초록 ▼

수막구균 단백접합백신은Neisseria meningitidis에 의해 야기되는 침습성 수막구균 질환을 예방하는 백신이다. 이 백신의 주성분인 다당류 항원 함량은 역가와 직접 관련되어 있다. 기 허가된 수막구균백신들은 모두 HPAEC-PAD를 통하여 다당류 함량을 측정하고 있다. 이 중 수막구균 A,C,W135,Y- CRM197 단백접합백신의 다당류 함량 시험법은 혈청군(A, C 및 W135/Y)에 따라 전처리 과정과 분석 조건이 달라 시험에 장시간이 소요되며, 당 오염 가능성이 크고 시험결과의 재현성이 높지 않다. 본 연구는 기존

수막구균 단백접합백신은Neisseria meningitidis에 의해 야기되는 침습성 수막구균 질환을 예방하는 백신이다. 이 백신의 주성분인 다당류 항원 함량은 역가와 직접 관련되어 있다. 기 허가된 수막구균백신들은 모두 HPAEC-PAD를 통하여 다당류 함량을 측정하고 있다. 이 중 수막구균 A,C,W135,Y- CRM197 단백접합백신의 다당류 함량 시험법은 혈청군(A, C 및 W135/Y)에 따라 전처리 과정과 분석 조건이 달라 시험에 장시간이 소요되며, 당 오염 가능성이 크고 시험결과의 재현성이 높지 않다. 본 연구는 기존 다당류 함량시험법의 단점을 개선하여 혈청군 C·W135·Y형 다당류에 대한 동시분석법을 마련하였다. 새로운 시험법을 위하여 다양한 온도/TFA농도/가수분해 조건에서 회수율 측정을 통한 전처리(가수분해) 조건 설정 등을 수행하였으며, 분석 중 내부표준품으로서 fucose를 사용하여 재현성을 높이고자 하였다. 시험법 밸리데이션은 정확성, 직선성, 특이성, 정밀성, 범위, 완건성 등을 평가하였다. 정확성은 완제의약품의 기준 규격범위(7 ~ 13 μg/mL) 하한의 80%와 상한의 120%를 포함하는 농도 범위로 제조사 양성대조 표준품을 희석한 후 각 농도에서의 회수율을 평가하였다. 시험 결과, 3종의 형청군 모두 평균 97 ~ 104%의 회수율을 보여, 밸리데이션 기준인 75 ~ 125%를 만족하였다. 직선성은 검량선과 검체에 대하여 각각 평가하였으며 모두 밸리데이션 기준인 R2 > 0.98을 만족 하였다. 특이성은 크로마토그램 상의 혈청형 특이 피크 확인하였으며, Men W와 Men Y 피크의 분리한계를 평가하였다. 평균 분리도는 1.87, 최저 분리도는 1.59로 나타나 밸리데이션 기준인 1.2 이상을 만족하였다. 반복성과 실험실 내 정밀성은 모든 혈청형에 대하여 %CV가 각각 6% 및 11% 이하로 나타나 기준(20% 이내)를 만족시켰다. 범위는 4.9 ~ 17.2 μg/mL 이었다. 이는 완제의약품 함량 기준 범위인 7 ~ 13 μg/mL의 75 ~ 128%에 해당하여, 기준범위의 80 ~ 120%를 포함한다. 검출한계는 Men W, Men Y, Men C 각각 0.04, 0.06, 0.24 μg/mL이었으며, 검량한계는 0.14, 0.19, 0.73 μg/mL으로 모두 1.0 μg/mL을 넘지 않았다. 기존시험법과 비교 결과, 동시분석법의 경우 약 55시간이 소요되었으며, 기존 시험법은 약 127시간 소요되어, 동시분석법이 기존 시험법에 비해 1/2 미만의 시간이 소요되었다. 또한, 동시분석법의 Men C 회수율이 104%인데 반해, 기존시험법은 69%로 나타나 동시분석법의 정확도가 더 큼을 알 수 있었다. 이와 같은 연구결과는 본 연구과제에서 개발된 동시분석법이 기존시험법을 성공적으로 대신할 수 있으며, 차후 국가출하승인을 위한 시험법으로 사용될 수 있음을 보여주고 있다.

(출처 : 요약문 2p)

Abstract ▼

Meningococcal conjugate vaccine is a vaccine against the invasive disease caused by Neisseria meningitis. The content of polysaccharide antigen, which is the main ingredient of this vaccine, is directly related to the vaccine’s potency. The meningococcal conjugate vaccines licensed in Korea are all

Meningococcal conjugate vaccine is a vaccine against the invasive disease caused by Neisseria meningitis. The content of polysaccharide antigen, which is the main ingredient of this vaccine, is directly related to the vaccine’s potency. The meningococcal conjugate vaccines licensed in Korea are all measuring the polysaccharide content through HPAEC-PAD. Among these, the polysaccharide content test method of meningococcus A,C,W135,Y-CRM197 conjugate vaccine takes a long time with different pre-treatment procedures and analysis conditions depending on sero-group (A,C, and W135/Y). Moreover, for this method, the possibility of contamination of sugar is high and the test is not reproducible. In order to improve the existing content test method, we developed a new simultaneous analysis method for the type C, W135 and Y polysaccharides. For the new test method, pre-treatment (hydrolysis) conditions were established through measurement of recovery rate under various temperature/TFA concentrations. The test method were validated for accuracy, linearity, specificity, precision, range, and robustnes. Accuracy was assessed by diluting the manufacturer's positive standard with the concentration range from 80 percent of the lower limit to 120 percent of the upper limit. The tests showed average recovery rates of 97 to 104 percent for all three types of Hyeongcheong, meeting the validation criteria of 75 to 125 percent. Linearity was evaluated both for the calibration curve and for the specimen, all of which met the validation criteria R2 > 0.98. The specificity was checked for serum-specific peaks on chromatogram and the resolution of Men W and Men Y peaks were evaluated. The mean resolution was 1.87 and the lowest separation was 1.59, meeting the validation criteria of 1.2 or higher.
Repeatability and in-lab precision met the criteria (20% or less) with %CV of 6% and 11% or less for all sero-groups, respectively. The range is 4.9 to 17.2 μg/mL, which corresponds to 75 to 128% of the acceptance limits (7 to 13 μg/mL) of the final vaccine products. For Men W, Men Y, and Men C, the limit of detection (LOD) were 0.04, 0.06 and 0.24 μg/mL, respectively, and the limit of quantification (LOQ) were 0.14 , 0.19 and 0.73 μg/mL, not more than 1.0 μg/mL in all.
Comparing with the existing test method, the simultaneous analysis method required less than one-half of the time. Although the two methods were similar in precision, the recovery rate of Men C of the simultaneous analysis method was 104%, whereas the existing test method was 69%, indicating greater accuracy of the simultaneous method. These findings show that the simultaneous analysis method developed in this study could successfully replace the existing test method and be used as a test method for the national lot release

(출처 : Summary 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 국문 요약문 ... 2
• Summary ... 3
• 목차 ... 4
• 연구개발과제 연구결과 ... 5
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 5
• 제2장 총괄연구개발과제의 국내･외 연구개발 현황 ... 8
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 13
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 27
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 27
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 28
• 제7장 참고문헌 ... 29
• 끝페이지 ... 30