선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
제안 방법
- 100 ul goat anti-rabbit IgG-HRP conjugation을 각 well에 분주한 다음, 실온에서 30분간 반응시키고, wash buffer로 4회 수세한다. 100 ul TMB/E substrate를 각 well에 분주해서 실온에서 10분 간 반응시켜 분광 광도계로 450 nm에서 흡광도를 측정하고 표준식을 사용하여 농도를 계산하였다.
- 동결건조 후 분쇄시켜 EtOH 추출 후 남은 찌꺼기를 건조시켜 acetone 추출과 여과 후 농축시켜 귀뚜라 미 acetone 추출물을 획득하였다. 13주령 쥐에 고지방식이로 비만을 7주간 유도하고, 20주령부터 시험물질을 고지방 식이를 하면서 한 달간 투여하였다. 모든 동물 실험과정은 농촌진 흥청 동물실험윤리 위원회의 승인을 받았다(No.
- 24 well plate에 D-HUVEC을 well당 1×105을 분주하고 쇠 똥구리 추출물질을 0.2 mg/ml 농도로 처리한 다음 하루 동안 37℃ 인큐베이터에서 배양한 다음 laminin (Millipore, CA, USA), fibronectin (Millipore, CA, USA) ELISA를 각각 시행하였다. 표준물질과 샘플시료에 rabbit anti-human laminin, rabbit anti-human fibronectin을 각각 동량으로 섞어 실온에서 10분간 반응시킨 다음, 100 ul를 덜어 well plate에서 1시간 동안 반응시킨 다음, wash buffer로 4회 수세한다.
- 사육 조건은 온도 21~23℃, 습도 40~60%, 조명 12시간 명암으로 유지시켰으며, 시험동물용 고 형사료((주) 샘타코바이오코리아, 오산)와 여과된 정제수를 자 유 섭취시켰다. SD 수컷 쥐를 5군으로 나뉘어 PBS 대조군, 쇠똥구리로부터 추출한 에탄올 추출물(CA EtOH, 100 mg/ kg/day), 쇠똥구리(100 ㎎/㎏/day)로부터 추출한 아세톤 추 출물 (CA acetone), 귀뚜라미(Gryllus bimaculatus, )로부터 추출 한 아세톤 추출물(Gb acetone, 100 ㎎/㎏/day), 양성대조군 으로 Krill oil (Mercola Health Resources, LLC., Aurora, USA)을 100 ㎎/㎏/day 농도로 사용하였다. 본 실험에 사용된 쇠똥구리는 강량(생약)의 형태로서 중국 연길 의약품 검사 소장이 감정하고 한국으로 들어온 것으로서, 시료를 동결건조 후 분쇄시켜 70% EtOH 추출여과 후 농축시켜 쇠똥구리 EtOH 추출물을 얻었고, EtOH 추출 후 남은 찌꺼기를 건조시켜 acetone 추출물을 여과 후 농축하여 쇠똥구리 acetone 추출물을 획득하였다.
- 조직을 4% formaldehyde로 고정시킨 후 4 um로 절편을 만들어 toluidine 염색[23]을 시행한 후 현미경(Leica CTR 6000, microsoft systems)을 통해 adipocyte의 수와 크기를 관 찰하였다. adipocyte의 수는 현미경의 배율을 100배로 관찰하여 통계 처리했고, 간 조직의 adipocyte의 수와 크기는 확대하여 400배로 측정하였다.
- 5 ml을 넣어 잘 섞은 뒤 95℃에서 1시간 동안 가열하였다. 가열이 끝난 후 실온에서 식혀 증 류수 1 ml과 n-butanol:pyrimidine (15:1) 용액 5 ml를 첨가하 고, 8, 000 rpm에서 20분간 원심분리 하여 상층액을 취하여 532 nm에서 과산화 생성물인 thiobarbituric acid reactive substances (TBARS)의 흡광도를 측정하였으며[46], 지질의 과산 화 정도를 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropane을 표준물질로 하여 측정하였다.
- , 습기가 충분한 37℃의 대기로 2~3일에 한 번씩 분주하여 배양 하였다. 곤충추출물 시료는 PBS 대조군, 쇠똥구리로부터 추출 한 에탄올 추출물(1 mg/ml), 쇠똥구리로부터 추출한 아세톤 추출물, 귀뚜라미로부터 추출한 아세톤 추출물(1 mg/ml), 양 성대조군으로 Krill oil (1 mg/ml)을 사용하여 처리하였다.
- 사이토카인 분석을 위해 랫의 serum에서 IL-10과 IL-1ß를 효소면역측정법인ELISA kit를 사용하여 분광 광도계로 흡광 도를 측정하였고, VEGF와 eNOS는 D-HUVEC에서 곤충 시료를 처리하여 24시간 인큐베이터에서 배양한 후, ELISA kit를 사용하여 분광 광도계로 흡광도를 측정하였다. 단핵구/대식 세포에서 분비되어 adipocyte의 염증반응에서 기여하는 M2 (anti-inflammatory effects) 마커로 IL-10 (Koma biotech Inc., South Korea)을, M1 (pro-inflammatory effect) 마커로 IL-1ß (Koma biotech Inc., South Korea), VEGF (R&D systems, MN, USA), eNOS (R&D systems, MN, USA)을 효소면역측정법인 ELISA kit로 확인하였다.
- 본 연구에서는 쇠똥구리 추출물을 이용하여 흰쥐에서 고지 방식이로 고혈당을 유도해 in vivo에서 지질과 단백질의 산화 적 스트레스 방지와 항산화 효과를 구명하고 당뇨 혈관내피세 포(D-HUVEC)를 이용하여 in vitro에서 cytokine 연구를 수행하였다.
- SD 4주령 수컷 랫드를 (주) 샘타코바이오코리아(경기도, 오 산)로부터 구입하여 7일간의 순화기간을 거쳐 건강한 동물만 을 골라 실험에 사용하였다. 사육 조건은 온도 21~23℃, 습도 40~60%, 조명 12시간 명암으로 유지시켰으며, 시험동물용 고 형사료((주) 샘타코바이오코리아, 오산)와 여과된 정제수를 자 유 섭취시켰다. SD 수컷 쥐를 5군으로 나뉘어 PBS 대조군, 쇠똥구리로부터 추출한 에탄올 추출물(CA EtOH, 100 mg/ kg/day), 쇠똥구리(100 ㎎/㎏/day)로부터 추출한 아세톤 추 출물 (CA acetone), 귀뚜라미(Gryllus bimaculatus, )로부터 추출 한 아세톤 추출물(Gb acetone, 100 ㎎/㎏/day), 양성대조군 으로 Krill oil (Mercola Health Resources, LLC.
- 사이토카인 분석을 위해 랫의 serum에서 IL-10과 IL-1ß를 효소면역측정법인ELISA kit를 사용하여 분광 광도계로 흡광 도를 측정하였고, VEGF와 eNOS는 D-HUVEC에서 곤충 시료를 처리하여 24시간 인큐베이터에서 배양한 후, ELISA kit를 사용하여 분광 광도계로 흡광도를 측정하였다. 단핵구/대식 세포에서 분비되어 adipocyte의 염증반응에서 기여하는 M2 (anti-inflammatory effects) 마커로 IL-10 (Koma biotech Inc.
- 쇠똥구리 추출물을 먹인 랫 간의 adipocyte 수를 현미경을 사용하여 관찰하였다. 쇠똥구리 추출물을 먹인 SD rat의 간조 직을 toluidine blue 염색을 한 후 adipocyte를 관찰한 결과 대조군에 비해 CA EtOH, CA acetone, Gb acetone, Krill oil에서 유의적으로 감소하였다(Fig.
- 조직을 4% formaldehyde로 고정시킨 후 4 um로 절편을 만들어 toluidine 염색[23]을 시행한 후 현미경(Leica CTR 6000, microsoft systems)을 통해 adipocyte의 수와 크기를 관 찰하였다. adipocyte의 수는 현미경의 배율을 100배로 관찰하여 통계 처리했고, 간 조직의 adipocyte의 수와 크기는 확대하여 400배로 측정하였다.
- 지방조직으로부터 지방산을 추출하기 위해 복부지방과 부 고환지방 각각에서 0.1g 무게를 측량해서, 클로로포름:메탄올 (2:1) 혼합액으로 지방산 추출(24시간)한 후, 여과지로 여과하 고, 인지질의 알칼리 가수분해에 의한 비누화 반응(100℃, 0.5N NaOH in MeOH)과 메틸레이션(100℃, 14% BF3로 15분 동안) 후, 25가지 지방산을 GC/MS로 분석했다. GC/MS는 (Agilent 6890 GC), Agilent 5973N mass detector, EI mode HP-5 capillary column (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA)을 사용하였다.
대상 데이터
- 5N NaOH in MeOH)과 메틸레이션(100℃, 14% BF3로 15분 동안) 후, 25가지 지방산을 GC/MS로 분석했다. GC/MS는 (Agilent 6890 GC), Agilent 5973N mass detector, EI mode HP-5 capillary column (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA)을 사용하였다. 주입구 온도는 250℃, MS 이동선은 23 0℃을 항상 유지하고, 오븐 온도는 180℃에서 20분간 유지된 다음, 10℃/분 증가되어 230℃까지 상승하고 10분간 유지하 고, 정량은 37지방산 standard (Sigma L9405, 10 rg/ml)를 사 용하였다(Sigma-Aldrich Inc.
- SD 4주령 수컷 랫드를 (주) 샘타코바이오코리아(경기도, 오 산)로부터 구입하여 7일간의 순화기간을 거쳐 건강한 동물만 을 골라 실험에 사용하였다. 사육 조건은 온도 21~23℃, 습도 40~60%, 조명 12시간 명암으로 유지시켰으며, 시험동물용 고 형사료((주) 샘타코바이오코리아, 오산)와 여과된 정제수를 자 유 섭취시켰다.
- 본 실험에 사용된 쇠똥구리는 강량(생약)의 형태로서 중국 연길 의약품 검사 소장이 감정하고 한국으로 들어온 것으로서, 시료를 동결건조 후 분쇄시켜 70% EtOH 추출여과 후 농축시켜 쇠똥구리 EtOH 추출물을 얻었고, EtOH 추출 후 남은 찌꺼기를 건조시켜 acetone 추출물을 여과 후 농축하여 쇠똥구리 acetone 추출물을 획득하였다. 귀뚜라미는 강원도 정선의 아리농장에서 냉동제 품으로 구입하였다. 동결건조 후 분쇄시켜 EtOH 추출 후 남은 찌꺼기를 건조시켜 acetone 추출과 여과 후 농축시켜 귀뚜라 미 acetone 추출물을 획득하였다.
- 당뇨 혈관내피세포(Human Microvascular Endothelial Cells (CARDIAC) Diabetes type II ; D-HUVEC)를 Clonetics사 (Cambrex Bio Science Rockland, Walkersville, USA)로부터 구입하여 FBS, hydrocortisone, hFGF, VEGF, IGF, ascorbic acid, hEGF, GA-1000이 첨가된 EGM-2 MV SingleQuots (Lonza, MD, USA)를 EBM-2 배지에 넣어 95% 공기, 5% CO2, 습기가 충분한 37℃의 대기로 2~3일에 한 번씩 분주하여 배양 하였다. 곤충추출물 시료는 PBS 대조군, 쇠똥구리로부터 추출 한 에탄올 추출물(1 mg/ml), 쇠똥구리로부터 추출한 아세톤 추출물, 귀뚜라미로부터 추출한 아세톤 추출물(1 mg/ml), 양 성대조군으로 Krill oil (1 mg/ml)을 사용하여 처리하였다.
- , Aurora, USA)을 100 ㎎/㎏/day 농도로 사용하였다. 본 실험에 사용된 쇠똥구리는 강량(생약)의 형태로서 중국 연길 의약품 검사 소장이 감정하고 한국으로 들어온 것으로서, 시료를 동결건조 후 분쇄시켜 70% EtOH 추출여과 후 농축시켜 쇠똥구리 EtOH 추출물을 얻었고, EtOH 추출 후 남은 찌꺼기를 건조시켜 acetone 추출물을 여과 후 농축하여 쇠똥구리 acetone 추출물을 획득하였다. 귀뚜라미는 강원도 정선의 아리농장에서 냉동제 품으로 구입하였다.
데이터처리
- 실험결과는 평균±표준편차(Mean±SD)로 계산하였고, 각 시료농도군에 대한 유의성 검정은 대조군과 비교하여 Student’s t-test 한 후 p<0.05 값을 통계적으로 유의성 있는 결과 로 간주하였다.
이론/모형
- 간의 catalase 활성은 Abei 방법[1]에 따라, glutathione peroxidase 활성은 Lawrence와 Burk의 방법[37]에 따라, superoxide dismutase 활성은 McCord와 Fridovich의 방법[40]에 따라 각각 분광 광도계(Shimadzu, Japan)로 측정하였다.
- 원심분리 13, 000×g 2분간 실시하고 상층액으로 360-380 nm에서 흡광도를 측정한다. 단백질 양은 bovine serum albumin을 대조로 하여 Bradford 방법으로 595 nm에서 흡광도를 측정하여 결정하였다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.