와송 추출물의 면역기능 개선 효과 및 안전성 연구: 단일기관, 무작위배정, 이중눈가림, 위약대조 비교, 임상연구 프로토콜 Research on Immune Enhancing Effect and Safety of Wasong (Orostachys japonicus) Extract: Study Protocol for a Single Center, Randomized, Double-blind, Placebo-controlled, Clinical Trial원문보기
Objectives : This trial aimed to determine if Wasong (Orostachys japonicus) extract can enhance immune system and is safe enough to be approved as a health functional food. Methods : Total 62 people, aged 45 and older, will be recruited to participate in a randomized, double-blind, placebo-controlle...
Objectives : This trial aimed to determine if Wasong (Orostachys japonicus) extract can enhance immune system and is safe enough to be approved as a health functional food. Methods : Total 62 people, aged 45 and older, will be recruited to participate in a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. This study will compare Wasong extract and placebo. Wasong group will take 1g of Wasong extract, once a day, for 8 weeks. Placebo group will take 1g of crystalline cellulose as placebo, once a day, for 8 weeks. Outcomes will be measured at the baseline, the end of 4th week, and 8th week. Primary outcomes are the ratio of NK cells/total lymphocytes and the ratio of T-helper cells/T-suppressor cells. Secondary outcomes are total white blood cell count, the ratio of neutrophils, lymphocytes, and monocytes in total leukocytes, the ratio of total T cells, T-helper cells, T-suppressor cells, and B cells to lymphocytes, the amount of blood IgM, IgG, IgA, and cytomegalovirus (CMV) IgG, and blood metabolite target &global analysis. Results : This trial was approved by institutional review board of Pusan National University Korean Medicine Hospital (registry number: 2016006), and registered in Clinical Research information Service, one of WHO International Clinical Trials Registry Platform (registry number: PRE20161006-002). Recruitment opened in February 2017 and is supposed to be completed by August 2017. The result is expected to be published by June 2018. Conclusion : This trial will provide clinical information to determine the efficacy and safety of Wasong in enhancing immune system of middle-aged and older people.
Objectives : This trial aimed to determine if Wasong (Orostachys japonicus) extract can enhance immune system and is safe enough to be approved as a health functional food. Methods : Total 62 people, aged 45 and older, will be recruited to participate in a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. This study will compare Wasong extract and placebo. Wasong group will take 1g of Wasong extract, once a day, for 8 weeks. Placebo group will take 1g of crystalline cellulose as placebo, once a day, for 8 weeks. Outcomes will be measured at the baseline, the end of 4th week, and 8th week. Primary outcomes are the ratio of NK cells/total lymphocytes and the ratio of T-helper cells/T-suppressor cells. Secondary outcomes are total white blood cell count, the ratio of neutrophils, lymphocytes, and monocytes in total leukocytes, the ratio of total T cells, T-helper cells, T-suppressor cells, and B cells to lymphocytes, the amount of blood IgM, IgG, IgA, and cytomegalovirus (CMV) IgG, and blood metabolite target &global analysis. Results : This trial was approved by institutional review board of Pusan National University Korean Medicine Hospital (registry number: 2016006), and registered in Clinical Research information Service, one of WHO International Clinical Trials Registry Platform (registry number: PRE20161006-002). Recruitment opened in February 2017 and is supposed to be completed by August 2017. The result is expected to be published by June 2018. Conclusion : This trial will provide clinical information to determine the efficacy and safety of Wasong in enhancing immune system of middle-aged and older people.
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문제 정의
면역 기능이 저하될수록 cytomegalovirus (CMV)와 같은 지속감염 바이러스의 활성화 빈도가 높아져 관련 항체가 증가하는 것으로 알려져 있으며, CMV 경우 CMV 항체 역가가 높을수록 생존기간이 감소한다는 연구도 발표된 바 있다28,29). 따라서, 본 연구에서는 위에서 언급한 노화의 과정에서 잘 관찰되는 면역기능의 변화를 확인하기 위해 NK cell, T-helper cell, T-suppressor cell 및 CMV IgG의 변화를 관찰하기로 하였다. 또한, 면역세포 및 면역글로불린의 전체적 변화 가능성도 고려하여 호중구, 림프구, 단핵구, IgM, IgG, 및 IgA의 변화도 측정하기로 하였다.
이는 프로토콜을 사전에 공개함으로써 과학적이고 윤리적인 임상실험을 수행하게 하고, 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있을 것으로 기대되기 때문이다. 본 연구 역시 연구 과정의 투명성을 확보하고 그 결과의 신뢰성을 제고하고자 프로토콜을 국립보건연구원 임상연구정보서비스(Clinical Research information Service; CRiS)에 등록하였으며 (registry number: PRE20161006-002), 온라인 등록 과정에서 공개되지 않은 상세한 세부 항목에 대해서도 충분히 밝혀 두기 위해 이 원고를 게재하고자 하였다.
본 연구는 단일기관, 무작위배정, 이중눈가림, 위약대조 비교 인체적용시험으로, 본 인체적용시험에 참여할 것을 서면으로 동의하면 스크리닝 후 선정기준에 부합하는 시험대상자가 무작위 배정 받아 8주간 시험식품(와송 추출물) 또는 대조식품(결정 셀룰로오즈)을 섭취하여 유효성 및 안전성을 평가한다. 와송 추출물 투여군은 와송 추출물 1g을 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취하며, 대조군은 동일한 무게의 결정 셀룰로오즈 1g를 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다.
본 연구는 와송 추출물의 면역기능 개선 효과 및 안전성을 평가하기 위한 임상연구이다. 평가변수의 통계적 가설검정은 양측검정으로 하였으며, 유의수준은 5%를 기준으로 하였다.
, 이를 입증할 만한 인체적용 시험은 아직 시행되지 않았다. 이에 본 연구는 무작위 배정을 통해 와송 추출물 투여군과 결정 셀룰로오즈 대조군을 비교하여 와송 추출물이 인체 면역기능 개선에 어떠한 영향을 미치는지 평가하며, 동시에 와송 추출물의 안전성을 평가하기 위한 임상연구를 계획하였다.
인체적용시험 중에 발생한 이상반응을 조사하여 증례기록양식의 이상반응 양식에 증상, 증상의 발현기간(시작 및 종료 시점), 중증도, 중대한 이상반응의 여부(예/아니오), 총 투약기간, 마지막 투약일 및 투약시간, 시험식품과의 인과관계, 이상반응에 관련하여 취해진 조치, 이상반응의 진행상황 등에 관하여 기록한다.
제안 방법
대조군은 결정 셀룰로오즈 1g을 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다.
와송 추출물 투여군은 와송 추출물 1g을 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다. 대조군은 동일한 무게의 결정 셀룰로오즈를 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다(Figure 1).
따라서, 본 연구에서는 위에서 언급한 노화의 과정에서 잘 관찰되는 면역기능의 변화를 확인하기 위해 NK cell, T-helper cell, T-suppressor cell 및 CMV IgG의 변화를 관찰하기로 하였다. 또한, 면역세포 및 면역글로불린의 전체적 변화 가능성도 고려하여 호중구, 림프구, 단핵구, IgM, IgG, 및 IgA의 변화도 측정하기로 하였다.
본 연구는 단일기관, 무작위배정, 이중눈가림, 위약대조 비교 인체적용시험으로, 본 인체적용시험에 참여할 것을 서면으로 동의하면 스크리닝 후 선정기준에 부합하는 시험대상자가 무작위 배정 받아 8주간 시험식품(와송 추출물) 또는 대조식품(결정 셀룰로오즈)을 섭취하여 유효성 및 안전성을 평가한다. 와송 추출물 투여군은 와송 추출물 1g을 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취하며, 대조군은 동일한 무게의 결정 셀룰로오즈 1g를 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다.
등록된 피험자는 와송 추출물 투여군 또는 결정 셀룰로오즈 대조군에 무작위 배정된다. 와송 추출물 투여군은 와송 추출물 1g을 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다. 대조군은 동일한 무게의 결정 셀룰로오즈를 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다(Figure 1).
인구통계학적 자료 및 기타 치료 전 피험자의 특성에 대하여 각 시험군 별로 연속형 자료는 평균, 표준편차, 최소최대치 등을 제시하고 범주형 자료는 빈도표를 제시한다. 시험군과 대조군간 통계학적 차이가 있는지 검정하기 위해, 연속형 자료는 independent t-test로 분석하고.
인체적용시험담당자는 이상반응을 고려하여 모든 추가정보를 기록하여야 한다. 중대한 이상반응을 포함하여 모든 이상반응은 이상반응이 소실될 때까지 추적조사 한다. 이때 인체적용시험책임자는 더 이상의 추적조사가 필요한지를 판단하여야 하며 마지막 관찰결과와 일시를 기록한다.
대상 데이터
이 시험에서는 무작위 배정된 대상자 중 주요한 선정, 제외기준을 위배하거나, 인체적용시험용 식품을 단 한번이라도 투여 받지 못하거나, 무작위 배정 이후 자료가 전무한 경우 한해서는 주 분석에서 제외할 수 있다. Per-protocol analysis 대상은 intention-to-treat analysis에 포함되는 대상자 중 인체적용시험계획서에 따라 본 연구를 성공적으로 완료한 대상자를 대상으로 한다. 이 시험에서는 시험 종료 시 전체 복약순응도가 80% 이상인 경우를 포함한다.
만 45세 이상의 성인 남녀. 면역기능이 자연 노화로 저하되는 현상을 면역 노화(immunosenescence)라고 하며, 일반적으로 중년기부터 이러한 변화가 시작 되는 것으로 알려져 있어, 중년기의 시작인 45세를 피험자 선정 기준으로 하였다12).
만 45세 이상의 성인 남녀로서 연구 기간 동안 추적 관찰을 위한 방문과 혈액채취를 포함하여 본 연구에서 측정하고자 하는 검사가 가능한 자이며, 본 임상시험에 자발적으로 참여를 결정하고, 연구 참여 동의서(informed consent)에 서명한 경우 피험자로 선정한다.
와송 투여군은 와송 추출물 1g을 8주간 1일 1회, 아침 또는 저녁에 1회 1포를 섭취한다. 실험에 사용된 와송 추출물은 건조된 국내산 와송을 열수추출, 여과, 농축, 동결건조 및 분말화하는 공정으로 제조하며, 지표성분인 gallic acid를 1%함유하도록 규격화하였다. 식품 및 식품첨가물 제조기준에 따라 관련 제조업 허가를 보유한 전문 제조업체에서 생산 및 관리하며, 생산된 원료는 확립된 기준규격에 맞는지 자가시험 또는 공인기관 분석을 통하여 확인 관리한다.
5로 설정하였다14,15). 위의 설정을 바탕으로 아래와 같이 대상자 수를 계산하면, 본 연구에 필요한 피험자수는 군당 약 25명이며, 탈락율을 20% 이내로 고려하여 각 군당 등록할 대상자 수를 31명으로 산정하며, 총 대상자수를 62명으로 설정하였다.
피험자는 전단지, 신문 광고, 부산대학교한방병원 홈페이지 등을 통해 모집한다.
데이터처리
이상반응 빈도 차이는 chi-square test로 분석한다. 단, 이상 반응이 양적 변수로 측정 가능한 경우는 independent t-test를 함께 시행한다.
시험군과 대조군간 통계학적 차이가 있는지 검정하기 위해, 연속형 자료는 independent t-test로 분석하고. 범주형 자료는 chi-square test를 이용하여 분석한다.
인구통계학적 자료 및 기타 치료 전 피험자의 특성에 대하여 각 시험군 별로 연속형 자료는 평균, 표준편차, 최소최대치 등을 제시하고 범주형 자료는 빈도표를 제시한다. 시험군과 대조군간 통계학적 차이가 있는지 검정하기 위해, 연속형 자료는 independent t-test로 분석하고. 범주형 자료는 chi-square test를 이용하여 분석한다.
시험의뢰기관(에스에프씨 기능성식의약임상지원센터)에서 SPSS v23을 사용하여 무작위배정 하였다.
안전성 평가는 인체적용시험에 참여하여 최소한 1회 이상 인체적용시험용 식품을 복용한 대상자로부터 얻어진 자료(이상반응, 실험실검사, 활력징후, 진단검사의학 검사 결과)를 모두 분석한다. 이상반응 빈도 차이는 chi-square test로 분석한다. 단, 이상 반응이 양적 변수로 측정 가능한 경우는 independent t-test를 함께 시행한다.
유효성 평가에서, 각 평가항목들은 각 군 별로 평균±표준편차로 제시한다. 치료군과 대조군에 대해 Baseline 값과 종료 시 값의 차이를, 각 군의 Baseline 값을 covariate로 설정하고 각 군을 fixed factor로 설정하는 ANCOVA 검정을 시행한다.
본 연구는 와송 추출물의 면역기능 개선 효과 및 안전성을 평가하기 위한 임상연구이다. 평가변수의 통계적 가설검정은 양측검정으로 하였으며, 유의수준은 5%를 기준으로 하였다. 제 2 종 오류는 0.
성능/효과
또, 대조군에 비해 백혈구, 임파구, 과립구, 및 단핵구 수의 감소가 완화되었으며, 면역 관련 인자들인 TNF-α, IL-2, 및 INF-γ를 증가시켰다 (연구 결과는 아직 출판되지 않았으며, 곧 관련 저널에 게재 예정임).
또한 와송의 면역 및 항암 효과를 관찰한 기존 연구에서, 와송은 생쥐의 비장 및 흉선세포의 생존율을 증가시켰으며, lymphocyte 아집단분석 결과 비장 T cell을 유의성 있게 증가시켰는데 비장 T cell 중의 CD4+ cell 및 CD8+ cell이 모두 증가되었고, 혈청 γ−interferon의 생성을 현저하게 증가시켰다.
본 임상연구를 계획하기 전 시험의뢰기관(에스에프씨 기능성 식의약임상지원센터)에서 수행한 전임상연구에서도 와송의 다양한 면역기능개선 효능이 확인되었다. 와송이 면역저하물질인 cyclophosphamide(Cy)의 독성에 의한 SD rat 비장세포 증식률에 미치는 영향을 분석한 결과, 비장세포 증식률은 와송 처리농도에 비례하여 증가하였다. 또 피부암세포(B16F10 melanoma cell line)를 이용한 실험에서는 와송 추출물이 농도 의존적으로 피부암세포의 증식을 억제하는 것으로 나타났다.
후속연구
피험자 모집은 2017년 2월부터 시작되었고, 2017년 8월 이내에 완료 예정이며, 그 결과는 수개월 이내에 정리하여, 다음 연도 상반기 내에 발표할 계획이다. 와송의 경우 아직 인체를 대상으로 한 연구가 없었던 상황에서 본 프로토콜을 바탕으로 임상 연구가 완료되면, 와송의 면역기능개선 효능과 안전성에 대한 유용한 정보를 얻을 수 있을 것으로 기대되며, 향후 관련 약재나 식품으로서의 활용에 도움이 될 것으로 기대된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
와송이란 무엇인가
와송(Wasong, Orostachys japonicus A. Berger)은 돌나무과(Crassulaceae) 또는 경천과(景天科)의 여러해살이식물로 오래된 기와지붕 위나 깊은 산의 바위 위에 자라고, 잎은 살찐 버들잎 모양으로 줄기를 둘러싸고 무더기로 자라나는데, 기와지붕 위에서 자라는 모양이 소나무 잎이나 꽃을 닮아서 우리나라에서는 와송 또는 바위솔이라고 불린다. 와송은 육질(肉質)의 다년생 초본으로 10∼30cm 쯤 곧게 자라며 꽃이 피고 열매를 맺으면 고사하는 특징이 있으며 여름부터 가을에 걸쳐 채취하며 뿌리를 제거한 전초를 햇볕에 말려 약용으로 사용한다7,8).
와송은 우리나라에서 오래전부터 어떤 효능으로 사용되었는가
와송은 우리나라에서 오래전부터 민간요법으로 간염, 종기에 대한 면역작용, 지혈제 및 암치료제 등으로 사용되어 왔으며, 최근 와송에 존재하는 phytochemicals로 sterol, triterpenoid류, flavonoid 및 phenol 화합물 등이 분리되었고, 소화기 계통의 암에 효과가 좋은 것으로 알려지면서 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다9). 또한, 안전성 측면에서 한국 식품의약품안전처 식품원재료데이터베이스에 식품사용 가능 품목으로 등재되어 있다10)
노화에 따라서 면역력 저하가 일어나는 이유는 무엇인가
인체의 면역 시스템에서 특히 NK cell은 면역 감시 체계를 조절하여 암의 발생이나 바이러스 감염을 억제하는데 중요한 역할을 한다25). 젊은 사람들과 고연령자들을 비교하였을 때 NK cell의 활동성은 고연령자들에서 더 저하되며, 따라서 NK cell의 비율 및 활동성을 상승시키는 것은 고연령자들의 건강을 지키고 질병을 예방하는데 중요한 역할을 한다고 한다26). 한편 노화에 따른 면역력 저하에서 T-helper cell (CD4+)/ T-suppressor cell (CD8+) 비율이 낮아지는 현상이 나타나는 것으로 알려져 있는데, 고연령자들을 대상으로 한 추적연구에서 CD4+ 비율이 낮고 CD8+ 비율이 높을수록 장기 생존률이 낮은 것으로 확인되었다27).
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