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문제 정의
- 본 연구에서는 GC-ECD를 이용한 농산물 중 제초제 ipfencarbazone의 신규 잔류분석법을 개발하였다. 농산물 시료(현미, 대두, 고추, 감귤, 감자)는 acetone을 이용해 추출하고 n-hexane을 이용해 액액분배한 뒤 silica SPE 카트리지로 정제한 뒤 기기 분석하였다.
- 하지만, ipfencarbazone은 휘발성이 있고 질소와 할로겐족 원소를 포함하고 있어 기체크로마토그래프(GC, gas chromatograph)를 이용한 선택적 검출기(전자포획검출기 또는 질소인검출기)에 우수한 감도를 보일 것으로 예상되었다. 이에 본 연구에서는 GC를 이용한 ipfencarbazone의 농산물 중 신규 잔류분석법을 개발하였다.
제안 방법
- Ipfen-carbazone은 할로겐족 원소인 염소(Cl, chloride)와 불소(F, fluoride)를 가지고 있기 때문에 이를 선택적으로 검출하는 검출기인 GC-ECD를 분석기기로 선정하였다. Ipfencarbazone의 기기 상 감도를 높이고, 시료에 존재하는 간섭 물질로부터 선택적으로 분리하기 위해 칼럼의 온도를 조절하여 기기분석 조건을 확립하였다.
- Ipfencarbazone 표준품은 10.03mg을 acetone 10mL에 용해하여 1000μg/mL의 표준원액을 조제하고, 이를 acetone으로 희석하여 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5 및 1.0 μg/mL의 표준용액을 조제하였다.
- Ipfencarbazone은 Log POW이 3.0(25℃)으로 비극성이므로 비극성 농약의 추출에 주로 사용하는 용매인 acetone, acetonitrile으로 추출 효율을 비교하였다. 두 용매의 추출 효율은 각각 acetone 101.
- Ipfen-carbazone은 할로겐족 원소인 염소(Cl, chloride)와 불소(F, fluoride)를 가지고 있기 때문에 이를 선택적으로 검출하는 검출기인 GC-ECD를 분석기기로 선정하였다. Ipfencarbazone의 기기 상 감도를 높이고, 시료에 존재하는 간섭 물질로부터 선택적으로 분리하기 위해 칼럼의 온도를 조절하여 기기분석 조건을 확립하였다.
- Ipfencarbazone의 분석은 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Agilent GC model 6890A, Agilent, CA, USA)를 사용하였고, 분석용 칼럼은 DB-5 (0.25 mm i.d.×30m, 0.25 μm; Agilent Technologies, CA, USA), 이동상가스(N2) 유량은 1mL/min, 주입량은 1μL로 split mode (20:1) 를 이용하여 분석하였다.
- 농산물 시료(현미, 대두, 고추, 감귤, 감자)는 acetone을 이용해 추출하고 n-hexane을 이용해 액액분배한 뒤 silica SPE 카트리지로 정제한 뒤 기기 분석하였다. Ipfencarbazone의 정량적 분석을 위해 GC-ECD를 이용하였으며, 신뢰성을 확보하기 위해 GC/MS로 재확인을 하였다. 분석법의 검출한계(LOD)는 0.
- 검체 중 ipfencarbazone의 재확인을 위해 GC/MS의 EI 모드를 이용해 분석하였으며, 70 eV에서 용이하게 이온화되었 다. Ipfencarbazone의 평균분자량인 427.23을 포함하는 범위인 50-550 m/z의 스캔모드에서 ipfencarbazone 표준용액을 직접 주입한 총 이온 크로마토그램과 질량 스펙트럼을 확인하여 특성이온을 선정하였다(Fig. 4). Ipfencarbazone의 exact mass 값은 426.
- n-Hexane 분배 추출물 중 비극성 간섭물질의 제거를 위해 흡착 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 흡착제의 종류에는 alumina, florisil, silica gel 및 활성탄 등이 사용되나 활성탄이나 alumina는 흡착력이 강해 비극성인 농약과 방해 물질을 분리하기에는 적합하지 않다고 판단하여 florisil과 silica를 선택해 비교하였다.
- 검체 중 ipfencarbazone의 재확인을 위해 GC/MS의 EI 모드를 이용해 분석하였으며, 70 eV에서 용이하게 이온화되었 다. Ipfencarbazone의 평균분자량인 427.
- 본 연구에서는 GC-ECD를 이용한 농산물 중 제초제 ipfencarbazone의 신규 잔류분석법을 개발하였다. 농산물 시료(현미, 대두, 고추, 감귤, 감자)는 acetone을 이용해 추출하고 n-hexane을 이용해 액액분배한 뒤 silica SPE 카트리지로 정제한 뒤 기기 분석하였다. Ipfencarbazone의 정량적 분석을 위해 GC-ECD를 이용하였으며, 신뢰성을 확보하기 위해 GC/MS로 재확인을 하였다.
- 본 연구에서는 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)에 따라 분석법의 직선성(linearity), 검출한계(LOD, limit of detection), 정량한계(LOQ, limit of quantification)을 평가하였다. 또한 회수율 시험으로 분석법의 정확성(accuracy), 정밀성(precision), 재현성(repeatability)을 확인 후 실험실간 검증을 실시해 분석법의 신뢰성 및 유효성을 확보하였다. 직선성의 확인을 위하여 ipfencarbazone 표준용액 0.
- 처리농도는 정량한계(LOQ), 정량한계의 10배(10LOQ), 정량한계의 50배(50LOQ)에 해당하는 농도로 수행하였으며 각각의 농도 및 시료에 대해 5반복 실험을 수행하여 평균 및 상대표준편차(RSD, relative standard deviation)를 계산하였다. 또한, 경인지방식품의약품안전청과 실험실간 검증을 실시하여 분석법의 유효성을 확인하였다.
- 7%)으로 액액분배를 수행하여 추출율이 가장 좋은 n-hexane을 분배용매로 선정하였으며, ipfencarbazone이 비극성이므로 비극성 용매에 대한 액액분배의 효율이 높았던 것으로 판단된다. 또한, 포화식염수를 첨가하여 염석효과로 수용액층의 극성도를 높여서 ipfencarbazone의 유기용매(n-hexane) 층으로의 분배효율을 향상시켰다.
- 본 연구에서 확립한 시험용액 조제 및 기기분석법을 이용하여 검체 중 ipfencarbazone의 검출한계 및 정량한계를 계산하였다. 검출한계는 아래의 식을 이용해 계산하였으며 최소검출량이 0.
-
GC/MS 분석조건
분석법의 신뢰성 확보를 위해 기체크로마토그래프-질량분석기(GC/MS, Agilent Technologies 5793 MSD, Agilent, CA, USA)를 이용하여 재확인 과정을 수행하였다. 분석용 칼럼은 DB-5MS (0.
- 분석법의 유효성 입증을 위해 경인지방식품의약품안전청 유해물질분석팀과 실험실간 검증을 수행하였다. 개발된 분석법을 경인지방식품의약품안전청에 제공하고 동일한 방법으로 분석을 수행한 후 회수율 및 표준편차를 비교하였다.
- 또한, 검출한계(LOD)와 정량한계(LOQ)는 크로마토그램 상에서 신호 대 잡음비(S/N ratio) 각각 3, 10 이상으로 하였다. 분석법의 정확성, 정밀성 및 재현성을 평가하기 위하여 회 수율 시험을 실시하였으며, 곡류, 콩류, 채소류, 과일류, 서류의 각 대표농산물인 현미, 대두, 고추, 감귤, 감자의 무처리 시료에 ipfencarbazone 표준용액을 첨가하여 분석하였다. 처리농도는 정량한계(LOQ), 정량한계의 10배(10LOQ), 정량한계의 50배(50LOQ)에 해당하는 농도로 수행하였으며 각각의 농도 및 시료에 대해 5반복 실험을 수행하여 평균 및 상대표준편차(RSD, relative standard deviation)를 계산하였다.
- 분석용 칼럼은 DB-5MS (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm; Agilent Technologies, CA, USA), 이동상가스(He) 유량은 1 mL/min, 주입량은 1 μL로 splitless mode를 이용하여 분석하였다.
- 25 μm; Agilent Technologies, CA, USA), 이동상가스(He) 유량은 1 mL/min, 주입량은 1 μL로 splitless mode를 이용하여 분석하였다. 이 때의 주입구 온도는 260℃, interface 온도는 280℃이었으며, 오븐온도는 200℃에서 검체를 주입하고 10℃/min의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 10분간 유지하는 조건을 적용 하였다. 질량분석기 조건의 확립은 EI (electron impact ionization, 70 eV)를 이용하여 분자량 범위 50-550 m/z의 스캔 모드에서 총 이온크로마토그램과 질량 스펙트럼을 확인하고 최적의 특성이온을 선정하였고, 선정된 이온만을 분석하는 SIM (selected ion monitoring) 모드로 재확인하였다.
- 또한, ethyl acetate/n-hexane을 사용했을 때는 10/90 분획 10 mL 이내에서 용출되지 않았고 이후 20/80 분획 10 mL 이내에서 모두 90% 이상 용출됨을 확인하였다. 이에 ethyl acetate/n-hexane을 이용해 10/90 분획에서 wash 과정을 거쳐 불순물을 효과적으로 제거하는 방법을 선택하였다.
- 흡착제의 종류에는 alumina, florisil, silica gel 및 활성탄 등이 사용되나 활성탄이나 alumina는 흡착력이 강해 비극성인 농약과 방해 물질을 분리하기에는 적합하지 않다고 판단하여 florisil과 silica를 선택해 비교하였다. 정제용매 또한 비극성 유기용매인 acetone/n-hexane 및 ethyl acetate/n-hexane를 사용하여 각 용매 분획별 정제효율을 비교하였다.
- 직선성의 확인을 위하여 ipfencarbazone 표준용액 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5 및 1.0 μg/mL의 농도 범위에 대한 각각의 피크 면적을 이용하여 검량선을 작성하였고, 검량선의 결정계수(coefficient of determination, r2)를 구하였다.
- 이 때의 주입구 온도는 260℃, interface 온도는 280℃이었으며, 오븐온도는 200℃에서 검체를 주입하고 10℃/min의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 10분간 유지하는 조건을 적용 하였다. 질량분석기 조건의 확립은 EI (electron impact ionization, 70 eV)를 이용하여 분자량 범위 50-550 m/z의 스캔 모드에서 총 이온크로마토그램과 질량 스펙트럼을 확인하고 최적의 특성이온을 선정하였고, 선정된 이온만을 분석하는 SIM (selected ion monitoring) 모드로 재확인하였다.
- n-Hexane 분배 추출물 중 비극성 간섭물질의 제거를 위해 흡착 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 흡착제의 종류에는 alumina, florisil, silica gel 및 활성탄 등이 사용되나 활성탄이나 alumina는 흡착력이 강해 비극성인 농약과 방해 물질을 분리하기에는 적합하지 않다고 판단하여 florisil과 silica를 선택해 비교하였다. 정제용매 또한 비극성 유기용매인 acetone/n-hexane 및 ethyl acetate/n-hexane를 사용하여 각 용매 분획별 정제효율을 비교하였다.
대상 데이터
- 추출 후 검체추출액은 여과보조제인 celite 545를 이용해 감압여과한 뒤 1차적으로 불순물 제거를 위해 액액분배법을 적용하였다. Acetone 추출물을 각각 ethyl acetate (82.4%), dichloromethane (91.5%), n-hexane (98.7%)으로 액액분배를 수행하여 추출율이 가장 좋은 n-hexane을 분배용매로 선정하였으며, ipfencarbazone이 비극성이므로 비극성 용매에 대한 액액분배의 효율이 높았던 것으로 판단된다. 또한, 포화식염수를 첨가하여 염석효과로 수용액층의 극성도를 높여서 ipfencarbazone의 유기용매(n-hexane) 층으로의 분배효율을 향상시켰다.
- Ipfencarbazone (Table 1) 표준품(99.7%)은 동부한농(Lot No. 120420)에서 제공받아 사용하였고, acetone, n-hexane, ethyl acetate 등은 HPLC 등급으로 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 사용하였다. Sodium chloride는 Wako (Osaka, Japan)에서, florisil (6cc, 1g) 및 silica (6cc, 1g) SPE 카트리지는 Waters (Milford, USA)에서 구입하였다.
- 120420)에서 제공받아 사용하였고, acetone, n-hexane, ethyl acetate 등은 HPLC 등급으로 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 사용하였다. Sodium chloride는 Wako (Osaka, Japan)에서, florisil (6cc, 1g) 및 silica (6cc, 1g) SPE 카트리지는 Waters (Milford, USA)에서 구입하였다. 여과보조제인 celite 545 및 anhydrous sodium sulfate는 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하였다.
- 0(25℃)으로 비극성이므로 비극성 농약의 추출에 주로 사용하는 용매인 acetone, acetonitrile으로 추출 효율을 비교하였다. 두 용매의 추출 효율은 각각 acetone 101.1% acetonitrile 98.7 %로 확인되었으며, 그 중 추출효율이 더 높고 여과와 농축이 용이하였던 acetone을 추출용매로 선정하였다. 추출 후 검체추출액은 여과보조제인 celite 545를 이용해 감압여과한 뒤 1차적으로 불순물 제거를 위해 액액분배법을 적용하였다.
- 분석에 사용된 농산물 시료는 국내 사용기준 설정을 위한 곡류(쌀)의 대표작물인 현미와 각 식품군의 대표작물인 대두(콩류), 고추(과채류), 감귤(과일류), 감자(서류)는 모두 무농약 농산물을 구입하여 균질화한 후 밀봉된 용기에 담아 -50℃에 보관하고 실험에 사용하였다.
- Sodium chloride는 Wako (Osaka, Japan)에서, florisil (6cc, 1g) 및 silica (6cc, 1g) SPE 카트리지는 Waters (Milford, USA)에서 구입하였다. 여과보조제인 celite 545 및 anhydrous sodium sulfate는 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하였다.
- 잔류농약 분석법 개발 과정에서 노출 가능성이 높거나 독성이 강한 대사산물은 식품섭취 과정에서 위해하게 작용할 수 있으므로 ‘잔류물의 정의’로 정하여 분석법 확립대상에 포함시키고 있다. 하지만, ipfencarbazone은 독성이 강하거나 잔류량이 많은 대사산물은 없어 모화합물인 ipfencarbazone만 분석 대상으로 정하였다(동방아그로, 2012; 2013).
데이터처리
- 분석법의 유효성 입증을 위해 경인지방식품의약품안전청 유해물질분석팀과 실험실간 검증을 수행하였다. 개발된 분석법을 경인지방식품의약품안전청에 제공하고 동일한 방법으로 분석을 수행한 후 회수율 및 표준편차를 비교하였다. 경인지방식품의약품안전청의 각 농도별 평균 회수율은 94.
- 분석법의 정확성, 정밀성 및 재현성을 평가하기 위하여 회 수율 시험을 실시하였으며, 곡류, 콩류, 채소류, 과일류, 서류의 각 대표농산물인 현미, 대두, 고추, 감귤, 감자의 무처리 시료에 ipfencarbazone 표준용액을 첨가하여 분석하였다. 처리농도는 정량한계(LOQ), 정량한계의 10배(10LOQ), 정량한계의 50배(50LOQ)에 해당하는 농도로 수행하였으며 각각의 농도 및 시료에 대해 5반복 실험을 수행하여 평균 및 상대표준편차(RSD, relative standard deviation)를 계산하였다. 또한, 경인지방식품의약품안전청과 실험실간 검증을 실시하여 분석법의 유효성을 확인하였다.
이론/모형
- 본 연구에서 개발된 분석법은 CODEX 가이드라인(CAC/ GL 40, 2003)에 따라 분석법의 직선성, 선택성, 정밀성, 정확성, 재현성을 검증하였으며, 실험실간 검증을 통해 분석법의 신뢰성 및 유효성을 확보하였다. 확립된 분석법은 국내 유통되는 농산물 중 ipfencarbazone의 안전관리를 위한 공정분석법으로 활용될 것이다.
- 본 연구에서는 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)에 따라 분석법의 직선성(linearity), 검출한계(LOD, limit of detection), 정량한계(LOQ, limit of quantification)을 평가하였다. 또한 회수율 시험으로 분석법의 정확성(accuracy), 정밀성(precision), 재현성(repeatability)을 확인 후 실험실간 검증을 실시해 분석법의 신뢰성 및 유효성을 확보하였다.
- 7 %로 확인되었으며, 그 중 추출효율이 더 높고 여과와 농축이 용이하였던 acetone을 추출용매로 선정하였다. 추출 후 검체추출액은 여과보조제인 celite 545를 이용해 감압여과한 뒤 1차적으로 불순물 제거를 위해 액액분배법을 적용하였다. Acetone 추출물을 각각 ethyl acetate (82.
성능/효과
- Acetone/n-hexane을 이용한 florisil과 silica 카트리지 정제 시 10/90 분획 10 mL 이내에서 ipfencarbazone이 모두 90% 이상 회수됨을 확인하였다. 또한, ethyl acetate/n-hexane을 사용했을 때는 10/90 분획 10 mL 이내에서 용출되지 않았고 이후 20/80 분획 10 mL 이내에서 모두 90% 이상 용출됨을 확인하였다.
- 0 m/z이며 스펙트럼 상에서 분자이온은 거의 검출되지 않았다. Ipfencarbazone의 특성이온으로는 스펙트럼 상에서 충분한 intensity를 갖는 198, 228 m/z을 선정하였으며 이는 아민기(N-H)와 카복실기(C=O) 결합을 하고 있는 아미드 결합이 끊어져 생성된 두 분자의 이온임을 확인하였다. 분석된 스캔 모드의 크로마토그램과 질량스펙트럼 및 특성이온의 분자구조식을 Fig.
- 두 실험 실간 회수율 결과에 따른 평균값은 95.1-106.1%, 변이계수 (CV, %) 또한 모든 처리구에서 CODEX 가이드라인(CAC/ GL 40, 2003)에서 제시한 기준 처리농도 >1 μg/kg, ≤ 0.01 mg/kg의 45%, 처리농도 > 0.01 mg/kg, ≤ 0.1 mg/kg의 32% 보다 낮아 적합한 것으로 확인되었다(Table 4).
- 이때 silica 카트리지가 florisil 카트리지 보다 높은 회수율을 보였는데 이는 같은 용출조건에서 florisil 카트리지가 ipfencarbazone에 대한 흡탈착이 상대적으로 약하기 때문인 것으로 판단되었다(Table 2). 따라서 최종 정제는 silica 카트리지를 이용해 ethyl acetate/n-hexane (10/90, v/v) 10 mL로 불순물 제거 후 ethyl acetate/n-hexane (20/80, v/v) 10 mL로 용출하는 방법을 선택하여 농산물 추출 시료 중 간섭 물질로부터 ipfencarbazone을 효과적으로 정제할 수 있었다.
- 3% 수준이었다. 또한 경인청과의 실험실간 검증 결과도 농산물 시료 및 처리수준에 관계없이 회수율 결과 95.1-106.1%를 나타내어 모두 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)의 조건을 만족하는 수준임을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 분석법은 국내 유통되는 농산물 중 ipfencarbazone의 안전 관리에 이용될 공정분석법으로 사용가능할 것으로 판단된다.
- Acetone/n-hexane을 이용한 florisil과 silica 카트리지 정제 시 10/90 분획 10 mL 이내에서 ipfencarbazone이 모두 90% 이상 회수됨을 확인하였다. 또한, ethyl acetate/n-hexane을 사용했을 때는 10/90 분획 10 mL 이내에서 용출되지 않았고 이후 20/80 분획 10 mL 이내에서 모두 90% 이상 용출됨을 확인하였다. 이에 ethyl acetate/n-hexane을 이용해 10/90 분획에서 wash 과정을 거쳐 불순물을 효과적으로 제거하는 방법을 선택하였다.
- Ipfencarbazone의 정량적 분석을 위해 GC-ECD를 이용하였으며, 신뢰성을 확보하기 위해 GC/MS로 재확인을 하였다. 분석법의 검출한계(LOD)는 0.003mg/kg이었고, 정량한계(LOQ)는 0.01mg/kg이었다. 회수율 시험은 LOQ, 10LOQ, 50LOQ의 세 농도에서 5 반복으로 수행하였으며, 모든 농산물에서 80.
- 확립된 분석법은 현미, 대두, 고추, 감귤, 감자의 무처리 시료에 ipfencarbazone 표준용액을 첨가한 회수율 시험결과를 통해 분석법의 선택성, 정확성, 정밀성, 재현성을 평가할 수 있었다. 분석법의 선택성(selectivity)은 추출 및 정제과정을 거쳐 분석된 무처리 시료구의 크로마토그램에서 ipfencarbazone과 같은 머무름 시간의 간섭물질이 발견되지 않는 것으로 확인할 수 있었다(Fig. 3).
- 분석법의 직선성 확인을 위해 ipfencarbazone 표준용액 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5 및 1.0μg/mL을 제조하여 1μL씩 GC-ECD에 주입하여 분석한 결과 농도 대비 peak 면적과의 결정계수(r2)가 0.999 이상으로 나타남을 확인하였으며 이는 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)에 부합함을 알 수 있었다(Fig. 2).
- 6%이었고, 분석오차는 모두 10% 미만으로 확인되었다(Table 3). 이를 통해 분석법의 정확성(accuracy), 정밀성(precision), 재현성(repeatability)을 검증할 수 있었고, CODEX 가이드 라인(CAC/GL 40, 2003)에서 제시한 잔류농약 분석법의 조건에 부합하는 것을 확인하였다. 이때 분석된 크로마토그램이 Fig.
- 평균 회수율은 곡류인 현미에서 80.6-95.9%, 콩류인 대두에서 91.9-105.3%, 과채류인 고추에서 103.0-110.7%, 과일류인 감귤에서 100.6-112.3%, 서류인 감자에서 90.9-108.6%이었고, 분석오차는 모두 10% 미만으로 확인되었다(Table 3). 이를 통해 분석법의 정확성(accuracy), 정밀성(precision), 재현성(repeatability)을 검증할 수 있었고, CODEX 가이드 라인(CAC/GL 40, 2003)에서 제시한 잔류농약 분석법의 조건에 부합하는 것을 확인하였다.
- 그간 학계에 보고된 ipfencarbazone의 잔류분석법으로는 Sun 등(2012)의 HPLC-DAD (high performance liquid chromatograph-diode array detector)를 이용한 분석법이 유일하며, 일본(일본 약사·식품 위생 심의회, 2013)에서는 기준설정을 위해 LC-MS/MS(liquid chromatograph-tandem mass spectrometer)로 분석을 한 사례가 있다. 하지만, ipfencarbazone은 휘발성이 있고 질소와 할로겐족 원소를 포함하고 있어 기체크로마토그래프(GC, gas chromatograph)를 이용한 선택적 검출기(전자포획검출기 또는 질소인검출기)에 우수한 감도를 보일 것으로 예상되었다. 이에 본 연구에서는 GC를 이용한 ipfencarbazone의 농산물 중 신규 잔류분석법을 개발하였다.
- 확립된 분석법은 현미, 대두, 고추, 감귤, 감자의 무처리 시료에 ipfencarbazone 표준용액을 첨가한 회수율 시험결과를 통해 분석법의 선택성, 정확성, 정밀성, 재현성을 평가할 수 있었다. 분석법의 선택성(selectivity)은 추출 및 정제과정을 거쳐 분석된 무처리 시료구의 크로마토그램에서 ipfencarbazone과 같은 머무름 시간의 간섭물질이 발견되지 않는 것으로 확인할 수 있었다(Fig.
후속연구
- 1%를 나타내어 모두 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)의 조건을 만족하는 수준임을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 분석법은 국내 유통되는 농산물 중 ipfencarbazone의 안전 관리에 이용될 공정분석법으로 사용가능할 것으로 판단된다.
- 본 연구에서 개발된 분석법은 CODEX 가이드라인(CAC/ GL 40, 2003)에 따라 분석법의 직선성, 선택성, 정밀성, 정확성, 재현성을 검증하였으며, 실험실간 검증을 통해 분석법의 신뢰성 및 유효성을 확보하였다. 확립된 분석법은 국내 유통되는 농산물 중 ipfencarbazone의 안전관리를 위한 공정분석법으로 활용될 것이다.
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