연구는 식품으로부터 Shigella spp.를 분리하기 위해서 현재 사용되고 있는 증균배지를 대상으로 증균성능을 비교하였다. GN broth, Shigella broth, SF broth, SC broth 총 4개의 증균배지를 비교하였다. S. sonnei에 대해 각 접종 수준에 대한 성장은 Shigella broth에서 $10^1$ cfu/mL 낮은 수준의 존재 시에도 성장이 확인되었다. 분리배지에서 거의 구분이 되지 않는 Morganella spp.에 대한 증균은 Shigella broth를 사용할 경우 성장이 저해되었다. 식품을 대상으로 한 S. sonnei의 증균성능은 돼지고기에서 GN broth와 SF broth가 높은 증균능력을 보였으며 소고기에서는 GN broth에서의 증균능력이 높게 나타났으나 Shigella broth에서 증균능력이 높지 않았다. 실험에 사용된 배지는 식품 종류에 따라 증균되는 특성이 상이하므로 식품에서 Shigella spp.를 분리하고자 할 경우 우선적으로 식품 특성을 고려하여 증균배지를 선택하는 것이 바람직할 것으로 생각되었다.
연구는 식품으로부터 Shigella spp.를 분리하기 위해서 현재 사용되고 있는 증균배지를 대상으로 증균성능을 비교하였다. GN broth, Shigella broth, SF broth, SC broth 총 4개의 증균배지를 비교하였다. S. sonnei에 대해 각 접종 수준에 대한 성장은 Shigella broth에서 $10^1$ cfu/mL 낮은 수준의 존재 시에도 성장이 확인되었다. 분리배지에서 거의 구분이 되지 않는 Morganella spp.에 대한 증균은 Shigella broth를 사용할 경우 성장이 저해되었다. 식품을 대상으로 한 S. sonnei의 증균성능은 돼지고기에서 GN broth와 SF broth가 높은 증균능력을 보였으며 소고기에서는 GN broth에서의 증균능력이 높게 나타났으나 Shigella broth에서 증균능력이 높지 않았다. 실험에 사용된 배지는 식품 종류에 따라 증균되는 특성이 상이하므로 식품에서 Shigella spp.를 분리하고자 할 경우 우선적으로 식품 특성을 고려하여 증균배지를 선택하는 것이 바람직할 것으로 생각되었다.
The object of this study was to compare the performance of commercial enrichment media used for Shigella spp. A total of four enrichment media, Gram negative (GN) broth, Shigella broth (SB), selenite-F (SF) broth, and selenite cystine (SC) broth, were tested. When S. sonnei was inoculated into each ...
The object of this study was to compare the performance of commercial enrichment media used for Shigella spp. A total of four enrichment media, Gram negative (GN) broth, Shigella broth (SB), selenite-F (SF) broth, and selenite cystine (SC) broth, were tested. When S. sonnei was inoculated into each enrichment broth at 10 cfu/mL of concentration, the highest growth was observed in Shigella broth. Morganella spp., which was not differentiated in selective agar of Shigella spp. thus can be counted as false positive, did not grow in Shigella broth in enrichment step. When S. sonnei was artificially inoculated into pork, it was mostly recovered through an enrichment process with GN broth and SF broth. However, in the case of beef, S. sonnei was mostly recovered with GN broth but largely failed with Shigella broth. Therefore, enrichment media for Shigella spp. should be selected by considering the food matrix in order to increase the chance of isolating it from foods.
The object of this study was to compare the performance of commercial enrichment media used for Shigella spp. A total of four enrichment media, Gram negative (GN) broth, Shigella broth (SB), selenite-F (SF) broth, and selenite cystine (SC) broth, were tested. When S. sonnei was inoculated into each enrichment broth at 10 cfu/mL of concentration, the highest growth was observed in Shigella broth. Morganella spp., which was not differentiated in selective agar of Shigella spp. thus can be counted as false positive, did not grow in Shigella broth in enrichment step. When S. sonnei was artificially inoculated into pork, it was mostly recovered through an enrichment process with GN broth and SF broth. However, in the case of beef, S. sonnei was mostly recovered with GN broth but largely failed with Shigella broth. Therefore, enrichment media for Shigella spp. should be selected by considering the food matrix in order to increase the chance of isolating it from foods.
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문제 정의
(18)에 대한 증균배지에서의 성장을 비교 분석하여 식품에서 Shigella spp. 분리를 위한 효율적인 증균배지를 제시하고자 하였다.
제안 방법
Gram negative broth(GN; BD, Le Pont De Claix, France), Shigella broth, selenite-F broth(SF; Oxoid), selenite cystine broth(SC; Oxoid)를 사용하여 실험하였다. GN broth, SF broth, SC broth는 제조회사 manual에 따라 제조하였으며 SF broth, SC broth에는 sodium biselenite(Oxoid)를 4 g/L를 첨가하였다. Shigella broth는 FDA BAM manual에 따라 tryptone 20 g, K2HPO4 2 g, KH2PO4 2 g, NaCl 5 g, glucose 1 g, tween 80 1.
를 분리하기 위해서 현재 사용되고 있는 증균배지를 대상으로 증균성능을 비교하였다. GN broth, Shigella broth, SF broth, SC broth 총 4개의 증균배지를 비교하였다. S.
Gram negative broth(GN; BD, Le Pont De Claix, France), Shigella broth, selenite-F broth(SF; Oxoid), selenite cystine broth(SC; Oxoid)를 사용하여 실험하였다. GN broth, SF broth, SC broth는 제조회사 manual에 따라 제조하였으며 SF broth, SC broth에는 sodium biselenite(Oxoid)를 4 g/L를 첨가하였다.
서울시 정릉동 인근 마트에서 판매되고 있는 돼지고기, 소고기, 새우, 양배추, 양상추, 토마토를 구입하여 실험에 사용하였다. MacConkey agar(MAC; Oxoid), Hektoen enteric agar(HEA; Oxoid)를 이용하여 5회 반복측정 하였다.
Forward primer로는 5'-GCT GGA ACT CAG TGC CT-3' 염기서 열을, reverse primer로는 5'-CCA GTC CGT AAA TTC ATT CT-3' 염기서열을 사용하였다(19). PCR 반응 결과 생겨난 산물은 1.5% agarose gel에 전기영동하여 확인하였다.
Shigella broth는 FDA BAM manual에 따라 tryptone 20 g, K2HPO4 2 g, KH2PO4 2 g, NaCl 5 g, glucose 1 g, tween 80 1.5 mL를 증류수 1 L에 첨가하고 121oC에서 15분간 멸균 후 novobiocin을 0.5 μg/mL 수준으 로 첨가하여 제조하고 실험에 사용하였다.
본 연구는 식품으로부터 Shigella spp.를 분리하기 위해서 현재 사용되고 있는 증균배지를 대상으로 증균성능을 비교하였다. GN broth, Shigella broth, SF broth, SC broth 총 4개의 증균배지를 비교하였다.
실험식품 25 g에 증균배지 225 mL를 첨가하고 37oC에서 24시간 배양한 실험 균주를 cocktail 하여 250 μL를 식품 25 g에 적절히 희석한 후 10～100 cfu/g 수준이 되도록 접종하였 다.
증균배양 후 분리배지에 획선 배양하여 37oC 에서 24시간 배양한 뒤 각 분리배지에 출현할 것으로 예상되 는 특징적인 콜로니 형성 여부로 증균배지 성능을 측정하였다
sonnei를 대상으로 현재 Shigella spp. 증균배지로 사용되고 있는 GN broth, Shigella broth, SF broth와 SC broth에 대한 성능평가 시험을 실시하였다. 증균배지에 접종된 저농도의 S.
증균배지로 사용되고 있는 GN broth, Shigella broth, SF broth와 SC broth에 대한 성능평가 시험을 실시하였다. 증균배지에 접종된 저농도의 S. sonnei의 성장특성을 고찰하였으며 인위적으로 식품에 접종된 균주의 증균을 통한 회수실험을 실시하였다. 또한 Shigella spp.
대상 데이터
Shigella sonnei(KCTC 25931, KCCM 40949, KCTC 9290) 를 tryptic soya broth(TSB; Oxoid, Hampshire, England) 로 37oC에서 24시간 배양한 후 tryptic soya agar(TSA; Oxoid)에 도말 배양하여 형성된 단일 콜로니를 분리하여 실 험에 사용하였다.
서울시 정릉동 인근 마트에서 판매되고 있는 돼지고기, 소고기, 새우, 양배추, 양상추, 토마토를 구입하여 실험에 사용하였다. MacConkey agar(MAC; Oxoid), Hektoen enteric agar(HEA; Oxoid)를 이용하여 5회 반복측정 하였다.
5 μg/mL 수준으로 첨가하여 제조하고 실험에 사용하였다. 실험에 사용된 시약은 Oxoid와 Samchun Pure Chemical(Pyeongtaek, Korea)에서 구입하였다.
데이터처리
각 결과 값은 SPSS software(version 18.00, IBM, New York, NY, USA)을 사용하여 Friedman test에 의하여 5%의 유의수준(p<0.05)에서 검정하였다.
성능/효과
GN broth, Shigella broth, SF broth, SC broth 총 4개의 증균배지를 비교하였다. S. sonnei에 대해 각 접종 수준에 대한 성장은 Shigella broth에서 101 cfu/mL 낮은 수준의 존재 시에도 성장이 확인되었다. 분리배지에서 거의 구분이 되지 않는 Morganella spp.
sibonii는 105 cfu/mL 존재 시 MAC에서 콜로니가 확인되지 않았다. SC broth에서는 M. morganii가 104 cfu/mL 이상으로 존재 시 분리배지에서 콜로니의 성장이 확인되었고 M. sibonii는 101 존재 시에도 콜로니의 성장이 확인되었으나 101 , 105 cfu/mL 존재 시 MAC, HEA에서는 성장이 확인되지 않았다. Table 1의 결과에서 Shigella spp.
sonnei를 10～100 cfu/g로 인위적으로 접종하여 각 증균배지에서 증균시킨 후 분리배지를 이용하여 검출한 뒤 presumptive 콜로니에 대하여 PCR을 이용하여 확인한 결과를 Table 3에 나타내었다. 돼지고기에 접종된 S. sonnei는 GN broth와 SF broth에서 배양 후 각 분리배지에서 5/5 수준으로 콜로니가 확인되었으며 모두 식품 상재균과 함께 성장되었다. Shigella broth, SC broth에서는 HEA 분리배지에서 4/5, 5/5 수준으로 식품 상재균과 함께 성장되었다.
또한, GN broth와 SF broth에서 HEA 분 리배지를 사용하여 증균 시 유의적으로 높은 성능이 확인되 었다(p<0.05).
또한, Shigella broth에서 유의적으로 가장 높은 성능이 확인되었다(p<0.05).
가 101 cfu/mL 수준으로 존재 시에도 분리배지 상으로 콜로니가 확인되었다. 반면, Shigella broth에서는 M. morganii가 106 cfu/mL까지 존재 시에도 모두 각 분리배지상에서 콜로니가 확인되지 않는 것으로 미루어보아 증균배지에서 성장이 억 제되었음을 알 수 있었다. M.
토마토에서는 Shigella broth와 SC broth에서 배양 후 MAC 분리배지에서 식품 상재균과 함께 5/5 수준으로 성장되었다. 본 실험 결과 돼지고기에서는 GN broth와 SF broth가 가장 높은 증균성능을 나타내었으며 소고기에서는 Shigella broth에서 다른 증균배지와 비교하여 낮은 성능을 나타내었다. 이는 식품에 대하여 S.
05). 새우에서는 실험된 모든 증균배지에서 증균시 성장이 높게 확인되었으며 이 중 SC broth에서는 MAC 과 HEA 분리배지에서 S. sonnei의 성장이 5/5 수준으로 확인되었다. 각각 3, 4회는 S.
에 대한 증균은 Shigella broth 를 사용할 경우 성장이 저해되었다. 식품을 대상으로 한 S. sonnei의 증균성능은 돼지고기에서 GN broth와 SF broth가 높은 증균능력을 보였으며 소고기에서는 GN broth에서의 증균능력이 높게 나타났으나 Shigella broth에서 증균능력이 높지 않았다. 실험에 사용된 배지는 식품 종류에 따라 증균되는 특성이 상이하므로 식품에서 Shigella spp.
sonnei만 성장한 경우가 확인되어 높은 증균성능이 있음을 알 수 있었다. 양배추에서는 Shigella broth에서만 증균되었으며 양상추에서는 GN broth와 Shigella broth의 증균성능이 높았다. 토마토에서는 SC broth의 증균성능이 가장 높은 것으로 확인되었다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
증균배지 중 GN broth는 어디에 사용되는가?
GN broth는 APHA와 Nordic Committee on Food Analysis(11)에서 권고하고 있다. GN broth는 일반적으로 그람 음성의 병원성 미생물 검출에 사용 되나 식품으로부터 Shigella spp. 검출 시에도 사용되어진 다. Shigella broth는 질병관리본부(12)와 미국 FDA bacteriological analytical manual(BAM)(13), International Standards for Business, Government(ISO)(14)와 American Public Health Association(APHA)(15)에서 권고하고 있으 며 혐기성 조건에서 배양하고 항생물질로서 0.
Shigella spp.는 혈청에 따라 어떻게 나뉘는가?
Shigella spp.는 혈청형에 따라 S. sonnei, S. flexneri, S. boydii와 S. dysenteriae로 나눌 수 있다(7). 선진국에서는 주로 S.
Shigella spp.란 무엇인가?
장내세균 속 많은 미생물 중 Shigella spp.는 병원성 균으 로 주로 세균성 설사질환을 일으키는 원인균으로 많이 분리 되고 있다(1). 이들은 비위생적인 환경에서 식수나 식품 등 에 오염되어 있기 때문에 식중독을 계절에 큰 관계없이 발생 시킨다(2-5).
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