To determine the inhibition of mushroom tyrosinase activity, fresh and dried mugwort, Artemisia princeps was extracted initially with water and ethyl alcohol, and subsequently with hexane, chloroform and ethyl acetate in that order. The highest yield was obtained from the ethyl acetate (15.2%) and h...
To determine the inhibition of mushroom tyrosinase activity, fresh and dried mugwort, Artemisia princeps was extracted initially with water and ethyl alcohol, and subsequently with hexane, chloroform and ethyl acetate in that order. The highest yield was obtained from the ethyl acetate (15.2%) and hexane (15.5%) fraction of the ethanolic extract of fresh and dried mugwort, respectively. For all fractions tested, the inhibition of tyrosinase activity by fresh mugwort was higher than that of dried mugwort, and the inhibition ratio of tyrosinase activity was 98.9% in the chloroform fraction and 96.7% in the hexane fraction.
To determine the inhibition of mushroom tyrosinase activity, fresh and dried mugwort, Artemisia princeps was extracted initially with water and ethyl alcohol, and subsequently with hexane, chloroform and ethyl acetate in that order. The highest yield was obtained from the ethyl acetate (15.2%) and hexane (15.5%) fraction of the ethanolic extract of fresh and dried mugwort, respectively. For all fractions tested, the inhibition of tyrosinase activity by fresh mugwort was higher than that of dried mugwort, and the inhibition ratio of tyrosinase activity was 98.9% in the chloroform fraction and 96.7% in the hexane fraction.
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문제 정의
본 연구는 자연 쑥을 이용해 melanin 과잉 생합성의 문제 점인 피부노화 및 갈변화에 관련된 tyrosinase 활성을 저해함 으로 미백제의 개발을 할 수 있을거라 사료되어 사용한 쑥의 건조상태, 추출 용매별 및 유기용매별 분획에 따르는 tyrosinase 활성 저해를 측정하였다.
제안 방법
Melanin 생합성에 관련된 tyrosinase 저해활성을 생 쑥과 건 조 쑥 용매 추출물로부터 검색하였다. 쑥은 ethanol, hexane, chloroform, ethyl acetate 용매 맟 열수 추출을 하였고, 생 쑥 의 ethanol 추출물의 ethyl acetate 분획과 건조 쑥의 ethanol 추출물의 hexane 분획에서 회수율은 각각 15.
Tyrosinase 효소 활성의 억제는 Jung 등(6)의 방법을 변형 하여 사용하였다 L-DOPA 용액(0.7 mL) 및 시료 용액(0.2 mL)의 혼합액에 효소액(0.1 mL, 15.7 units/ml)를 첨가하여 30℃에서 1분간 반응시켜 475 nm에서 흡광도(UV-Vis 160A spectrophotometer, Shimadzu) 를 측정 후 다음의 식에 의해 tyrcsinase 효소 활성 억졔윤을 구하뗬다. 각 반응은 3회 이상 측정하였다.
용매 분획을 위하여 건조된 5 g의 수용성 및 에탄올 조추 출믈을 500 mL의 증류수에 녹였다. n-Hexane 500 mL을 가 하여 용매 분획한 다음 농축 후 동결건조하였다 남아있는 수용성 층을 상기와 같은 방법으로 chlorofonn을 첨가하여 chloroform 분획을 얻었다. 남아 있는 수용성 증에 동량의 ethyl aceta【e를 첨가하여 ethyl acelate 분획을 얻었다.
에탄올 추출은 쑥 200 g에 600 mL의 95% ethanol을 첨가한 다음 80℃에서 io시간 동안 추출하였다. 각 추출물을 여과지(Toy。filter No. 1)토 여과 후 감압농축(Eyela N-N)하여 동결건조(Bondiro, llsin) 하였다.
n-Hexane 500 mL을 가 하여 용매 분획한 다음 농축 후 동결건조하였다 남아있는 수용성 층을 상기와 같은 방법으로 chlorofonn을 첨가하여 chloroform 분획을 얻었다. 남아 있는 수용성 증에 동량의 ethyl aceta【e를 첨가하여 ethyl acelate 분획을 얻었다. 각각의 용매 분획과 남은 수용성층을 농축한 다음 동결건조하 였다(Figitre 1).
생 쑥과 건조 쑥을 증류수 또는 에탄올을 용매로 사용하여 추출하였다. 열수 추출은 쑥 200 g에 증류수 600 mL을 첨가 한 후 121笆에서 3시간 동안 추출하였다.
대상 데이터
Tyrosinase 효소 활성을 측정용 mushroom tyrosinase는 Fluka 사예서, L-DOPA, 및 dimethyl sulfoxide(DMSO)는 Sigma사예 서 구입하여 사용하였다. 추출 및 분획에 사용된 ethyl alcohol, n-hexane, chloroform(CHCl3) 및 ethyl acetate(EtOAc) 는 국산 일급 시약을 구입하여 사용하였다
각각의 용매 분획과 남은 수용성층을 농축한 다음 동결건조하 였다(Figitre 1). 각각의 건조 분획을 농도가 10 mg/mL이 되 도록 DMSO에 녹여 tyrosinase 활성을 억제하는 시료로 사용하였다.
경주시 인근 야산에서 채취한 쑥을 열수 추출과 ethanol 추출하여 감압. 농축하고 동결건조시켰다 Hexane, chloroform, ethyl acetate의 용매 순서로 분획하여 얻은 용매별 회수율은 Table 1에 보는 바와 같다.
쑥은 2000년 4월 경주시 석장동 인근 야산에서 채취하여 증류수로 세척한 다음 키친 타올로 물기를 잘 닦아 생 쑥의 재료로 사용하였으며, 이 생 쑥을 105 ℃ 의 건조기에서 하루 동안 건조시켜 수분을 제거한 다음 건조 쑥의 재료로 사용하였다.
Tyrosinase 효소 활성을 측정용 mushroom tyrosinase는 Fluka 사예서, L-DOPA, 및 dimethyl sulfoxide(DMSO)는 Sigma사예 서 구입하여 사용하였다. 추출 및 분획에 사용된 ethyl alcohol, n-hexane, chloroform(CHCl3) 및 ethyl acetate(EtOAc) 는 국산 일급 시약을 구입하여 사용하였다
성능/효과
5%로 가장 높았다. 각 용매 추출물의 tyrosinase 활성 저해율은 건 조 쑥 추출물보다 생 쑥 추출물이 더 높았고 생 쑥의 ethanol 추출물의 chloroform 분획과 hexane 분획에서 각각 98.9%와 96.7%로 큰 저해활성을 가졌다
전반적으로 생 쑥이 건조 쑥에 비하여 조추출물 및 각 용매 분획에서 tyrosinase 활성이 더 많이 저해되었다. 생 쑥의 열수 추출물과 각 용매 분획에서 tyrosinase 효소활성 저해는 크게 차이가 없었으나, 에탄올 추출물의 경우 hexane 및 chloroform 용매 분획의 tyrosinase 효소활성은 각각 96.7%와 98.9%로 매우 우수하였다
Melanin 생합성에 관련된 tyrosinase 저해활성을 생 쑥과 건 조 쑥 용매 추출물로부터 검색하였다. 쑥은 ethanol, hexane, chloroform, ethyl acetate 용매 맟 열수 추출을 하였고, 생 쑥 의 ethanol 추출물의 ethyl acetate 분획과 건조 쑥의 ethanol 추출물의 hexane 분획에서 회수율은 각각 15.2%와 15.5%로 가장 높았다. 각 용매 추출물의 tyrosinase 활성 저해율은 건 조 쑥 추출물보다 생 쑥 추출물이 더 높았고 생 쑥의 ethanol 추출물의 chloroform 분획과 hexane 분획에서 각각 98.
후속연구
쑥은 우리나라 전국 지역에 자생하는 다년생 식물로 지혈, 위장병, 구충, 천식, 부인병, 악취제거 등의 식용 및 약용으로 널리 사용되어 왔다 현재까지 쑥에 관한 연구는 항균력에 관한 보고(8, 9)와 암세포 증식을 억제하는 효과와 항돌연변이 활성이 있다는 보고(10, 11)가 있으나, tyrosinase의 효소 활성을 억제한다는 보고는 없었다. 쑥이 tyrosinase 효소활성을 억 제한다는 본 연구 결과가 사람의 melanin 색소 형성에 관련 되는 tyrosinase 효소 활성을 억제할 경우, 미용제(미백제)로의 사용이 가능하리라 판단되어 추후 계속적으로 연구를 수행할 예정이다.
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