v) 첨가의 조건으로 배양할 시 검출되지 않았다. 따라서, K. servazzii MTY2을 glucose 10% (w/v) 첨가의 조건으로 아로니아와 함께 발효시킬 경우, 탄닌 성분의 저감화가 가능할 것으로 판단하였다. 따라서 탄닌 성분의 저감화를 통해 특유의 1% (w/v)를 첨가했을 때 가장 높은 균체 생육을 보였다. 또한 탄소원, 질소원, 무기염류 각각의 균체 생장이 가장 잘된 배양액을 수포화-n-butanol로 추출, 농축하여 HPLC 분석을 한 결과 (+)-catechin peak는 모든 조건에서 꾸준히 존재하였지만, (-)-epicatechin peak는 glucose 10% (w/v) 첨가의 조건으로 배양할 시 검출되지 않았다. 따라서, K.
  • 후)균체생육이">균체 생육이 높았다. 마지막으로 glucose 10% (w/v)와 tryptone 3% (w/v)를 고정으로 하고 무기염류 실험 결과 sodium chloride 0.1% (w/v)를 첨가했을 때 가장 높은 균체 생육을 보였다. 또한 탄소원, 질소원, 무기염류 각각의 균체 생장이 가장 잘된 배양액을 수포화-n-butanol로 추출, 농축하여 HPLC 분석을 한 결과 (+)-catechin peak는 모든 조건에서 꾸준히 존재하였지만, (-)-epicatechin peak는 glucose 10% (w/v) 첨가의 조건으로 배양할 시 검출되지 않았다.
  • Tryptone 3% (w/v) 농도로 배양된 반응물의 경우 탄소원과 마찬가지로 질소원에서도 10분에 (+)-catechin peak가 확인되었지만, (-)-epicatechin peak는 작은 면적으로 검출되었다. 마지막으로 sodium chloride 0.1% (w/v) 농도로 배양된 반응물의 경우 10분에 (+)-catechin peak가 존재하였으며, tryptone과 마찬가지로 16분에 (-)-epicatechin peak가 작은 면적으로 확인되었다.
  • 후)무기 염류의">무기염류의 종류를 달리하여 균체 생육을 측정한 결과, manganese sulfate와 potassium chloride 첨가 시 생육이 거의 이뤄지지 않았으며, sodium chloride, dipotassium phosphate, potassium chlo-ride 순으로 우수한 생육을 보였다(Table 1). 가장 우수한 생육을 보인 영양성분을 최종 선정하여 각 성분의 농도에 의한 4). 배양 3시간 이후부터 균체 생육이 급격히 증가하여 9시간에 최대 증식을 나타내며, 다른 효모보다 빠른 생육을 보였다. 또한, K.
  • 분리된 효모 중 30주가 0.1% (w/v) esculin 함유 YM agar 평판배지에서 black zone을 나타내며 β-glucosidase 활성을 보였다(Fig. 1, Table 2).
  • 3에 나타내었다. 분석된 염기서열을 NCBI에서 BLASTN 프로그램을 이용하여 GenBank의 18S rDNA sequence와 비교한 결과, Kazachstania속과 가장 높은 상동성을 나타내었다. 각 Kazachstania 유전자에 속하는 종들과 염기서열의 상동성을 비교한 결과, Kazachstania servazzii와 99% 상동성을 나타내어 후)(-)-epicatechin표준물질을">(-)-epicatechin 표준물질을 HPLC 분석한 결과, (+)-catechin은 10분에서 (-)-epicatechin은 16분에서 나타났다. 아로니아 추출물에서 확인된 여러 개의 peak 중 (+)-catechin peak가 확인된 10분에는 뚜렷한 peak가 확인되지 않고 8~10분까지 지속적인 peak가 확인됨으로써 (+)-catechin의 peak가 여러 혼합 물질에 겹쳐서 확인되었다. 또한, (-)-epicatechin peak가 나타난 16분에는 peak가 명확하게 확인되었다.
  • 또한, (-)-epicatechin peak가 나타난 16분에는 peak가 명확하게 확인되었다. 영양성분이 최적 조건으로 함유된 배지에서 배양된 균주의 반응물을 HPLC로 분석한 결과, glucose 10% (w/v) 농도로 배양된 반응물의 경우 전반적으로 농도가 감소함을 볼 수 있었으며, 16분에 나타나는 (-)-epicatechin의 농도가 현저하게 감소됨이 확인되었다(Fig. 5). 따라서 K.
  • 젓갈에서 효모를 분리한 결과 명란젓에서 20균주, 명태식해에서 11균주가 분리되었으며 나머지 젓갈에서는 효모가 분리되지 않았다. 분리된 효모 중 30주가 0.
  • 그 중 가장 높은 생장률을 보이는 반응물을 최종 선정하였다. 질소원에 따른 균체 생육 및 탄닌 성분의 저감화를 확인하기 위하여 선택된 탄소원 조건에서 가장 우수한 생장률을 보이는 질소원을 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0% (w/v) 농도의 조건에서, 무기염류는 가장 우수한 생장률을 보이는 성분을 0.1, 0.5, 1.0, 1.5 % (w/v) 농도의 조건에서 가장 높은 생장률을 보이는 반응물 조건을 확인하였다. 또한, 가장 우수한 아로니아의 탄닌 성분 저감화를 나타내는 균주를 3차 선정하기 위하여 아로니아 추출액을 첨가한 YM broth에 각각의 균주를 배양하여 TLC로 확인한 결과, 가장 큰 변화를 보인 MTY2를 탄닌 성분의 저감화 효능을 분석하기 위한 최종 균주로 선정하였다. 최종 균주로 선정된 MTY2는 TLC 분석을 통해 배양기간에 따른 탄닌 성분의 저감화 효과를 확인하였다(Fig. 2).
  • 탄닌 성분의 HPLC 표준 peak를 확인하기 위하여 (+)-catechin, (-)-epicatechin 표준물질을 HPLC 분석한 결과, (+)-catechin은 10분에서 (-)-epicatechin은 16분에서 나타났다. 아로니아 추출물에서 확인된 여러 개의 peak 중 (+)-catechin peak가 확인된 10분에는 뚜렷한 peak가 확인되지 않고 8~10분까지 지속적인 peak가 확인됨으로써 (+)-catechin의 peak가 여러 후)균체생육을">균체 생육을 확인하였다. 탄소원의 경우 glucose의 농도별로 균체 생육을 조사하였고, 10% (w/v) 농도일 때 0.41의 흡광도를 보이며 0.39의 값을 나타내는 다른 실험군과 비교하여 상대적으로 우수한 생육을 보였다. 질소원의 경우 tryptone이 3% (w/v)일 때 0.
  • 후)균체생육과">균체 생육과 탄닌 성분 저감화를 조사하였다. 탄소원의 종류를 달리하여 균체 생육을 측정한 결과, 균체 생육은 glucose, mannitol, fructose, maltose 순서로 우수했으며, 유기태 질소원과 무기태 질소원을 첨가하여 조사한 결과, 균체 생육은 casitone, tryptone, soytone, peptone 순서로 우수함을 알 수 있었다.

    후속연구

    • 뿐만 아니라, 아로니아의 탄닌 성분 감소에 대해서는 현재 연구된 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 우리나라 젓갈에서 분리한 효모를 이용하여 아로니아의 탄닌 성분을 감소시킬 수 있는 가능성을 확인하였고, 이를 통해 탄닌 특유의 떫은맛을 감소시킨 아로니아를 식용 혹은 식품의 2차 가공물의 재료로 용이하게 이용할 수 있을 것으로 생각한다.
    • servazzii MTY2을 glucose 10% (w/v) 첨가의 조건으로 아로니아와 함께 발효시킬 경우, 탄닌 성분의 저감화가 가능할 것으로 판단하였다. 따라서 탄닌 성분의 저감화를 통해 특유의 떫은맛을 감소시킨 아로니아를 식용 혹은 식품의 2차 가공물의 재료로 용이하게 이용할 수 있을 것으로 생각한다.