[논문]율피추출물의 사람 비만세포주 사이토카인 발현 억제 효과

전동하; 장영아; 김희영; 김수진; 김진철; 김세현; 권대준; 한상익; 이진태

doi:10.6116/kjh.2013.28.2.55.

[국내논문] 율피추출물의 사람 비만세포주 사이토카인 발현 억제 효과
Inhibitory Effects of Chestnut Inner Shell Cytokine Production from Human Mast Cell Line 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.28 no.2, 2013년, pp.55 - 60

전동하 (대구한의대학교 화장품약리학과) , 장영아 (대구한의대학교 화장품약리학과) , 김희영 (대구한의대학교 화장품약리학과) , 김수진 (대구한의대학교 화장품약리학과) , 김진철 (튜링겐코리아) , 김세현 (국립산림과학원) , 권대준 (대구테크노파크 바이오헬스융합센터) , 한상익 (국립식량과학원) , 이진태 (대구한의대학교 화장품약리학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Atopic dermatitis (AD) is a chronic inflammatory skin disease characterized by eczematous inflammtion of the skin. The chestnut inner shell extracts (CI) has been used as a cosmetic material for a long time in Korea. However, the precise anti-allergy effects of CI have yet to be clearly elucidated. In this study, we attempted to evaluate the effect of CI on mast cell-mediated allergy inflammation. Methods : To find the anti-allergy and inflammatory effect of CI, we investigated the inhibitory effect of CI on the production of inflammatory mediators using by enzyme-linked immunosorbent assay in phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) plus calcium ionophore (A23187) stimulated-human mast cell (HMC-1). Results : In this study, we found that CI did not show cytotoxic effect at up to 10 ug/ml on HMC-1. CI inhibited the production of tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$, interleukin (IL)-6 and IL-8 in stimulated HMC-1. Maximal rate of TNF-${\alpha}$, IL-6 and IL-8 inhibition by CI (10 ug/ml) were about 47.6%, 44.1% and 22.5% respectively. In addition, we showed that Fr.3 isolated from n-Butyl alcohol layer of CI attenuated the production of TNF-${\alpha}$, IL-6 and IL-8 in HMC-1. Conclusion : Taken together, the findings of this study provide us with a novel insight action of CI as a potential molecule for use in the treatment of allergic inflammation diseases.

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문제 정의

. 이에 본 연구는 한방화장품의 염증개선 화장품소재로 활용 가능성을 확인하고자 율피 추출물 및 용매 분획물의 염증성 사이토카인 분비량을 측정하였다.

제안 방법

율피 추출물의 세포독성여부를 판단하기 위하여 실험대상이 HMC-1세포주를 이용하여, MTT 법으로 측정한 결과 율피추출물에서 100µg/ml, 50µg/ml의 농도에서 각 43%, 64%의 세포생존율을 나타냄에 따라 세포독성에 의한 영향을 배제하기위하여 이후 실험은 10 ug/ml이하의 농도에서 수행하였으며, 용매분획물과 Diaion HP-20 column chromatography로 부터 얻어진 분리물은 세포독성에 의한 영향을 배제하기위하여 이후 실험은 10 µg/ml이하의 농도에서 실험을 수행하였다.
A23187(200µM)은 칼슘 이온 운반체이고, PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)(50nM)는 PGE2의 합성을 촉진하여 결과적으로 골흡수를 증가시켜 혈장 칼슘 항상성 조절에 중요한 생리적 기능을 가지며, PKC 활성 촉진제의 역할을 한다. 염증에 관여하는 cytokine을 측정하기 위하여 HMC-1 cells에 PMA/A23187와 시료를 처리한 후, 세포 배양액을 회수하여 TNF-α, IL-6, IL-8을 측정하였다. 율피추출물, 용매분획물과 분리물 모두에서 TNF-α, IL-6, IL-8의 분비량은 억제되었지만 IL-8의 경우 억제량이 다른 cytokine보다 억제 효과가 감소하는 것으로 나타났다.

대상 데이터

본 실험에 사용된 율피는 2009년 수확한 것을 (주)푸드웰에서 제공받아 물로 세척하여 음건 후 사용하였다. 아세톤 추출물의 경우 70% 아세톤을 시료중량의 10배의 양을 가하여 실온에서 24시간 침지하여 상층액과 침전물을 분리하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출하여 시료를 획득하였다.
세포배양에 필요한 Iscove’s Modified Dulbecco’s Media (IMDM)은 HyClon (Utah, USA) 제품을 사용하였으며, Fetal bovine serum (FBS)는 Gibco (Grand Island, NY, USA) 제품을 구입하여 사용하였다. 실험에 사용한 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), calcium ionophore (A23187), 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl] 2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT)는 Sigma (St.
세포배양에 필요한 Iscove’s Modified Dulbecco’s Media (IMDM)은 HyClon (Utah, USA) 제품을 사용하였으며, Fetal bovine serum (FBS)는 Gibco (Grand Island, NY, USA) 제품을 구입하여 사용하였다. 실험에 사용한 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), calcium ionophore (A23187), 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl] 2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT)는 Sigma (St. Louis, MO, USA) 제품을 구입하여 사용하였다. 또한 cytokine 측정에 필요한 human IL-6, IL-8과 TNF-α ELISA Set 는 BD Biosciences (San Diego, USA)에서 구입하여 사용하였다.
Louis, MO, USA) 제품을 구입하여 사용하였다. 또한 cytokine 측정에 필요한 human IL-6, IL-8과 TNF-α ELISA Set 는 BD Biosciences (San Diego, USA)에서 구입하여 사용하였다.
본 실험에 이용한 사람 비만세포주 HMC-1 한국한방산업진흥원에서 분양받아 세포의 배양은 10% FBS를 첨가한 IMDM배지를 사용하였으며, 37℃, 5% CO₂ incubator에 적응시켜 계대 배양하였다.

이론/모형

시료를 처리한 세포는 다시 PMA (50 nM)와 A23187 (2 µM)을 첨가하여 12시간 동안 반응시킨 후 배양 상층액을 수거하였다. 상층액에 포함된 TNF-α, IL-6, IL-8의 양은 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 법을 이용하여 측정하였다. 즉, 일차항체 TNF-α, IL-6, IL-8을 coating buffer (0.

성능/효과

1. 율피추출물 및 Diaion HP-20 column chromatography로 부터 얻어진 분리물이 비만세포주의 생존율에는 유의적으로 영향을 나타내지 않았다.
2. 사이토카인 분비량 측정에서 율피 에탄올 추출물과 Fr. 3 분리물이 40% 이상의 TNF-α와 IL-6의 발현을 억제하였다.
3. IL-8의 분비량 측정에서 율피 에탄올 추출물, n-BuOH 분획물과 Fr. 3 분리물이 20% 이상의 발현 억제율을 나타내었다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	밤은 무엇인가?	et Z.)은 다년생 나무인 밤나무(Castane crenata Lieb. et. Zucc)의 열매로 갈색의 껍질로 쌓여있으며 종피를 벗긴 종자를 건조해 사용하는데 과육은 대부분 전분이고 소량의 단백질과 지방을 함유하고 있다1). 이를 한약재로 건율(乾栗), 황율(黃栗)이라 한다.
	비만세포의 분포 위치와 알레르기 반응 간 연관성은 어떠한가?	비만세포는 피부, 호흡기, 위장관의 점막, 혈관 주위, 림프관 주위 등 전신의 장기에 분포하고 있으며 알레르기성 비염, 천식, 아토피성 피부염 등 알레르기 반응의 유발에 필수적인 세포로 알려져 있다8). 비만세포는 세포막에 있는 여러 가지 수용체를 통해서 활성화된다9).
	PKC는 면역반응에서 어떤 역할을 하는가?	PKC (protein kinase C)는 세포활성과 기능에 주요한 역할을 하고 있는 것으로 여러 연구를 통해 알려져있다17). 특히 면역반응에 있어서 림프구의 생존과 활성 분화 등 많은 부분에서 중요한 역할을 하고있다. 예를들면 PKC는 B 세포와 관련한 면역 반응에 관여하는 것으로 알려져 있으며 B 세포 수용체의 자극을 통한 B 세포 활성에도 관여하며, PKC가 B 세포 면역반응을 특이적으로 조절하는 기전이 밝혀지면서 B 세포와 관련된 자가면역질환 치료를 위한 새로운 표적 신호전달분자로 제시되고있다18).

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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